Gentransfer

Aufnahme von freier DNA aus der DNA durch Bakterien

--> Einbau von DNA ins Genom ---> Veränderung des Phänotyps

Übertragung von DNA von Bakteriophagen oder Viren in ein Bakterium

über Zelleigenen Replikationmaschinerei vermehrt --> Virus Partikel hergestellt und mittels Zelllyse freigesetzt

Aufnahme von DNA in Säugertierzellen

transient

• nicht in Wirts-DNA eingebaut
• Expression nur kurzzeitig
• wird bei Zellteilungen ausgewaschen
• große Anzahl an Proben in kurzer Zeit

stabil

• ins Genom eingebaut
• stabil, aber geringere Effizienz

Die Fähigkeit einer Zelle DNA aus der Umgebung aufzunehmen.

Kann natürlich sein, muss aber meist im Labor durch physikalische oder chemische Methoden induziert werden (auch E.coli)

Ist ein Maß für die Kompetenz der Zellen. = die Anzahl der Kolonien pro 1μg eingesetzte DNA.

Unter optimalen Bedingungen: 106-107 Kolonien pro 1μg eingesetzter Plasmid-DNA

• chemische Transfomation (durch CaCl2)
• Elektroporation

genauer Mechanismus noch nicht geklärt

• Durch Zugabe von CaCl2 kompetent gemacht (Ca2+ Ionen schwächen negative Ladungen der DNA ab --> Annäherung an ebenfalls negativ geladene Zellmembran)
• DNA hinzugegeben
• ~30min auf Eis inkubiert
  reduziert thermische Bewegeung --> DNA kann leichter ansetzen
• 2 minütiger Hitzeschock bei 42°
  plötzliche Änderung der Fluidität der Membran (leichter durchlössig) + Sogwirkung durch Temperatur-Unterschied innen und außen