M1

:-( high technical, bioinformatic and financial efford, large amount of data, high error rate, needs many different and multiple reads

1) random fragmentation of DNA (mechanistical shearing, enzymatic restriciton)

2) sequencing random fragments (overlap phase)

3)bioinformatic assembly of short fragmentes to build genome consensus

"regulation of geneexpression"

"heritable changes in gene expression not attributable to nucleotide sequence variation."

-bisulfite treatment and sequnecing

-restriciton enzyme digenstion

-histone modification (chromatin remodelling)

-DNA methylation (5' methyl C at CpG islands)

einfluss der nahrung auf genexpression

einfluss des genotypes auf die reaktion des organismus auf nahrung

studium der expressionsmuster aller mRNA in einme biolog system

studium des expresionsmusters aller proteine in einem biologischen system

studium aller metabolite im einfachen system (zelle)

studium aller etabolite im komplexen system (oranismus)

jede substanz (< 1500Da) im organismus, die ausgangsmaterial, zwischen-oder endprodukt von stoffwechsleprozessen ist. (zB : lipide, peptide, zucker, medikamente, leMi-inhalts-/zusatz..)

herkunkft: endo/exogen, mikrobiologisch

die gesamtheit aller kleinen moleküle/metaboliten im biologischen system (zelle, komp,organ, organismus...)

-profile metabolites with as little bias as possible

-large numbers at the same time

-characteristic relations between the metabolites

bioavailability, concentration, distribution, metabolism

hypothesen generierung

1) studiendesign (standartisierung!, intinsische vs. extr. einflussfaktoren, probandenzahl, schwankungen rausfiltern CAVE: Messung Zeit und Konz. abhängig!)

2)instruentelle analytik --> Metabolitenprofil

3)bioinformatik

4)Datenbank abgleich

5) Identifizierung der metaboliten mittels NMR, MS

:-)

-nicht destruktiv und unverfälscht

-keine Fraktionierung oder Derivatisierung notwenig

-identifikation und quantifizierung von metaboliten möglich

:-(

-gerninge sensitivität

-großes probenvolumen

:)

- hohe sensitivität

:(

-probenaufarbeitung und metaboliten-extraktion nötig

-verfälschung des profils

keine absolute quantifizierung ohne verherig Kenntnis des Metaboliten

principal component analysis (hauptkomponenten analyse)

--> Statistische Methode zur reduktion einer großen Zahl potentiell abhängiger Variablen in eine kleiner Zahl unabhängiger Variablen + grafische Darstellung

-Metabolit Identifizierung (Klassenzugehörigkeit (zb BMI,..))

-Identifizierung vin Biomarkern

-Wirkung & betroffene Stoffwecheselwege, ggf. Quantifizierung von Veränderungen

-LeMi: Rückstandsuntersuchungen , Toxikologie, GVO

-Hypothesengenerierung
 

the proteom is the entire set of proteins expressed by a genome, cell, tissue or organism

(more specifically, it is the set of expressed proteins in a given type of cells or an organism at a given time under defined conditions)

-transcriptom --> mRNA , auf dem Weg zum Protein spielen 2 faktoren eine Rolle: differential splicing (verschiedene proteine entstehen) und diffenerntial efficiencies (je umstand entstehen andere proteine , zb hsp bei erhöhter körpertemp.)

-proteine werden a) processiert (protease, vorläuferproteine) b) modifiziert (phosphorylierung, ubiquitinilierung, glycosylierung, methylierung , acetylierung) ...und exportiert

-verschiedene hwz und degradation der proteine führt zu verscheidenen peptiden und amino acids

uses a pH-gradient to seperate proteins based on their pI . Proteins are going to migrate to the pH-gradient complementary to their pI.

Isoelektrische Fokussierung, Trennug der Proteine nach pI / bestimmung des pI.

1)Ampholytlösung in Gel einpolymerisieruen

2)Anlegen eines elektrischen Felds --> erzeugt pH-gradient im gel

3) zugabe proteinlösung

4)erneutes anlegen des elektrischen felds

5) (anfärbung) proteine wanderen je pI entlang des pH gradienten

Limitierung:- viele Proteine (gleicher pI), pH außerhalb 3,und 9

-->Trennung nach Molekülmasse

1)Trennung der Proteine durch Isoelektrische Fokussierung im zylindrischen Gel

2)Gel horizontal auf ein zweites, plattenförmiges Gel legen (SDS)

3)Trennung der Proteine mittels SDS-PAGE (SDS-Polyacrylamide-Gelelektrophorese)

-->WesternBlot zur identifizierung (based on antibody binding specifity)

protein identification:

1)cleavage on protein into peptide

2)absolute peptide masses are measured by MALDI-TOF or ESI-TOF

3)compare masses to database or genome

stable associations of sphingolipids and cholestrol, slightly thicker , bilden "liquid-ordered phase" in der fluiden membran. wichitg für signalprozesse, da sich zB GPI-verknüpfte Proteine darin anreichern

..is a branch of proteomics that identifies, catalogs and characterizes proteins containing a phosphate group as a post-translational modification

stable isotope labelling with amino acids in cell culture

-technique based on mann spectrometry that detects differences in protein abundance among samples using non-radioactive isotopic labelling (for quantitative proteomics)

1)labelling: grow cell under different conditions (light medium + normal amino acid) (medium + heavy amino acid)

2)metabolic incorperation of amino acids into the protein (mass shift of corresponding peptides, detectd by mass spectrometer)

3) compare both samples--> ratio peak intensity reflects relative protein abundance

-shot gun:Protein-->Peptides-->LC/ESI-->MS-->CDI of random ions-->MS/MS-->database

-targeted:Protein-->Peptides-->LC/ESI-->MS w list of targets--> Q1(specific selection)-->Q2(CDI)-->Q3(MS)-->specific ion pairs, unique for proteins

-reference dara (sequences, studies, metadata,..) -tools+ computational support -protocols/standard operating procedures (SOPs)