Histologie

Grund:

• zu hohe Temp
• Paraffin mit Intermedium verunreinigt

Massnahme:

• Wasser kühlen
• Gewebe nochnmals für einige h in Vakuum-Infiltrationsbad

Grund:

• Gewebe von anderen Pat. auf Präparat

Massnhame:

• sauberes Arbeiten bei allen Abreitsschritten

Grund:

• Freiwinkel zu Flach

Massnahme:

• Winkel steiler stellen
• Einstellungen erhöhen

• Damit Gewebe gleichmässig gefestigt wird -> mikrometerdünne Schnitte
• Damit Schnittrichtung je nach Fragestellung festgelegt werden kann
• gleichbleibende Qualität der Schnitte ermöglichen

Vergleichbarkeit mit anderen Instituten im Bezug auf:

• Härte
• Homogenität

Ziel: Gewebs- und Fxierflüssigkeit (Wasser & Formalin) durch Einbettmedium Paraffin ersetzten

• Paraffin dringt in Hohlräumer des Geweves ein
• Da Paraffin hydrophob = Entwässerung mit aufsteigender Alkreihe
• Paraffin durch Hitze verflüssigen zum Eingissen
• Parafifin bei RT fest, für Schnitte

Nein

Schwammiges, parenchymreiches &feinproiges Gewebe = weniger lang

Hartes, dichtes oder fettiges = länger

Gewebeblockdicke = mitberücksichtigen

Höhere zu niedrigerer Poolarität (Schrumpfen des Gewebes)

• Polar: Wasser
• Unpolar Paraffin

Konzentationsunterschiede zu hoch = starke Schrumpfung

Je empfindlicher, umso geringer Konzentrationsunterschied

Wässrige Fixantien nicht mischbar

Alkohol verdrängt Wasser -> Intermedium (Xylol) verdrängt Alkohol (clearing) -> Paraffin verdrängt Intermedium (Infiltration)

Lösungsmittel mit hoher Verdampfungsrate wird schneller verdrängt = weniger Rüchstände im Parafin

• verhält sich umgekehrt proportional zur Temperatur
• Zur grosser Unterschied der Viskosität zwischen eindrigender & austretender Flüssigkeiten = Schrumpfung

Tiefe Temp

• erhöht stabilität Gewebe und Viskosität Reagenzien (Einwirkzeit wird verlängert

Gleichmässige Temp

• weniger Artefakte & feine Strukturierung

Wechselnd hohe Temp 37-45°

• Diffusionsrate erhöht & Viskosität Reagenzien veringert
• Dauer Entwässerunfg und Clearing verringert
• kann zu verstärkter Schrumpfung führen

• Erhöht Qualität
• Eigeschlossene Luft wird entfernt
• Siedepunkt heruntergesetzt
• Abdampfen der Reagenzien erleichtert

• Diffusion wird erhöht
• Gleichmässige Bewegung
• Lockere Schüttung --> nicht zu dich zusammenpacken

Die sich im flüssigen Paraffin befindenden Gewebestücke weden nun in richtig orientiert und mit Paraffin mit einem hohen Schmelzpuunkt in Blöcke ausgegossen und aushärten.

1. Ein wenig Paraffin in vorgewärme Ausgiessform geben
2. Kassette mit Gewebsstück öffen/vorbereiten
3. Gewebe mit warmen Pinzette herausnhemen
4. Gewebe  richtig in der Form orientieren (Schnittfläche nach unten)
5. Form mit Gewebe auf Kühlfläche
6. Oberste Schicht muss noch flüssig sein, Kassete oben drauf und mit Paraffin abdecken
7. Block auf Kühlplatte aushärten

1. From möglichst klein
2. Schnitfläche nach unten
3. Mind. 2-3 mm Paraplast um das Gewebe
4. Präparat darf nicht auf Boden kleben
5. Mehrere Gewebsstücke / Markierungen alle gleich ausrichten
6. Epithelien längs ausrichten
7. Gefässwände-gänge sollten im Querschnitt aufgestellt werden
8. Warme Pinzette erwenden sonst bleibt Gewebe kleben

Probleme:

• Paraffin wird matschig
• Färbung uneinheitlich
• Bloxk nach längerer Lagerung eingedellt
• Schnitt expoldiert auf Wasserbad

Gewebe neu einbetten:

• Paraffin schmelzen
• Mehrere Durchgänge mit Xylolbädern
• Mehrere Durchgänge mit abstigender Alkoholreiche
• Neu Entwässern und Einbetten

Allgemein können bei Problemen in der Histo Schritte einfach rückwärts zurückgeführt und so nochmals wiederholt werden.  Problem sollten möglichst sofort behoben.

1. 3-4 um
2. Mikrotom richtig enstellen (Grobtrieb, Feintrieb, Schneidewinkel)
3. Scharfe, festsitzende Klinge
4. Gekühlter Block richtig einspannen

1. Messerschlitten auf Gleitbahn wird horizontal vor und zurück bewegt
2. Präparat wird in Halterung fixiert
3. Messer wird durch Block gezogen
4. Mikrometerzahl nach oben bewegt

Vorteil:

1. sehr gut für hartes Gewebe
2. Stabil
3. verstellbare Deklination

Nachteil:

1. Kein Serienschnitt möglich (Bänder)
2. Durch eigene Kraft Schnittdike beeinflussbar

1. Messer starr fixiert
2. Messer quer mit Schneide nach oben
3. Gewebeblock wird senkrecht darauf zu bewegt
4. Vertikale Bewegung durch Handrad ausgelöst, bei jeder Umdrehung erfolgt Vorschub des Präparetes zum Messer
5. Teilweise mit Motor ausgestattet
6. Vorteil Herstellung von Schnittbändern

1. Neigung des Messers zur Präparatebene
2. Freiwinkel zwischen Facette ubd Blockoberfläche

Zu flach = zu dicke und dünne Schnitte

Zu steil = Messer rumpelt = Chatters

Optimales C-Messer ca 15°

Ist nur bei Schlittenmikrotom (bei Rotationsmikrotom 90°)

1. Schneidewinkel in Bezug auf Schneiderichtung
2. Schlittenmikrotom kann verstelt werden
3. Je härter das Gewebe, umso schräger stellt man das Messer 120°-160°

1. Block kühlen ca 15 Min
2. Objektträger beschriften
3. Messer einspannen
4. Block einspannen und nach Kline orientieren (Grobtrieb von hinten her an Kline führen)
5. Block trimmen = Gewebestück ganz angeschnitten
6. Feinschneiden und mit Pinzette / Fingern Schnitt zu sich ziehen und mit dem Pinsel von der Klinge lösen und mit der glänzenden Seite auf das Wasserbad legen = Schnitt strecken
7. Objektträger schräg uter Präparat tauchen und hochziehen, durch diese Bewegung wird der Schnitt auf den Objektträger aufgezogen
8. trocknen

1. Alle Arbeitsschritte müssen immer kontrolliert werden
2. Präparate dürfen keine Wasserspuren aufweisen -> Gefahr abschwimmen beim Färben
3. Schnitte müssen dünn und regelmässig sein 2-5 um
4. keine Falten

1. Schnitte des gleichen PAraplastblocken im Wasserbad
2. Für Nachweis / Leerschnitt seperaten Objektträger verwenden
3. Objektträger auf Mattschild beschriften mit Bleistift oder Schreiber der sich nicht mit Xylol oder Alk lösen lässt
4. Bei Stufen / Serienschnitte immer die Objektträger nummerieren

Jeder Schnitt wird einzeln mit dem Pinsel genommen

zwischen den gewünschten Stufen werden etwa 10-15 Feinschnitte gemacht, welche dann verworfen werden. Der nachfolgende Schnitt wird dann erst verwendet. Schnitte nummerieren!

man macht ein langes Bändchen und zieht lückenlos jeden Schnitt in der zeitlich richtigen Reihenfolge auf einen entsprechend nummerierten Objektträger auf

1. von allen Seiten mit Formalin
2. so schnell wie möglich fixieren
3. Formalin 4% gepuffert
4. Mengenverhältnis 20:1
5. Grosse Stücke aufschneiden
6. nicht am Boden kleben
7. Schwimmendes Gewebe abdecken
8. Bei bedarf Formalin nachfülle, wenn verbraucht

Bei Verdacht/Ausschluss einer lymphoproliferativen Erkankung.

Frisch und unfixiert. Mit NaCl getränkten Tüchern einwickeln und inner 2h ins Labor (sonst Autolyse)

Formlain würde die Proteine denaturieren und die Lymphknoten könnten daher nicht mehr für die Molek. verwendet werden.

1. Durch Wasserentzug (Alkohol)
2. Verändrung des Quellenzustandes (Essigsäure,Trichloressigsäure)
3. durch Salzbindung (Pirikinsäure)
4. Durch Vernetzung (Vormalin, Glutaraldehyd)

Ameisensäure:

Bindet H+ Ionen von der rechten Seite bis sich Hydroxylapatit auflöst

• aggresiv
• Nukleinsäure zerstört
• schnell

EDTA

Bindet Ca Ionen bis dich Hydroxylapatit  auflöst

• schonend
• Nukleinsäure intakt
• langsam

1. Fixation (falls nötig)
2. Makroskopische Beurteilung
3. Wässern
4. Entkalkung
5. Wässern
6. Entwässern
7. Einbetten in Paraffinblock
8. Schneiden am Mikrotom
9. Endparafinieren
10. QC
11. Mikorskopieren
12. Diagnose durch Pathologe