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ZK-Protokoll und Kontamination

Füttern-Passagieren, Kontamination

Füttern-Passagieren, Kontamination

8
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J. A.
Study
J. A.
Diese Lernkarten behandeln auf Universitätsniveau die Themen Zellkulturprotokolle und Kontamination, insbesondere Mykoplasmen. Sie beleuchten Oberflächenmodifikationen wie chemische Beschichtungen und topographische Veränderungen, um das Zellwachstum zu fördern oder Kontaminationen zu verhindern. Die Karteikarten erklären auch, wie man Mykoplasmenkontaminationen vermeidet, erkennt und behandelt, sowie die Bedeutung regelmäßiger Passagierung und Fütterung von Zellen. Diese Lernkarten sind ideal für Medizinstudenten und Forscher, die ihre Kenntnisse in Zellkulturtechniken vertiefen möchten.
Flashcards
8
Students
3
Language
German
Category
Medical
Level
University
Created / Updated
14.07.2016 / 13.12.2023
  • 1  / 8

Flashcards

Auf was sollten die Zellen immer geprüft werden?

  • Zelldichte
  • Morphologie
  • Adhärens
  • Kontamination

Warum / Wann / Wie Füttern? 

Füttern = Mediumwechsel

  • Weil Nährstoffe verbraucht werden
  • Stoffwechselendprodukte anfallen
  • Halbwertszeit von Antibiotika
  • 1-2mal pro Woche
  • indem Medium kurz erwämt wird und Medium gewechselt wird bzw Teilmediumwechsel um Zellen nicht sehr zu stressen

 

Warum/ Wann / Wie Passagieren?

Passagieren = Splitten = Trypsinieren

  • wegen gefahr von Kontakthemmung
    • die meisten Zellen haben eine Verdopplungszeit von 24h --> Kulturgefäß voll --> Einstellung der Proliferation
  • 1-2 mal pro Woche
  • Indem :
    • Medium absaugen
    • Waschen mit PBS
    • Trypsin EDTA Lösung hinzugeben
    • 5 min im Inkubator
    • Zugabe Medium, Vereinzeln der Zellen durch Pipettieren und überführen in Zentrifugationsgefäß
    • Zentrifugation
    • Pellen im definierten Medium resuspendieren
    • Entsprechende Menge Zellsuspension in neues Kulturgefäß überführen ggf. Zellzählung 

Detektion von Kontamiantion

  • Makroskopisch
    • Trübung
    • Farbe
    • Geruch
  • Mikroskopisch
    • Hefen, Pilze, Bakterien
    • Regelmäßige Struktur
    • Bewegung
    • Zustand der Zellen
  • Mikrobiologisch
    • Aliquot des Mediums inkubieren oder
    • Aliquot des Mediums abzentrifugieren, auf Agar/Objektträger aufstreichen trocknen, ggf Färben

Erkennen von Mycoplaasmenkontamination

Aliquot entnehmen bevor in Kultur gegeben wird und mit PCR (mittels mykoplasmenspezifische Primer) auf Mycoplasmen testen.

  • Mikroskopisch nicht detektierbar
  • Entdeckung meist erst wenn:
    • Zellen nicht mehr gut wachsen
    • Experimente nicht mehr gut funktionieren

Vermeiden von Mykoplasmenkontamination

  • mykoplasmenfreie Medien und Zusätze
  • Zelllinien kaufen
  • Neue Zelllinien : Mycoplasmenscreening, strikte Trennung des Handlings, nur mycoplasmenfreie Kulturen einfrieren
  • Kontaminierte Kulturen entfernen und auch alle dafür benutzten Lösungen

Warum Coating/Oberflächenmodifikation?

  • Damit Zellen besser drauf wachsen als "Benefit" für die Forschung
  • Als Antibiose: Oberflächen, die sich selbst sterilisieren wegen schlechter Anhanftung von Bakterien
  • bei Implantate: verschiedene Oberflächen damit z.B Knochen besser mit Implantat verwächst oder Oberflächen damit keine Zellen drauf wachsen für kurzzeitige Implantate

Was für Oberflächenmodifizierungen bzw Verfahren gibt es?

  • Chemisch/physikalisch: Strukturen aus Polymere (PLL), Proteine (extrazelluläre Membranproteine wie Collagen, LN, FN), "Membranecoating" mit PECVD + UV-Modifikation

--> Auswirkung von extrazelluläre Proteine auf Zellwachstum z.B wachstumsfördernd, Wachsen von Zellen auf bestimmte Strukturen oder bestimmte Bezirke auf der Oberfläche (höhere Adhäsion). --> Zellen wachsen je nach Oberfläche unterschiedlich

  • Topographisch: Mikro-/Nanomodifizierung --> Rauigkeiten, Höhen/Tiefen
    (oder positive/negative Ladung auf Oberfläche damit z.B PLL besser drauf haftet)

--> z.B mit Lithographie Strukturen herstellen (auf raue Oberflächen haften Zellen besser z.B Implantatoberflächen!)

Study