ZK-Protokoll und Kontamination

Füttern = Mediumwechsel

• Weil Nährstoffe verbraucht werden
• Stoffwechselendprodukte anfallen
• Halbwertszeit von Antibiotika
• 1-2mal pro Woche
• indem Medium kurz erwämt wird und Medium gewechselt wird bzw Teilmediumwechsel um Zellen nicht sehr zu stressen

Passagieren = Splitten = Trypsinieren

• wegen gefahr von Kontakthemmung
  • die meisten Zellen haben eine Verdopplungszeit von 24h --> Kulturgefäß voll --> Einstellung der Proliferation
• 1-2 mal pro Woche
• Indem :
  • Medium absaugen
  • Waschen mit PBS
  • Trypsin EDTA Lösung hinzugeben
  • 5 min im Inkubator
  • Zugabe Medium, Vereinzeln der Zellen durch Pipettieren und überführen in Zentrifugationsgefäß
  • Zentrifugation
  • Pellen im definierten Medium resuspendieren
  • Entsprechende Menge Zellsuspension in neues Kulturgefäß überführen ggf. Zellzählung 

• Makroskopisch
  • Trübung
  • Farbe
  • Geruch
• Mikroskopisch
  • Hefen, Pilze, Bakterien
  • Regelmäßige Struktur
  • Bewegung
  • Zustand der Zellen
• Mikrobiologisch
  • Aliquot des Mediums inkubieren oder
  • Aliquot des Mediums abzentrifugieren, auf Agar/Objektträger aufstreichen trocknen, ggf Färben

Aliquot entnehmen bevor in Kultur gegeben wird und mit PCR (mittels mykoplasmenspezifische Primer) auf Mycoplasmen testen.

• Mikroskopisch nicht detektierbar
• Entdeckung meist erst wenn:
  • Zellen nicht mehr gut wachsen
  • Experimente nicht mehr gut funktionieren

• mykoplasmenfreie Medien und Zusätze
• Zelllinien kaufen
• Neue Zelllinien : Mycoplasmenscreening, strikte Trennung des Handlings, nur mycoplasmenfreie Kulturen einfrieren
• Kontaminierte Kulturen entfernen und auch alle dafür benutzten Lösungen

• Damit Zellen besser drauf wachsen als "Benefit" für die Forschung
• Als Antibiose: Oberflächen, die sich selbst sterilisieren wegen schlechter Anhanftung von Bakterien
• bei Implantate: verschiedene Oberflächen damit z.B Knochen besser mit Implantat verwächst oder Oberflächen damit keine Zellen drauf wachsen für kurzzeitige Implantate

• Chemisch/physikalisch: Strukturen aus Polymere (PLL), Proteine (extrazelluläre Membranproteine wie Collagen, LN, FN), "Membranecoating" mit PECVD + UV-Modifikation

--> Auswirkung von extrazelluläre Proteine auf Zellwachstum z.B wachstumsfördernd, Wachsen von Zellen auf bestimmte Strukturen oder bestimmte Bezirke auf der Oberfläche (höhere Adhäsion). --> Zellen wachsen je nach Oberfläche unterschiedlich

• Topographisch: Mikro-/Nanomodifizierung --> Rauigkeiten, Höhen/Tiefen
  (oder positive/negative Ladung auf Oberfläche damit z.B PLL besser drauf haftet)

--> z.B mit Lithographie Strukturen herstellen (auf raue Oberflächen haften Zellen besser z.B Implantatoberflächen!)