Zellkultutechnik
Praktikum
Praktikum
Kartei Details
| Karten | 8 |
|---|---|
| Sprache | Deutsch |
| Kategorie | Technik |
| Stufe | Universität |
| Erstellt / Aktualisiert | 27.01.2014 / 27.01.2014 |
| Lizenzierung | Keine Angabe |
| Weblink |
https://card2brain.ch/box/zellkultutechnik
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Nennen Sie Name und Gewebetyp der im Praktikum verwendeten Zelllinie.
HeLa-Zellen (Henrietta Lax 1951)
Cervix-Adenocarcinom
Nennen Sie mind. 4 wichtige Bestandteile des bei HeLa-Zellen verwendeten Standardmediums.
Serum: Wachstumsfaktoren, Vitamine, Hormone, Adhäsionsfaktoren, etc.
Natriumpyruvat: aktiviert Stoffwechsel
NaHCO3: zur Pufferung
Ca2+: für Cadherine u. Integrine (wirkt stabilisierend)
Glutamin: Energielieferant
Glucose: Energiequelle
Erläutern Sie kurz die Zielsetzung des Versuches "Plating efficiency".
Diese wird lediglich bei geringer Zellzahl bestimmt um Bspw. Seren auf ihre "Qualität" zu prüfen.
Dies bedeutet, herauszufinden, welches Serum am besten für die jeweilige Kultur geeignet ist.
Beschreiben Sie vollständig das Passagieren einer HeLa-Zellkultur und gehen Sie dabei auf die Funktion der einzelnen Lösungen/Schritte ein.
...
Ordnen Sie die jeweiligen Abb. Den Stadien der M-Phase des Zellzykluses zu und beschriften Sie die dargestellten Phasen und Pfeile.
...
Im Versuch Zellsynchronisation und Transfektion wurden die Zellen mit EtOH fixiert. Geben Sie für beide Versuche jeweils konkret an, warum dies notwendig war und erläutern Sie.
Zellsynchronisation: um Probididiumiodid in tote Zellen gelangen zu lassen
Transfektion: Um die Zellen für die Färbelösung zugänglich zu machen, nur so kann Farbstoff durch Membran in Zelle eindringen und von transferierten Zellen zu Indigoblau mittels X-Gal umgewandelt werden -> Ermittlung der Transfektionsrate.
Wie gehen sie technisch vor, wenn sie folgende Fragestellung vor sich haben?
a) Sie wollen die Effizienz ihrer Transfektion bestimmen und im Anschluss dieselben Zellen weiterkultivieren. geben sie eine Methode an und erläutern sie kurz die Vorgehensweise.
b) Sie haben Zellen aus dem Gewebe isoliert und damit ein Gemisch aus verschiedenen Zelltypen erhalten. Diese muss nun effizient und Zellschonend aufgereinigt werden, damit sie eine nahezu reine Zellkultur erhalten. Geben sie eine Methode an und erläutern sie kurz ihre Vorgehensweise.
a) ...
b) Mittels limiting Delution, dazu Zellzahl bestimmen, runter verdünnen, mögl. auf eine Zelle pro Kavität. Einzelne Zellen mit den gewünschten Eigenschaften auswählen, weiter kultivieren (Klon) --> Anwendung: Produktion von monoklonalen Antikörpern.
Stellen sie ein Verdünnungsschema auf. Sie nutzen dafür ausschließlich Glaspipetten mit einem min Pipettiervolumen von 0,5 ml. geben sie alle Verdünnungsschritte in Form eines Pipettierschemas an. Welches Endvolumen liegt in dem Röhrchen vor, um die Zielbedingungen zu erfüllen?
Ausgangszellzahl: 2,5 x 106 in 5 ml
Ziel: 1x103 Zellen in einer Konzentration von 5 x 102 Zellen/ml.
...
