Mikrobiologie Labor

24h bei 30°C

Man zerkleinert das LM,gibt eine Verdünnungsflüssigkeit (Kochsalz-Peptonlösung) bei welche ein Neunmal grösseres Volumen hat als das LM.und homogenisiert es im Stomacher.

(bei einer Einwaage von 10 g also 90 ml)

Bei flüssigen Lebensmitteln werden z.b.10 ml zu 90 ml Verdünnungsflüssigkeit
pipettiert. Die Pipette darf nicht weiter als 1 cm in die Erstverdünnung
eintauchen und die sterile Verdünnungsflüssigkeit der weiteren Verdünnung
(1:100) im Röhrchen nicht berühren, d.h. der Inhalt der Pipette aus der
Erstverdünnung muss am Rande des Röhrchens oberhalb des Flüssigkeitsspiegels
entlassen werden. Die Durchmischung wird auf dem Reagenzglasschüttler
vorgenommen.

Anlegen von Dezimalverdünnungen

Von der Probe bzw. den Verdünnungen werden 0,1 ml auf der Oberfläche eines
festen Nährbodens ausgespatelt.
15 ml des geschmolzenen Nährbodens werden in sterile
Petrischalen überführt und zum Verfestigen stehengelassen. Unmittelbar vor der Verwendung werden die Platten mit der Agaroberfläche
nach unten, schräg auf dem abgenommenen Deckel liegend, in
einem Brutschrank ca. 30 min bei 50 °C getrocknet. Beginnend mit der höchsten
Verdünnung werden je 0,1 ml auf je 2 Agarplatten gegeben. Mit einem
sterilen Drigalski-Spatel wird die Menge gleichmäßig unter kreisenden Bewegungen
verteilt. Für jede Platte ist ein steriler Spatel zu verwenden. Die Platten
werden mit dem Boden nach oben bei der für die nachzuweisenden Mikroorganismen
erforderlichen Temperatur und Zeit bebrütet.

desinfektion: -direkt, weil direkt auf die fläche gegeben wird - von 100.000 keimen sollte nur 1 keim überbleiben ->infektionsrisiko sollte drastisch reduziert werden -keime werden geschlechtesunfähig gemacht -jedoch resistenzgefahr gegen desinfektionsmittel sterilisation: -keine zelle überlebt -autoklave, steri -werden mit sporenstreifen gestestet

-kontrastreichere darstellung. durchführung: -tropfen der zellsuspension auf objektträger gleichmäßig verreiben -lufttrocknen -hitzefixierung(brennerflamme) -objektträger mit methylenblau-lösung für 1 min bedeckt -wasser nachspülen -evtl immersionsöl, nach trocknen

ein Verfahren zur Keimreduktion in hitzeempfindlichen Lebensmitteln, das auf einer fraktionierten, diskontinuierlichen Sterilisation beruht

Zunächst wird die Probe für 30 min auf 100 °C erhitzt, wodurch eine Abtötung vegetativer Bakterien- und Pilzzellen erfolgt und die Auskeimung hitzestabiler, stationärer Sporen durch Hitzeschock induziert wird. Eine anschließende Inkubation für 12 h bei 37 °C führt zur Auskeimung der stationären Sporen zu vegetativen Zellen. Diese können nun durch ein erneutes Erhitzen für 30 min auf 100 °C abgetötet werden. Das Ergebnis ist eine deutliche Keimreduktion.

physikalische Desinfektion und chemische Desinfektion

1.Sterilisieren der Arbeitsgeräte und Instrumente

2.Öffnen mit der Schere den Sack wo die Plastikbeutel drin sind

3.Mit Pinzette ein Sack herausholen

4.Die in Alufolie eingepackte Cervelat mit Schnitzel ein Stück abschneiden.

5. Mit Pinzette das Cervelatstück in den Plastiksack geben.

6.Mit Schiene verschliessen und Beschriften

3 Tage bei 30°C

sie sind aerob

Nährboden:PCA

Methode:Plattenguss

Beispiel:Milchprodukte

– Verfahren: Spatelverfahren
– Bebrütung: 30 °C, 48−72 h (Bakterien); 25 °C, 3−5 Tage (Hefen und
Schimmelpilze)

-Agar

1ml der Probe in die Petrischale pipettieren, der PCA beifügen vermischen,abkalten lassen bis es eine 2mm feste Schicht gibt.

Bei 30°C während 3 tagen Bebrüten

1ml der Probe in die Petrischale geben,mit 10ml VRBG auffüllen,vermischen, festwerden lassen.

eine weitere Schicht Nährmedium dazugeben und wieder festwerdenlassen.

während 1 Tag bei 37°C bebrüten

0,1 ml einer Verdünnungsstufe wird mit einer
sterilen Pipette auf eine fertig gegossene
Agarplatte aufgebracht.
• Der Tropfen wird mit einem sterilen gebogenen
Glasstab (Drigalski-Spatel) gleichmäßig auf der Platte
verteilt.
• Die Petrischale wird mit dem Deckel verschlossen.
• Erst wenn der Ausstrich getrocknet ist, wird die
Schale mit dem Deckel nach unten bebrütet.

Der Ablauf für die Identifizierung vom MO.

über Verdünnungsreihen
und anschließende Kultivierung auf einem festen Medium.

Minimalmedium
Optimalmedium
Selektivmedium

Deckgläser für das Mikroskop

1. Man richtet sich 3 Petrischalen und 3 Reagenzgläser hin.

2. Danach stellt man die LB-Bouillon Lösung mit Agar her.

3. Mit der Pipetten werden jeweils 10 ml der Nährlösung in die Reagenzgläser gegeben.

4. Das LB-Buillon im ersten Reagenzglas wird mit einer Öse von der Übernachtkultur angeimpft.

5. Man nimmt 3 Ösen aus dem ersten angeimpften Reagenzglas und impft damit das LB-Buillon im zweiten Reagenzglas an.

6. Man nimmt 6 Ösen aus dem zweiten angeimpften Reagenzglas und impft damit das LB-Buillon im dritten Reagenzglas an.

7. Anschließend den Inhalt der drei Reagenzgläser in die Petrischalen gießen und drei Tage bei 37°C bebrüten.

Morphologische,Physiologische und Chemische.

Zur Kultur von MO, für die Zählung und Bestimmung.

EIne Bürette

Überführung einer bestimmten Menge an Flüssigkeit (tropfenweise) in ein anderes Gefäß.

Klassischer Anwendungsbereich ist die Neutralisationsreaktion.

enthält Nährstoffe, die nur von
bestimmten Bakterien verwertet werden
können oder Wirkstoffe, die gezielt das
Wachstum mancher Arten unterdrücken

Sterilisator für die Lebensmittelindustrie

Schutzbrillen tragen,eventuell Einweghandschuhe

Die Pipette nicht mit dem Mund bearbeiten

Ein Neutralisieren Griffbereit halten

Die Container mit Lösungsmitteln dürfen nie lange offen sein

Bei Stoffen die giftige Dämpfe haben muss unter dem Abzug gearbeitet werden

Giftige Substanzen müssen unter Verschluss gehalten werden

nachweis verschiedener Enzyme

Es muss in verschiedene Bereiche getrennt sein, je nach Aufgabe.

Die Dimensionen, das Klima und die Helligkeit müssen ideal sein um arbeiten zu können.