Mikrobiologie Labor

1. Man richtet sich 3 Petrischalen und 3 Reagenzgläser hin.

2. Danach stellt man die LB-Bouillon Lösung mit Agar her.

3. Mit der Pipetten werden jeweils 10 ml der Nährlösung in die Reagenzgläser gegeben.

4. Das LB-Buillon im ersten Reagenzglas wird mit einer Öse von der Übernachtkultur angeimpft.

5. Man nimmt 3 Ösen aus dem ersten angeimpften Reagenzglas und impft damit das LB-Buillon im zweiten Reagenzglas an.

6. Man nimmt 6 Ösen aus dem zweiten angeimpften Reagenzglas und impft damit das LB-Buillon im dritten Reagenzglas an.

7. Anschließend den Inhalt der drei Reagenzgläser in die Petrischalen gießen und drei Tage bei 37°C bebrüten.

Morphologische,Physiologische und Chemische.

Zur Kultur von MO, für die Zählung und Bestimmung.

EIne Bürette

Überführung einer bestimmten Menge an Flüssigkeit (tropfenweise) in ein anderes Gefäß.

Klassischer Anwendungsbereich ist die Neutralisationsreaktion.

enthält Nährstoffe, die nur von
bestimmten Bakterien verwertet werden
können oder Wirkstoffe, die gezielt das
Wachstum mancher Arten unterdrücken

Sterilisator für die Lebensmittelindustrie

Schutzbrillen tragen,eventuell Einweghandschuhe

Die Pipette nicht mit dem Mund bearbeiten

Ein Neutralisieren Griffbereit halten

Die Container mit Lösungsmitteln dürfen nie lange offen sein

Bei Stoffen die giftige Dämpfe haben muss unter dem Abzug gearbeitet werden

Giftige Substanzen müssen unter Verschluss gehalten werden

nachweis verschiedener Enzyme

Es muss in verschiedene Bereiche getrennt sein, je nach Aufgabe.

Die Dimensionen, das Klima und die Helligkeit müssen ideal sein um arbeiten zu können.

Sie müssen eine angemessene Ausbildung besitzen.

Bei einigen Aufgaben genügt eine Interne Ausbildung.

Man sollte Buch führen über die Aufgaben und Verantwortungen die jeder Arbeiter zukommt

Über die Methoden der Analysen

Arbeitsanweisungen

Analysen Reporte

Bedienungsanleitungen für Maschinen

Arbeitsbuch der Mitarbeiter

Zellwand

Antigene

DNA

Messpipette

Messzylinder

-Gramverhalten
– Form
– Größe
– Kapsel
– Kolonieform
– Farbe

Stomacher

Homogenisiert Stoffe zu Suspensionen zur Analyse

Alle Gefässe,Geräte und Medien müssen vor Gebrauch Sterilisiert werden

Arbeitsfläche mit Desinfektionsmittel abwaschen

Sterile Gefäse so kurz wie möglich öffnen

Verschlüsse nie auf den Tisch legen

Die Petrischalen nahe am Bunsenbrenner halten

Man muss sie vor Gebrauch kontrollieren.

Sie müssen trocken sein

Keine entflammbaren Substanzen in der Nähe haben

Der Gashahn muss nach Gebrauch immer abgestellt sein

Standzylinder

Fleischwasser od. Hefe-Extrakt
Pepton (Aminosäuren)
Glucose (Energie)
Feste Nährmedien enthalten zusätzlich ein
Verfestigungsmittel, z.B. Agar-Agar

Petrischale

1 ml einer Verdünnungsstufe wird mit einer sterilen
Pipette in eine leere, sterile Petrischale spritzen.
• Dazu gibt man ca. 10-15 ml verflüssigten und ca. 40°C
warmen Agar (z. B. PCA).
• Diese beiden Lösungen werden durch kreisende
Bewegungen (in Form einer 8) verteilt.
• Die verschlossene Petrischale bleibt bis zum Erstarren
des Nährbodens stehen und wird anschließend mit dem
Deckel nach unten bebrütet.

Labdancer

Ein Autoclave

Man muss sich über die Gefahren im klaren sein.

Man muss die Sicherheitsvorkehrungen kennen und wissen wo sie sind.

Man muss Erste Hilfe leisten können und eine Rettungsausrüstung haben.

Alle Stoffe müssen gekennzeichnet sein.

E.Coli

Staphylokokkus auralus

24h bei 30°C

Man zerkleinert das LM,gibt eine Verdünnungsflüssigkeit (Kochsalz-Peptonlösung) bei welche ein Neunmal grösseres Volumen hat als das LM.und homogenisiert es im Stomacher.

(bei einer Einwaage von 10 g also 90 ml)

Bei flüssigen Lebensmitteln werden z.b.10 ml zu 90 ml Verdünnungsflüssigkeit
pipettiert. Die Pipette darf nicht weiter als 1 cm in die Erstverdünnung
eintauchen und die sterile Verdünnungsflüssigkeit der weiteren Verdünnung
(1:100) im Röhrchen nicht berühren, d.h. der Inhalt der Pipette aus der
Erstverdünnung muss am Rande des Röhrchens oberhalb des Flüssigkeitsspiegels
entlassen werden. Die Durchmischung wird auf dem Reagenzglasschüttler
vorgenommen.

Anlegen von Dezimalverdünnungen

Von der Probe bzw. den Verdünnungen werden 0,1 ml auf der Oberfläche eines
festen Nährbodens ausgespatelt.
15 ml des geschmolzenen Nährbodens werden in sterile
Petrischalen überführt und zum Verfestigen stehengelassen. Unmittelbar vor der Verwendung werden die Platten mit der Agaroberfläche
nach unten, schräg auf dem abgenommenen Deckel liegend, in
einem Brutschrank ca. 30 min bei 50 °C getrocknet. Beginnend mit der höchsten
Verdünnung werden je 0,1 ml auf je 2 Agarplatten gegeben. Mit einem
sterilen Drigalski-Spatel wird die Menge gleichmäßig unter kreisenden Bewegungen
verteilt. Für jede Platte ist ein steriler Spatel zu verwenden. Die Platten
werden mit dem Boden nach oben bei der für die nachzuweisenden Mikroorganismen
erforderlichen Temperatur und Zeit bebrütet.

desinfektion: -direkt, weil direkt auf die fläche gegeben wird - von 100.000 keimen sollte nur 1 keim überbleiben ->infektionsrisiko sollte drastisch reduziert werden -keime werden geschlechtesunfähig gemacht -jedoch resistenzgefahr gegen desinfektionsmittel sterilisation: -keine zelle überlebt -autoklave, steri -werden mit sporenstreifen gestestet