Biotechnologie 3.4

- gezielt: bestimmte DNA-Abschnitte in vitro vermehren

- Herstellung bestimmter Genprodukte (z.B. Insulin)

- Isolierung eines Gens/DNA-Abschnitts aus einem Gemisch von DNA-Fragmenten

Austausch/Neukombination von DNA-Sequnezen aus unterschiedlichen Quellen. Die daran resultierende DNA ist sog. rekombinante DNA

Genprodukt/Protein, das in einer Wirtszelle aus der rekombinanten DNA gebildet wird

DNA-Molekül, das kloniert werden soll und dazu in den Vektor eingelagert werden muss

- geeingetes Vekor, der die Insert-DNA aufnehmen muss

- geeignete Wirtszelle zur Vermehrung, muss in der Lage sein, den Vektor aufzunehmen. 

- geeignete Kulturbedinungen zur Vermehrung der rekombinante DNA

- Verfahren zur Selektion auf rekombinante Wirtszelle

Vesikel für den Gentransfer

= NS-Moleküle, die in der Lage sind fremde DNA aufzunehmen und in eine Wirtszelle einzuführen

Prokaryoten/Kapazität/Anwendungsschwerpunkt

1. Plasmide; 0-15 Kb; PCR-Produkte, cDNA-Banken

2. Bakteriophagen; <25 Kb; cDNA-Banken, Genombibliotheken

3. Cosmide; bis 50 Kb; genomische DNA-Bibliotheken

4. BACs; bis 300 Kb; genomische DNA-Bibliotheken

Eukaryoten/Kapazität/

1. YAKs (künstl. Hefechromosomen); <1000 Kb

- ringförmige DNA-Moleküle, kleiner als chromosonale DNA (meist 1-10 Kb)

- extrachromosomale DNA, zusätzlich zur chromosonalen DNA

- lowcopy⇔ highcopy Plasmide

- in einer Zelle können unterschiedliche Plasmidsorten vorkommen

- tragen meist nützliche Zusatzinfromationen

- können zwischen Zellen ausgetauscht werden