BATL
Aufarbeitungstechnik Praktikum
Aufarbeitungstechnik Praktikum
Kartei Details
| Karten | 81 |
|---|---|
| Sprache | Deutsch |
| Kategorie | Technik |
| Stufe | Grundschule |
| Erstellt / Aktualisiert | 24.11.2013 / 09.12.2013 |
| Lizenzierung | Kein Urheberrechtsschutz (CC0) |
| Weblink |
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Bei welchen Parametern wird die Proteinbestimmung durchgeführt?
- Wellenlänge bei 595 nm
- Reagenz Bradford mit Coomassie Blue G250
- Raumtemperatur
- Zeitfaktor 2 min Inkubation + 30 min stabil
- Halbmikroplastikküvette
- Zentrifugation trüber Substanzen
- Messen gegen Wasser
- Verdünnung Testbereich: 0,2 - 0,8 mg/mL
Proteinbestimmung: Welche Einheiten werden für die Eichkurve aufgetragen?
BSA-Konzentration [µg/100 µL] gegen Extinktion bei 595 nm
Proteinbestimmung: Warum wird jeden Tag die Eichkurve neu ermittelt?
Alterung des Bradford-Reagenzes bedingt Zunahme des Blindwertes, durch Erhöhung der Eigenextinktion.
-> tägliches filtrieren + Eichkurve erstellen um Fehler zu kompensieren
Proteinbestimmung: Warum geht die Eichgerade nicht durch den Nullpunkt?
Es wird gegen Wasser abgeglichen und es besitzt eine Eigenextinktion von ca. 0,28 Absorptionseinheiten.
Wie lautet die Formel zur Proteinbestimmung?
(µg/100 µL x Faktor x Verdünnung)/1000 = [mg/mL]
Erläutern sie die Formel zur Berechnung des Proteingehaltes unter Nutzung der Eichkurve.
Eichkurve = Standard-Konzentration gegen Extinktion [µg/100 µL]
Faktor = Umrechnung 100 µL in 1 mL
1000 = Umrechnung µg in mg
Verdünnung 1:50 = 50
Proteinbestimmung: Wie ist eine Verdünnung sinnvoll vorzunehmen, wenn eine Verdünnung von 1:100 benötigt wird?
Nach welchem Prinzip funktioniert die Proteinbestimmung nach Bradford mit Coomassie Blue G250?
Bindung des Farbstoffes ans Protein durch ionische und hydrophobe WW.
Folge: Verschiebung des Absorptionsmaximum von 465 nm nach 595 nm.
