Mikrobiologie

Gram-Färbung:
-wichtigste
-zur Differenzierung von Gram Positiv & Gram Negativ

Ziehl-Neelsen-Färbung:
-für Säurefesten Stäbchen
-mithilfe von Methylenbalu

Tusche-Färbung:
-zur Dartsellung von Kapseln

Fluoreszenz-Färbung:
-Antigene oder Antikörper
-zur Darstellung der DNA, Bakterien oder anderen Mikroorgansimen

Zellkultur

Künstliche Nährmedien

Automatischer kultureller Nachweis
 

-Versuchstiere & Hühnereiembryos
-meist für die Forschung

MERKE:
-einige Bakterien lassen sich nur auf Zellkulten züchten, nicht auf Künstlichen Nährmedien.

Hauptbestandteile:
-Fleischextrakt
-Hefeextrakt
-Peptone
-Glukose
-Verschiedene Makronährstoffe

 

Feste Medien:
-1.2-2% Agar

Flüssige Nährmedien:
-ohne oder sehr wenig Agar
-Mikroorganismen wachsen prinzipiel besser auf Flüssigen Medien

Universal-Medien:
-fördern das Wachstum von den Meisten Bakterien

Selektiv-Medien:
-haben Substanzen, welche den Wachstum andere hemmt/unterdrückt
-z.B MacConkey -> wachsen nur Gram-Negaitve

Anreicherungs-Medien:
-Thioglykat
-Förderung vom Wachstum von Mikroorganismen, welche in geringer Keimzahl vorhanden sind.

Diefferenzialmedien:
-kombiniert Selektiv-Medien mit dem Nachweis von bestimmten Stoffen
-MacConkey -> nur Wachstum von Gram-Negativen + NLF/LF
 

BacT/Alert System:
-mit Blut gefüllte flaschen werden inkubiert
-sobald sich der CO2 erhöht, verändert sich die Farbe des Sensors 
-diese Farbveränderung wird optisch gemseen

Bactec:
-gleiches prinzip wie BacT/Alert System, jedoch statt Varbveränderung mit Fruoreszenz

Der Nachweis von Antigen oder Antikörpern.

-Agglutination
-Immunfluerszenz
-EIA (ELISA)
-Immunchromatographie
-Westernblot & Immunoblot

EIA (ELISA)

Direkte:
Nachweis von Antigenen

Indirekt:
Nachweis von Antikörpern

''Verklumpung'' von Antigenbeladenen Partikeln in einer Flüssigkeit, wenn sie in Kontaktbmit Antokörpern kommen.
Die kann aber auch umgekehrt geschehen.

-Clumping-Faktor-Nachweis
-Antigen-Nachweis in Liquor
-O- und H-Antigenbestimmungen von Salmonellen
-AST (Anti Streptolysin-O-Test)


 

Partikel sind mit Antikörpern beladen
Nachweis von Antigen

-ein Tropfen Partikel mit Spezifischem Antikörper auftragen
-Patientenprobe hinzugeben
-Mischen
 

Partikel sind mit Antigen beladen
-Nachweis von Antikörpern

-ein Tropfen Partikel mit Spezifischen Antigenen
-Patientenprobe dazugeben
-Mischen

Latex
Bakterien
EC's

1)Patientenprobe mit enthaltenen/gesuchten Antigenen werden auf dem Objektträger fixiert

2)Zugabe von Fluorochrom-Markierten Antikörpern

3)Inkubationszeit-> AK binden an AG

4)Waschschritt, überflüssige Material wird weggespühlt

5)Trocknen und unter dem Fluoreszenzmik beurteilen

MERKE:
Antigen werden gesucht

Objektträger mit spezifischen Antigen beschichtet:
 

1)Patientenprobe mit gesuchten/enthaltenden Antikörpern wird auf den OT gegeben

2)Inkubationszeit 

3)Waschschritt

4)Zugabe von Fluorochrom Markierten AK, welche gegen Menschliche AK gerichtet ist

5)Inkubationszeit 

6)Waschschritt

7)Trocknen und beurteilen

MERKE:
Es werden Antikörper gesucht


 

Wenn Antikörper oder Antigene an eine Festphase gebunden sind.

Sehr empfindliche Nachweismethode, werden in den allermeisten Labors eingesetzt.

-Bekannter Antikörper ist an eineer Festphase gebunden

-Zugabe von Serumprobe
-Waschschritt

-bekannter, Enzymmarkiert Antikörper bindet sich währen der Inkubationszeit ebenfalls an das Antigen
-Waschschritt

-Substrat-Lösung wird dazugegeben -> Enzym reagiert mit Farbumschwung

7)Stopp-Lösung wird die chemische Reaktion beendet


MERKE:
Antigen wird gesucht
 

-Festplatte mit spezifischen Antigenen beschichtet

-Gesuchte Antikröper bindet wich während der Inkubationszeit 
-Waschschritt

-Zugabe von Enzymmarkierten Antikörpern, welche gegen Menschliche Antikörper gerichtet sind. Binden sich während Inkubationszeit 
-Waschschritt

-Supstrat-Lösung zur aktivierung der Enzyme

-Zugabe von Stopplösung

MERKE:
Nachgewisen werden Antikörper

Antelle von Enzymen beim ELIAS können die Reaktion auch mit Chemilumineszenzs sichtbar gemacht werden.

''Auftrennung von Stoffen durch eine mobile und stationäre Phase''

Oft Schnelltests

-Untersuchungsprobe wird auf einen Nitrozellulose-Steifen aufgetragen
-Antigene wanern in eine bestimmte Richtung und binden an entsprechenden Antikörpern (Markiert)
-Komplex wandert weiter an richtung Fänger-Antikörper
-wird nun als Linie Sichtbar
nicht gebundene Antikörper wandern weiter und werden am Kontroll-Linie Gebunden

Das die Wanderung stattgefunden hat.

Westernblot & Immunoblot