Mikrobiologie
Nachweismethoden
Nachweismethoden
Mikroskopie
Normale Miks findet man in jedem Labor.
Elektronenmikroskop nur sehr selten (10stk in gebrauch)
Elektronenmikroskop:
-Forschung
Lichtmikroskop:
-Beweglichkeit von Bakterien im Nativ-Präparat
-Phasenkontrast für Sporen & Einschlüsse
-Fluoereszenz für Bakterien, Protozonen & andere Mikroorganismen
Färbungen
Welche vier gibt es?
Gram-Färbung:
-wichtigste
-zur Differenzierung von Gram Positiv & Gram Negativ
Ziehl-Neelsen-Färbung:
-für Säurefesten Stäbchen
-mithilfe von Methylenbalu
Tusche-Färbung:
-zur Dartsellung von Kapseln
Fluoreszenz-Färbung:
-Antigene oder Antikörper
-zur Darstellung der DNA, Bakterien oder anderen Mikroorgansimen
Welche 3 Arten um eine Kultur zachzuweisen/anzuzüchten gibt es?
Zellkultur
Künstliche Nährmedien
Automatischer kultureller Nachweis
Zellkultur
-Versuchstiere & Hühnereiembryos
-meist für die Forschung
MERKE:
-einige Bakterien lassen sich nur auf Zellkulten züchten, nicht auf Künstlichen Nährmedien.
Haubtbestandteile Künstliche Nährmedien
Hauptbestandteile:
-Fleischextrakt
-Hefeextrakt
-Peptone
-Glukose
-Verschiedene Makronährstoffe
Die 6 verschiednenen Arten von Künstlichen Nährmedien zusammengefasst
Feste Medien:
-1.2-2% Agar
Flüssige Nährmedien:
-ohne oder sehr wenig Agar
-Mikroorganismen wachsen prinzipiel besser auf Flüssigen Medien
Universal-Medien:
-fördern das Wachstum von den Meisten Bakterien
Selektiv-Medien:
-haben Substanzen, welche den Wachstum andere hemmt/unterdrückt
-z.B MacConkey -> wachsen nur Gram-Negaitve
Anreicherungs-Medien:
-Thioglykat
-Förderung vom Wachstum von Mikroorganismen, welche in geringer Keimzahl vorhanden sind.
Diefferenzialmedien:
-kombiniert Selektiv-Medien mit dem Nachweis von bestimmten Stoffen
-MacConkey -> nur Wachstum von Gram-Negativen + NLF/LF
Welche 2 Automatischen System gibt es, um den Wachstum von Mikroorganismen nachzuweisen?
BacT/Alert System:
-mit Blut gefüllte flaschen werden inkubiert
-sobald sich der CO2 erhöht, verändert sich die Farbe des Sensors
-diese Farbveränderung wird optisch gemseen
Bactec:
-gleiches prinzip wie BacT/Alert System, jedoch statt Varbveränderung mit Fruoreszenz
Was sind Immunoassay?
Welches sind die fünf gebräuchlichsten Methoden?
Der Nachweis von Antigen oder Antikörpern.
-Agglutination
-Immunfluerszenz
-EIA (ELISA)
-Immunchromatographie
-Westernblot & Immunoblot
Welches ist die am meist verwendete Methode?
EIA (ELISA)
Direkte & Indirekte Nachweismethoden?
Was wird wo nachgewiesen?
Direkte:
Nachweis von Antigenen
Indirekt:
Nachweis von Antikörpern
Agglutination ?
5 Beispiele von Agglutinations-Reaktionen
''Verklumpung'' von Antigenbeladenen Partikeln in einer Flüssigkeit, wenn sie in Kontaktbmit Antokörpern kommen.
Die kann aber auch umgekehrt geschehen.
-Clumping-Faktor-Nachweis
-Antigen-Nachweis in Liquor
-O- und H-Antigenbestimmungen von Salmonellen
-AST (Anti Streptolysin-O-Test)
Direkte Agglutination
Partikel sind mit Antikörpern beladen
Nachweis von Antigen
-ein Tropfen Partikel mit Spezifischem Antikörper auftragen
-Patientenprobe hinzugeben
-Mischen
Indirekte Agglutination
Partikel sind mit Antigen beladen
-Nachweis von Antikörpern
-ein Tropfen Partikel mit Spezifischen Antigenen
-Patientenprobe dazugeben
-Mischen
Was können bei der Agglutination für ''Trägerpartikel'' genutzt werden?
(3)
Latex
Bakterien
EC's
Direkte Immunfluoreszenz
(Ablauf in 5 Schritten)
1)Patientenprobe mit enthaltenen/gesuchten Antigenen werden auf dem Objektträger fixiert
2)Zugabe von Fluorochrom-Markierten Antikörpern
3)Inkubationszeit-> AK binden an AG
4)Waschschritt, überflüssige Material wird weggespühlt
5)Trocknen und unter dem Fluoreszenzmik beurteilen
MERKE:
Antigen werden gesucht
indirekte Immunfluoreszenz
(in 7 Schritten)
Objektträger mit spezifischen Antigen beschichtet:
1)Patientenprobe mit gesuchten/enthaltenden Antikörpern wird auf den OT gegeben
2)Inkubationszeit
3)Waschschritt
4)Zugabe von Fluorochrom Markierten AK, welche gegen Menschliche AK gerichtet ist
5)Inkubationszeit
6)Waschschritt
7)Trocknen und beurteilen
MERKE:
Es werden Antikörper gesucht
Was ist ELISA??
Wenn Antikörper oder Antigene an eine Festphase gebunden sind.
Sehr empfindliche Nachweismethode, werden in den allermeisten Labors eingesetzt.
Direkter ELISA
(5 Schritte)
-Bekannter Antikörper ist an eineer Festphase gebunden
-Zugabe von Serumprobe
-Waschschritt
-bekannter, Enzymmarkiert Antikörper bindet sich währen der Inkubationszeit ebenfalls an das Antigen
-Waschschritt
-Substrat-Lösung wird dazugegeben -> Enzym reagiert mit Farbumschwung
7)Stopp-Lösung wird die chemische Reaktion beendet
MERKE:
Antigen wird gesucht
Indirekter ELISA
-Festplatte mit spezifischen Antigenen beschichtet
-Gesuchte Antikröper bindet wich während der Inkubationszeit
-Waschschritt
-Zugabe von Enzymmarkierten Antikörpern, welche gegen Menschliche Antikörper gerichtet sind. Binden sich während Inkubationszeit
-Waschschritt
-Supstrat-Lösung zur aktivierung der Enzyme
-Zugabe von Stopplösung
MERKE:
Nachgewisen werden Antikörper
Was ist Chemilumineszenz?
Antelle von Enzymen beim ELIAS können die Reaktion auch mit Chemilumineszenzs sichtbar gemacht werden.
Prinzip Immunchromatographie
''Auftrennung von Stoffen durch eine mobile und stationäre Phase''
Oft Schnelltests
-Untersuchungsprobe wird auf einen Nitrozellulose-Steifen aufgetragen
-Antigene wanern in eine bestimmte Richtung und binden an entsprechenden Antikörpern (Markiert)
-Komplex wandert weiter an richtung Fänger-Antikörper
-wird nun als Linie Sichtbar
nicht gebundene Antikörper wandern weiter und werden am Kontroll-Linie Gebunden
Was zeigt die Kontrolliene an?
Das die Wanderung stattgefunden hat.
Welche zwei Immunoassay gibt es noch?
Westernblot & Immunoblot
-
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Lernkarten
Mikroskopie
Normale Miks findet man in jedem Labor.
Elektronenmikroskop nur sehr selten (10stk in gebrauch)
Elektronenmikroskop:
-Forschung
Lichtmikroskop:
-Beweglichkeit von Bakterien im Nativ-Präparat
-Phasenkontrast für Sporen & Einschlüsse
-Fluoereszenz für Bakterien, Protozonen & andere Mikroorganismen
Färbungen
Welche vier gibt es?
Gram-Färbung:
-wichtigste
-zur Differenzierung von Gram Positiv & Gram Negativ
Ziehl-Neelsen-Färbung:
-für Säurefesten Stäbchen
-mithilfe von Methylenbalu
Tusche-Färbung:
-zur Dartsellung von Kapseln
Fluoreszenz-Färbung:
-Antigene oder Antikörper
-zur Darstellung der DNA, Bakterien oder anderen Mikroorgansimen
Welche 3 Arten um eine Kultur zachzuweisen/anzuzüchten gibt es?
Zellkultur
Künstliche Nährmedien
Automatischer kultureller Nachweis
Zellkultur
-Versuchstiere & Hühnereiembryos
-meist für die Forschung
MERKE:
-einige Bakterien lassen sich nur auf Zellkulten züchten, nicht auf Künstlichen Nährmedien.
Haubtbestandteile Künstliche Nährmedien
Hauptbestandteile:
-Fleischextrakt
-Hefeextrakt
-Peptone
-Glukose
-Verschiedene Makronährstoffe
Die 6 verschiednenen Arten von Künstlichen Nährmedien zusammengefasst
Feste Medien:
-1.2-2% Agar
Flüssige Nährmedien:
-ohne oder sehr wenig Agar
-Mikroorganismen wachsen prinzipiel besser auf Flüssigen Medien
Universal-Medien:
-fördern das Wachstum von den Meisten Bakterien
Selektiv-Medien:
-haben Substanzen, welche den Wachstum andere hemmt/unterdrückt
-z.B MacConkey -> wachsen nur Gram-Negaitve
Anreicherungs-Medien:
-Thioglykat
-Förderung vom Wachstum von Mikroorganismen, welche in geringer Keimzahl vorhanden sind.
Diefferenzialmedien:
-kombiniert Selektiv-Medien mit dem Nachweis von bestimmten Stoffen
-MacConkey -> nur Wachstum von Gram-Negativen + NLF/LF
Welche 2 Automatischen System gibt es, um den Wachstum von Mikroorganismen nachzuweisen?
BacT/Alert System:
-mit Blut gefüllte flaschen werden inkubiert
-sobald sich der CO2 erhöht, verändert sich die Farbe des Sensors
-diese Farbveränderung wird optisch gemseen
Bactec:
-gleiches prinzip wie BacT/Alert System, jedoch statt Varbveränderung mit Fruoreszenz
Was sind Immunoassay?
Welches sind die fünf gebräuchlichsten Methoden?
Der Nachweis von Antigen oder Antikörpern.
-Agglutination
-Immunfluerszenz
-EIA (ELISA)
-Immunchromatographie
-Westernblot & Immunoblot
Welches ist die am meist verwendete Methode?
EIA (ELISA)
Direkte & Indirekte Nachweismethoden?
Was wird wo nachgewiesen?
Direkte:
Nachweis von Antigenen
Indirekt:
Nachweis von Antikörpern
Agglutination ?
5 Beispiele von Agglutinations-Reaktionen
''Verklumpung'' von Antigenbeladenen Partikeln in einer Flüssigkeit, wenn sie in Kontaktbmit Antokörpern kommen.
Die kann aber auch umgekehrt geschehen.
-Clumping-Faktor-Nachweis
-Antigen-Nachweis in Liquor
-O- und H-Antigenbestimmungen von Salmonellen
-AST (Anti Streptolysin-O-Test)
Direkte Agglutination
Partikel sind mit Antikörpern beladen
Nachweis von Antigen
-ein Tropfen Partikel mit Spezifischem Antikörper auftragen
-Patientenprobe hinzugeben
-Mischen
Indirekte Agglutination
Partikel sind mit Antigen beladen
-Nachweis von Antikörpern
-ein Tropfen Partikel mit Spezifischen Antigenen
-Patientenprobe dazugeben
-Mischen
Was können bei der Agglutination für ''Trägerpartikel'' genutzt werden?
(3)
Latex
Bakterien
EC's
Direkte Immunfluoreszenz
(Ablauf in 5 Schritten)
1)Patientenprobe mit enthaltenen/gesuchten Antigenen werden auf dem Objektträger fixiert
2)Zugabe von Fluorochrom-Markierten Antikörpern
3)Inkubationszeit-> AK binden an AG
4)Waschschritt, überflüssige Material wird weggespühlt
5)Trocknen und unter dem Fluoreszenzmik beurteilen
MERKE:
Antigen werden gesucht
indirekte Immunfluoreszenz
(in 7 Schritten)
Objektträger mit spezifischen Antigen beschichtet:
1)Patientenprobe mit gesuchten/enthaltenden Antikörpern wird auf den OT gegeben
2)Inkubationszeit
3)Waschschritt
4)Zugabe von Fluorochrom Markierten AK, welche gegen Menschliche AK gerichtet ist
5)Inkubationszeit
6)Waschschritt
7)Trocknen und beurteilen
MERKE:
Es werden Antikörper gesucht
Was ist ELISA??
Wenn Antikörper oder Antigene an eine Festphase gebunden sind.
Sehr empfindliche Nachweismethode, werden in den allermeisten Labors eingesetzt.
Direkter ELISA
(5 Schritte)
-Bekannter Antikörper ist an eineer Festphase gebunden
-Zugabe von Serumprobe
-Waschschritt
-bekannter, Enzymmarkiert Antikörper bindet sich währen der Inkubationszeit ebenfalls an das Antigen
-Waschschritt
-Substrat-Lösung wird dazugegeben -> Enzym reagiert mit Farbumschwung
7)Stopp-Lösung wird die chemische Reaktion beendet
MERKE:
Antigen wird gesucht
Indirekter ELISA
-Festplatte mit spezifischen Antigenen beschichtet
-Gesuchte Antikröper bindet wich während der Inkubationszeit
-Waschschritt
-Zugabe von Enzymmarkierten Antikörpern, welche gegen Menschliche Antikörper gerichtet sind. Binden sich während Inkubationszeit
-Waschschritt
-Supstrat-Lösung zur aktivierung der Enzyme
-Zugabe von Stopplösung
MERKE:
Nachgewisen werden Antikörper
Was ist Chemilumineszenz?
Antelle von Enzymen beim ELIAS können die Reaktion auch mit Chemilumineszenzs sichtbar gemacht werden.
Prinzip Immunchromatographie
''Auftrennung von Stoffen durch eine mobile und stationäre Phase''
Oft Schnelltests
-Untersuchungsprobe wird auf einen Nitrozellulose-Steifen aufgetragen
-Antigene wanern in eine bestimmte Richtung und binden an entsprechenden Antikörpern (Markiert)
-Komplex wandert weiter an richtung Fänger-Antikörper
-wird nun als Linie Sichtbar
nicht gebundene Antikörper wandern weiter und werden am Kontroll-Linie Gebunden
Was zeigt die Kontrolliene an?
Das die Wanderung stattgefunden hat.
Welche zwei Immunoassay gibt es noch?
Westernblot & Immunoblot
