Antikörper
Zellbiologie
Zellbiologie
beschreibe die Struktur/Aufbau der Ak
- Bild
was ist ein Epitop?
in welchem Zusammenhang steht es zu Ag und Ak?
- Antigene Determinante
- spezifische Bindungsstelle des Ak an Ag
- am Epitop bindet der Ak mit dem Fab
- ein Ag ist eine Ansammlung von mehreren Epitopen
- können alle verschieden sein
- mehrere unterschiedliche Ak erkennen unterschiedliche Teile vom gleichen Protein
- können aus mehreren repetiven Einheiten bestehen
- können alle verschieden sein
was bedeutet Affinität?
- Mass für Komplexbildung zwischen Ak und Epitop des Ag
- Ak + Ag => AgAk [Ag Ak] / [Ag] * [Ak]
- wie stark bindet ein einzelne Ak-Determinante an ein einzelnes Ag
was bedeutet Aviddität?
- wie viele Ag können von einem einem multivalenten Ak gebunden werden => Gesamtheit aller Affinitäten eines einzelnen Ak
was ist der Unterschied zwischen einer kontinuierlichen resp. sequentiellen Determinante und einer diskontinuierlichen resp. Konformations-Determinanten?
- kontinuierlichen
- bindenan einen Strang vom Protein
- diskontinuierlichen
- Ak bindet an zwei verschiedene Stränge von Proteinen
- Proteinaufbereitung beeinflusst Bindungsfähigkeit => ist das Protein nicht gut gefaltet, bindet Ak schlechter
was bedeutet Spezifität?
- Fähigkeit eines individuellen Ak mit einem einzigen Epitop eines Ag zu reagieren
- Fähigkeit einer Population von Ak, mit nur einem bestimmten Epitop eines Ag zu reagieren
=> in der PRaxis kommen oft KReuzreaktionen vor!
wie lassen sich Ak gegen nicht immunogene Substanzen herstellen?
- nicht immune Substanz (sehr kleine Moleküle) an ein Protein koppeln
- beid er Immunisierung bilden sich Ak gegen das bestimmte Molekül im gekoppelten Protein, genannt Hapten
- ein Hapten st ein Ag, aber kein Immunogen!
- diese Moleküle werden an Carrier gebunden, meist an ein Protein
beschreibe die unterschiedlichen Immunglobulin-Klassen
- IgA
- Schleimhäuten
- Abwehr von Viren und Bakterien auf der Oberfläche
- IgE
- sehr wenig im Blut vorhanden
- Schwanz bindet an Mastzellen als Ag-Antwort, um Histamin auszuschütten
- IgD
- auf Oberfläche von B-Zellen
- whs als Ag-Rezeptor, um B-Zellen in PLasma-/ Memoryzellen zu differenzieren
- IgM
- erster Ak nach Immunreaktionsstart
- Konzentration im Blut rasch vermindert, wenn Immunreaktion voll abläuft
- aktiviert KOmplement
- IgG
- häufigster Ak
- durchquert Zellwände und geht ins Gewebe
- Placentagängig
wie lassen sich monoklonale Ak erzeugen?
- Immunisierung eines Tiers (z.B. MAus)
- Entnahme von B und T Zellen
- Isolation von B und T ZEllen, welche mit dem Ag reagieren
- klonieren der rearrangierten DNA
- Fusion der hypervariablen Regionen der Mausgene mit den konstanten Regionen eines menschlichen Ak
- Transfektion einer Myeloiden Krebszelle mit dem Fusionskonstrukt
erkläre wie es zur Ak-Diersität kommt
- ???
was muss man bei der Herstellung von Ak als Medikament beachten?
???
welche Methoden weisen Proteinen mit Hilfe von Ak nach?
- Immunfluoreszenz
- Immunpräzipation
- Westernplot
- EISA
erkläre das Prinzip des ELISA
- Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
erkläre das Prinzip des Westernblots
- Bild
erkläre das Prinzip der Immunpräzipaton
- Zugabe von Ak, welche an das gewünschte Protein bindet
- Zugabe Beads, welche Ak bindet
- Zentrifugation => im überstand befinden sich die restlichen Proteine
- Waschschritt, um die restlichen Proteine zu entfernen
- Eluation: Ak und Protein lösen sich
- Separation des Proteins von Ak
=> schnellste und gründlichste Proteinreinigung, aber auch teuer
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Flashcards
beschreibe die Struktur/Aufbau der Ak
- Bild
was ist ein Epitop?
in welchem Zusammenhang steht es zu Ag und Ak?
- Antigene Determinante
- spezifische Bindungsstelle des Ak an Ag
- am Epitop bindet der Ak mit dem Fab
- ein Ag ist eine Ansammlung von mehreren Epitopen
- können alle verschieden sein
- mehrere unterschiedliche Ak erkennen unterschiedliche Teile vom gleichen Protein
- können aus mehreren repetiven Einheiten bestehen
- können alle verschieden sein
was bedeutet Affinität?
- Mass für Komplexbildung zwischen Ak und Epitop des Ag
- Ak + Ag => AgAk [Ag Ak] / [Ag] * [Ak]
- wie stark bindet ein einzelne Ak-Determinante an ein einzelnes Ag
was bedeutet Aviddität?
- wie viele Ag können von einem einem multivalenten Ak gebunden werden => Gesamtheit aller Affinitäten eines einzelnen Ak
was ist der Unterschied zwischen einer kontinuierlichen resp. sequentiellen Determinante und einer diskontinuierlichen resp. Konformations-Determinanten?
- kontinuierlichen
- bindenan einen Strang vom Protein
- diskontinuierlichen
- Ak bindet an zwei verschiedene Stränge von Proteinen
- Proteinaufbereitung beeinflusst Bindungsfähigkeit => ist das Protein nicht gut gefaltet, bindet Ak schlechter
was bedeutet Spezifität?
- Fähigkeit eines individuellen Ak mit einem einzigen Epitop eines Ag zu reagieren
- Fähigkeit einer Population von Ak, mit nur einem bestimmten Epitop eines Ag zu reagieren
=> in der PRaxis kommen oft KReuzreaktionen vor!
wie lassen sich Ak gegen nicht immunogene Substanzen herstellen?
- nicht immune Substanz (sehr kleine Moleküle) an ein Protein koppeln
- beid er Immunisierung bilden sich Ak gegen das bestimmte Molekül im gekoppelten Protein, genannt Hapten
- ein Hapten st ein Ag, aber kein Immunogen!
- diese Moleküle werden an Carrier gebunden, meist an ein Protein
beschreibe die unterschiedlichen Immunglobulin-Klassen
- IgA
- Schleimhäuten
- Abwehr von Viren und Bakterien auf der Oberfläche
- IgE
- sehr wenig im Blut vorhanden
- Schwanz bindet an Mastzellen als Ag-Antwort, um Histamin auszuschütten
- IgD
- auf Oberfläche von B-Zellen
- whs als Ag-Rezeptor, um B-Zellen in PLasma-/ Memoryzellen zu differenzieren
- IgM
- erster Ak nach Immunreaktionsstart
- Konzentration im Blut rasch vermindert, wenn Immunreaktion voll abläuft
- aktiviert KOmplement
- IgG
- häufigster Ak
- durchquert Zellwände und geht ins Gewebe
- Placentagängig
wie lassen sich monoklonale Ak erzeugen?
- Immunisierung eines Tiers (z.B. MAus)
- Entnahme von B und T Zellen
- Isolation von B und T ZEllen, welche mit dem Ag reagieren
- klonieren der rearrangierten DNA
- Fusion der hypervariablen Regionen der Mausgene mit den konstanten Regionen eines menschlichen Ak
- Transfektion einer Myeloiden Krebszelle mit dem Fusionskonstrukt
erkläre wie es zur Ak-Diersität kommt
- ???
was muss man bei der Herstellung von Ak als Medikament beachten?
???
welche Methoden weisen Proteinen mit Hilfe von Ak nach?
- Immunfluoreszenz
- Immunpräzipation
- Westernplot
- EISA
erkläre das Prinzip des ELISA
- Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
erkläre das Prinzip des Westernblots
- Bild
erkläre das Prinzip der Immunpräzipaton
- Zugabe von Ak, welche an das gewünschte Protein bindet
- Zugabe Beads, welche Ak bindet
- Zentrifugation => im überstand befinden sich die restlichen Proteine
- Waschschritt, um die restlichen Proteine zu entfernen
- Eluation: Ak und Protein lösen sich
- Separation des Proteins von Ak
=> schnellste und gründlichste Proteinreinigung, aber auch teuer
