SDS und WB

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Was benutzt man, um Proteine nach dem WB anzufärben?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Proteinspezifische Farbstoffe

b. Ponceau-Färbung

c. Proteinspezifische Antikörper

d. Fluoreszenz-Farbstoffe

In welcher Reihenfolge werden die Teile für das Giessen eines SDS-PAGE  Gels zusammengebaut?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Glasplatte; Glasplatte mit Spacer; Gelkassette; Elektrophoreseapparatur

b. Elektrophoreseapparatur; Gelkassette; Glasplatte mit Spacer; Glasplatte

c. Glasplatte mit Spacer; Glasplatte; Gelkassette; Elektrophoreseapparatur

d. Spacer; Glasplatte; Gelkassette; Elektrophoreseapparatur

Was ist das Ziel des SDS-PAGE Versuches?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Aussagen zur Probenauftrennung mit unterschiedlichen Acrylamidkonzentrationen zu tätigen

b. SDS-PAGE Gel richtig interpretieren zu können

c. bestimmte Proteine aufgrund ihres Molekulargewichtes zu trennen und diese zu identifizieren.

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Wozu enthält der Probenpuffer das Ammoniumpersulfat bei der Polyacrylamidgelelektrophorese?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Startet Polymerisation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

b. Verhindert Polymerisation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

c. Verändert optimalen pH-Wert zur Polymerisation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

d. Katalysiert Polymersitation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

Welche denaturierenden oder reduzierenden Agenzien enthält der Probenpuffer?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Dithiothreitol (DTT)

b. β-Mercaptoethanol

c. Natriumdodecylsulfat (SDS)

d. Bromphenolblau

Was muss beim Transferpuffer beachtet werden?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Sollte keine gut leitenden Salze enthalten

b. pH-Wert darf nicht höher als 7 sein

c. muss vor Gebrauch vorgewärmt werden

d. ph-Wert soll gleich gross sein wie der isoelektrische Punkt des Proteins

Welche prozentige Gele werden im Praktikum verwendet?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. 6 und 12%ig

b. 8 und 10%ig

c. 8 und 12%ig

d. 10 und 12%ig

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Welche Faktoren im Sammelgel verursachen einen „Proteinstapel“ (Konzentrierung und Fokussierung) durch Potentialdifferenz?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Molekulargewicht des Proteins

b. Porenweite des Gels

c. unterschiedliche Ionenstärke der Puffer

d. unterschiedlicher pH-Wert der Puffer

Vor der SDS-PAGE werden Proteine:

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. denaturiert

b. markiert

c. reduziert

d. präzipitiert

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Weshalb wird der Marker bei der Detektion nicht sichtbar?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Im Marker gibt es keine Proteine, deshalb wird er bei der Detektion nicht gefärbt

b. Der 2. Antikörper bindet nicht an den Marker, deshalb kann er nicht detektiert werden

c. Der 1. Antikörper bindet nicht an den Marker, deshalb kann er nicht detektiert werden

Bei der diskontinuierlichen SDS- PAGE wandern Proteine:

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. im elektrischen Feld vom Pluspol zum Minuspol

b. im pH-Gradienten von hohem zum niedrigem pH

c. im pH-Gradienten von niedrigem zum hohen pH

d. im elektrischen Feld vom Minuspol zum Pluspol

Welche Vorteile hat der Semi-Dry Blot?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Braucht wenig Transferpuffer

b. Blot wird nicht so stark erwärmt

c. Sehr schonend

d. Dauert nicht so lange

Wozu dient das Natriumdodecylsulfat (SDS) bei der Polyacrylamidgelelektrophorese?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. belädt Protein mit negativen Ladungen

b. Denaturiert Protein

c. Reduziert Disulfid-Bindungen des Proteins

d. belädt Protein mit positiven Ladungen

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Weshalb wird die Probenlösung mit Probenpuffer auf 95 °C erhitzt?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Naturierung der Proteinstruktur

b. Protein präzipiert

c. Denaturierung der Proteinstruktur

d. SDS wird aktiviert

Auf welche Art und Weise lässt sich der Vernetzungsgrad von
SDS-PAGE Gelen beeinflussen?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Konzentration N,N’-Methylenbisacrylamid

b. Verhältnis Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

c. Konzentration Acrylamid

d. Konzentration Agarose

Welche Markierungen (Labeling) weist der sekundäre Antikörper auf?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Horseradish Peroxidase (HRP)

b. AEC

c. ECL

d. Alkaline Phosphatase (AP)

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Wozu dient der Marker im WB Versuch?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Als Vergleich der Grösseneinheiten der Probenproteine in kDA

b. Als Vergleich der Grösseneinheit der Probenproteine in µm

c. Als Vergleich der Masseneinheiten der Probenproteine in mg/ml

d. Als Vergleich der Masseneinheiten der Probenproteine in kDA

Worauf muss man beim WB allgemein achten?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Sollte nicht zu warm werden

b. Membran nicht mit Fingern anfassen

c. Membran nicht zu lange am Licht lassen

d. Luftblasen im Blotting-Sandwich entfernen

e. Membran beim Zusammenbau des Blotting-Sandwichs nicht mehr verschieben

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Wozu dient der Marker im SDS-PAGE Versuch?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Als Vergleich der Masseneinheiten der Probenproteine in kDA

b. Als Vergleich der Masseneinheiten der Probenproteine in mg/ml

c. Als Vergleich der Grösseneinheiten der Probenproteine in kDA

d. Als Vergleich der Grösseneinheit der Probenproteine in µm

Weshalb wird das Gel in eine Coomassie-Lösung eingelegt?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Direkte Anfärbung der Proteinbanden im Gel

b. Reduktion der Proteinbanden im Gel

c. Denaturierung der Proteinbanden im Gel

d. Fixierung der Proteinbanden im Gel

Welche Vorteile hat der Wet Blot?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Blot wird nicht so stark erwärmt

b. Dauert nicht so lange

c. Braucht wenig Transferpuffer

d. Sehr schonend

Welche Art von Transfer sind die Wet- und Semi-Dry Blots?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Transfer mit Druck

b. Transfer mit Diffusion

c. Elektrophoretischer Transfer

d. Transfer mit Vakuum

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Mit Hilfe welcher Chemikalie können Disulfidbrücken reduziert werden?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. durch Natriumdodecylsulfat (SDS)

b. durch APS

c. durch β-Mercaptoethanol

d. durch Dithiothreitol (DTT)

Welche der folgenden Aussagen sind für SDS-PAGE richtig?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Die Anfärbung der Proteinbanden geschieht mit Cu2+-Ionen.

b. Bei der SDS-PAGE werden Proteine entsprechend ihrer Grösse getrennt.

c. Bei der SDS-PAGE werden Proteine aufgrund von Ladungsunterschieden getrennt.

d. Die Wanderungsstrecke eines Proteinmoleküls in der SDS-PAGE ist dem Logarithmus seines Molekulargewichtes proportional.

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Weshalb „wandern" Proteine während dem elektrophoretischen Transfer vom Gel auf die Membran?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Sie sind positiv geladen

b. Sie sind ohne Ladung

c. Sie sind negativ geladen

Welche natürlichen posttranslationale Modifizierungen der Proteine können die Wanderungstendenz im elektrischen Feld verändern?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Carboxylierung

b. Glykosylierung

c. Methylierung

d. Protonierung

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Wie erfolgt der praktische Versuchsablauf SDS-PAGE?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Giessen des Gels, Probenvorbereitung, Probenauftrag, Start der Elektrophorese, Färben

b. Probenvorbereitung, Probenauftrag, Start der Elektrophorese, Giessen des Gels, Ende der Elektrophorese, Färben und Entfärben

c. Giessen des Gels, Probenvorbereitung, Probenauftrag, Start der Elektrophorese, Ende der Elektrophorese, Färben und Entfärben

Welche Membrane werden am Meisten für WB benutzt?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Polyvinylidendifluorid (PVDF)

b. Diazotiertes Papier

c. Polypropylen

d. Nitrocellulose

Welche Proben werden mittels SDS-PAGE analysiert?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. BSA (2mg/mL)

b. IgM (0.5mg/mL)

c. IgG (1mg/mL)

d. ANS (1.5mg/mL)

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Warum werden Proteine in nativen Gelen ohne SDS nicht alleine nach dem Molekulargewicht (ihrer „Grösse“) aufgetrennt?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. unterschiedliche individuelle Struktur der Proteine

b. unterschiedliche individuelle Ladung der Proteine

c. unterschiedliche individuelle Grösse der Proteine

d. unterschiedliche individuelle Masse der Proteine

Wozu dient das TEMED bei der Polyacrylamidgelelektrophorese?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Verhindert Polymerisation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

b. Verändert optimalen pH-Wert zur Polymerisation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

c. Katalysiert Polymersitation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

d. Startet Polymerisation zwischen Acrylamid und N,N’-Methylenbisacrylamid

Weshalb wird Membran nach dem Blotten blockiert?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Zur Absättigung freier Bindungsstellen auf der Membran

b. Zur besseren Bindung des primären Antikörpers

c. Zur besseren Bindung des sekundären Antikörpers

d. Zur besseren Bindung der Proteine auf der Membran

e. Zur Lyse von Bindungsstellen

Weshalb wird das Trenngel von einem Sammelgel bei der diskontinuierlichen SDS-PAGE überschichtet?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. einfachere Handhabung des Gels

b. bessere Nachweisempfindlichkeit der einzelnen Banden

c. schnellere Wandergeschwindigkeit der einzelnen Banden

d. höhere Trennschärfe der einzelnen Banden

Wovon hängt die elektrophoretische Beweglichkeit von geladenen Proteinen ab?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Der Grösse und Gestalt des Moleküls

b. Der Porengrösse des Trägers

c. Der elektrischen Feldstärke

d. Der Gesamt Netto-Ladung des Moleküls

Mit Hilfe welcher Chemikalie können Disulfidbrücken reduziert werden?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. durch Natriumdodecylsulfat (SDS)

b. durch β-Mercaptoethanol

c. durch APS

d. durch Dithiothreitol (DTT)

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Wie stellt man das Sandwich für den Wet-Blot zusammen?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. Schwarze Seite (Kathode), Filter, Schwamm, Gel, Membran, Schwamm, Filter Farblose Seite (Anode)

b. Schwarze Seite (Kathode), Schwamm, Filter, Membran, Gel, Filter, Schwamm, Farblose Seite (Anode)

c. Schwarze Seite (Kathode), Schwamm, Filter, Gel, Membran, Filter, Schwamm, Farblose Seite (Anode)

d. Schwarze Seite (Kathode), Filter, Schwamm, Membran, Gel, Schwamm, Filter Farblose Seite (Anode)

Was sind Vorteile der PVDF Membran?

Wählen Sie eine oder mehrere Antworten:

a. muss nicht mit Methanol benetzt werden

b. extrem hohe Bindekapazität

c. günstig

d. Reissfest