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Durchflusszytometrie
Durchflusszytometrie
Set of flashcards Details
| Flashcards | 8 |
|---|---|
| Language | Deutsch |
| Category | Biology |
| Level | University |
| Created / Updated | 12.07.2015 / 12.07.2015 |
| Weblink |
https://card2brain.ch/box/zkt
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| Embed |
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Was ist Durchflusszytometrie?
Verfahren für die Analyse von Zellen und deren Sortierung in verschiedene Populationen
Ablauf der Durchflusszytometrie
- Zellen in einer Suspension werden über ein Schlauchsystem durch ein Messkopf gepresst
- Zellen werden in einem laminaren Flüssigkeitsstrom so geführt, dass nur jeweils eine Zelle doe Öffnung passieren kann
- Durch die Kapillare wird ein Laser eingestrahlt
- Zellen werden dann aufgrund ihrer Eigenschaft sortiert, dadurch dass vom Laser erzeugte Streu-/ Fluoreszenzlicht detektiert wird von FSC und SSC
Wie kommt es zur Sortierung der Zellen? Nenne ein Beispiel!
Zellen streuen einen Teil des Lichts welches mittels etektoren nachgewiesen wird.
Die Menge des eingestreuten Lichts korrelliert mit der Größe und Komplexität der Zelle
Beispiel: Granulozyten streuen mehr Licht da sie eine raue Oberfläche haben und in ihrem inneren viele Vesikel haben.
Was ist FSC
Vorwärtsstreulicht
Maß für die Beugung des Lichtes im flachen Winkel und hängt vom Volumen der Zelle ab.
Was ist SSC
Seitwärtsstreulicht
Maß für die Brechung des Lichtes im rechten Winkel.
Wird von der Granularität, Größe, Strucktur d. Zellkerns und Menge der Vesikel in einer Zelle beeinflusst
wann beginnt die Sortierung und wie geschieht das?
die zu sortierende Zellen werden umgekehrt polarisiert und im el. Feld abgelenkt.
So fallen sie ins positive Sample
Wie kann man mit FACS den Zellzyklus analysieren?
Durch den DNA-Gehalt innerhalb der verschiedenen Phasen.
Kann man mit Fluoreszenzmarkierung machen z.B. mit DAPI/Propidiumiodid lagert sich zw. den Basen an
Anhand der Helligkeit wird geschaut wie viel DNA sie enthält
Zellzählung im FACS mit Fluoreszensmarkierung
Mit Hilfe von AK die mit Fluoreszenzfarbstoff markiert sind um Population von Zellen zu unterscheiden
AK sind meist gegen bestimmte Oberflächenproteine der CD-Klassifizierung gerichtet
Laser mit verschiedenen Farben und verschiedene Filter werden eingesetzt
Messergebnisse mit Darstellung als Dot-Plot und Histogramm
