Zellkulturgefäße
Worauf wachsen Zellen
Worauf wachsen Zellen
15
0.0 (0)
Kartei Details
| Karten | 15 |
|---|---|
| Sprache | Deutsch |
| Kategorie | Biologie |
| Stufe | Universität |
| Erstellt / Aktualisiert | 13.07.2015 / 13.07.2015 |
| Weblink |
https://card2brain.ch/box/zellkulturgefaee
|
| Einbinden |
<iframe src="https://card2brain.ch/box/zellkulturgefaee/embed" width="780" height="150" scrolling="no" frameborder="0"></iframe>
|
Was für Kulturgefäße gibt es?
- Zellkulturflaschen
- Rollerkulturflaschen
- Petrischalen
- Multikammersysteme
wie haften Zellen an den Gefäßen?
- Adsorption über divalente Kationen
- Kontakt über Fobronectin
- Anheftung über zelleigene Proteoglycane
- Ausbreitung dann Proliferation
Zellkulturflaschen
- anzüchten größerer Zellmengen
- Deckel teilweise offen lassen ausser sie haben einen Filter
Rollerkulturflaschen
- Suspensionkultur haben keinen Kontakt zur Oberfläche
- Anwachsen und Festwachsen wird verhindert durch ständiges Bewegen
Multikammersysteme
- hervorragend für Mehrfachbestimmungen unter Standardbedingungen
- 6 Well Kammer 3ml pro Medium --> 6 kulturen parallel
- 24 Well kammer 500µl pro Medium
- 96 Well Kammer 100µl pro Medium
was ist wichtig für das Anhaften?
- Bivalente Kationen die sich im Medium befinden
- Proteine im Medium z.B Fibronectin, Kollagen
Aus was bestehen Zellkulturmedien?
- AS
- Salze
- Puffersubstanz
- Vitamine
- Als ersatz für das Immunsytem auch Antibiotikum/Antimykotikum
VT Serum?
- enthält alle für das Wachstum notwendige Faktoren
NT Serum?
- Unberechenbarkeit im Hinblick auf Faktoren die sich neg. auf die Zellkultur auswirken können z.B Wachstum
- Proteasen können unerwünscht Proteine abbauen
- MO können trotz steriler Herstellung des Serums darin enthalten sein und somit die Zellkultur infizieren
VT Serumfrei?
- Vermeidung von Kontamination
- Vermeidung von qualitativer und quantitativer Schwankungen
- Untersuchung über Einfluss einzelner Faktoren können besser Beurteilt werden, da man die im Serum enthaltene Substanzen einzeln und definiert zugibt
Glutamin als nichtessenzielle AS
- für Zellstoffwechsel sehr wichtig
- höchste Stickstoffanteil
- gut für Zellen mit hoher ZT-Rate da größeren Energiebedarf
- wichtigste Wachstumsbegrenzende AS
- NT: nicht lange stabil
kann nichtenzymatisch zu Ammoniak abgebaut werden was in hohen Konz. giftig ist
NaHCO3
- Puffer: bei rasch proliferierende Zellen entstehen Stoffwechselprodukte die sich auf den pH-Wert im Medium auswikrt---> wird dadurch neutralisiert
- Futter
HEPES-Puffer
- für mittelprächtig wachsende Zellen die weniger NaHCO3 benötigen
- Medien mit HEPES brauchen nicht mit CO2 gepuffert werden
- kann in Raumluft damit arbeiten da sich der pH-Wert nicht so schnell ändert
Kontamination mit Mycoplasmen
- Problem da man sie mit bloßem Auge nicht erkennen kann
- sind sehr klein, dass sie sterilfilter durchdringen können
- Mycoplasmen müssen Cholesterin, Aminosäuren, Fettsäuren, Vitaminen und andere Katabolite aufnehmen, was zu einer Schädigung der Zellen durch Nährstoffentzug und zur Sekretion schädlicher Stoffwechselprodukte führt
- morphologische Veränderung der Zelllinie
Nachweis von Mycoplasmen
- mit DAPI
schnell kostengünstig
färbt die Mycoplasmen DNA - mit PCR
vervielfältigung der 16s-RNA
sehr sensitiv - mit ELISA
sensitiv
Nachweis erfolgt dabei über eine Antikörperreaktion auf eventuell vorhandene MycoplasmenAntigene
