Mikrobiologie 2. Semester - ZHAW

5 präsumtive Einzelkolonien werden auf Nutrient Agar überimpft und dort kultiviert. Anschliessend wird ein Oxidase Test (oxidation von Cytochrom) durchgeführt. Enterobacteriacaea sind oxidase negativ.

Es entfällt eine Bestätigung.

Mit 5 präsumtiven Einzelkolonien wird der Oxidase-Test durchgeführt. Pseudomonas aeruginosa ist Oxidase positiv.

Eine Bestätigung entfällt.

Mit maximal 5 präsumtiven Kolonien wird mikroskopiert und der Katalase-Test durchgeführt. Laktobazillen sind Katalase negativ.

Hefen werden Mikroskopisch bestätigt (Grösse und Form sind einzigartig).

Eine Bestätigung ist optional und kann beispielsweise mikroskopieren oder Indol-Reaktion beinhalten.

m-ENT (m-Enterococcus), CE-Agar (Fastidious Anaerobic Agar)

Rhapsody-Agar

RPF-Agar (Rabbit plasma fibrinogen)

Chromogenic Urine Agar

Als Endospore wird eine Überdauerungsform bei Bakterien bezeichnet, die sich innerhalb des Bakteriums bildet. Endosporen haben ein stark dehydratisiertes Cytoplasma und enthalten viel Dipicolinsäure in Form von dichtem Gel. Je höher der Anteil an Dipicolinsäure, desto Hitzeresistenter ist die Endospore.

Endosporen sind resistenter gegen Umweltinflüsse als ihre lebenden Zellen (überleben bis zu 200 Jahre).

Das Vorkommen von Endosporen ist Ubiquitär. Hier sind einige Beispiele:

• feuchte, sumpfige Böden
• Überschwemmungsgebiete
• in Kadavern
• bei archeologischen Funden

Bacillen und Clostridien

(Sporolactobacillus, Desulfotomaculum, Sporosarcina und Oscillospira)

• fehlende Nährstoffe
• Anhäufung von Stoffwechselprodukten
• generell suboptimale Bedingungen

• Schutz vor Austrocknung durch Abwesenheit von freiem Wasser (Hohe Umweltresistenz)
• Schutz vor Hitze (trockene besser als feuchte), aufgrund extrem geringeren Wasserhaushaltes von ca. 5% (Normalzustand 70-80%) (Hohe Hitzeresistenz)
• Resistent gegen Chemikalien (Desinfektionsmitteln) durch hydrophobe Aussenwand (enthält cysteinreiches Protein)
• Hohe Strahlungsresistenz

Je höher der Gehalt an Dipicolinsäure in der Spore ist, desto hitzeresistenter ist die Endospore.

Endosporen sind gut im Mikroskop erkennbar, man kann sie jedoch auch anfärben.

Die Sporen werden nachgewiesen, indem sie kultiviert werden. Dazu müssen sie zunächt aktiviert werden (Ethanol oder Hitze), gequellt (mit postgerminativer Entwicklung) und anschliessend kultiviert werden (Gussplattenverfahren). Es können damit aerobe und anaerobe Sporen nachgewiesen werden.

Die Sporen werden entweder mit Ethanol oder mit Hitze behandelt, sodass sie aktiviert werden:

Hitzebehandlung:

• Heisses Wasserbad, anschliessend Kälteschock

Ethanolbehandlung

• Sporenprobe mit derselben Menge Ethanol mischen und umrühren (bei Raumtemp. stehen lassen)

• Wasseraufnahme der Sporen, Verlust der Resistenzen
• Ausscheidung von Dipicolinsäure und Aminosäuren
• Abbau vom Cortex
• Austritt der vegetativen Zelle als Keimschlauch aus der Spore

• Anschwellen der Zelle durch Wasseraufnahme
• Beginn der RNA- und Proteinsynthese
• Aufbau der Zellwand

• Gram positiv
• Stäbchenförmig
• Beweglich, meistens peritrich begeisselt

Durch Wachstumsbedingungen kann eine Selektion erfolgen. Beispielsweise kann die Atmosphäre und die Temperatur angepasst werden, um gewisse Stämme zu selektionieren.

z.B. E.Coli bei höheren Temp. inkubieren -> andere mesohpile MO können nicht mehr wachsen. Sauerstoffausschluss führt zu einem ausschliesslichem Wachstum von aeroben und fakultativ anaeroben MO.

• pflanzenähnliche MO
• Gewinnung von Energie durch den Abbau von organischem Material
• Pilze sind chemoorganoheterotroph

Pilze sind Ubiquitär. Die meisten sind aerob, es gibt aber auch einzelne fakultativ anaerobe Pilze.

Neue Erkenntnisse aus der Molekularbiologie haben zu einer neuen Einteilung der Pilze geführt. Es wird unterschieden zwischen echten Pilzen und Protisten (pilzähnliche Formen).

Es werden Sporen gebildet. Dabei wird zwischen sexuelle und asexuellen Sporen unterschieden. Für die Verbreitung spielen die asexuelle Sporen die Hauptrolle. Asexuelle durchlaufen eine Mitose oder werden abgeschnürt, bevor sie ohne Verschmelzung wachsen. Sexuelle Sporen werden durch Meiose gebildet.

Bei Wachstum bildet sich aus den Hyphen ein Mycel. Das Mycel beschreibt die Gesamtheit der Hyphen und bildet den Körper des Pilzes.

Hyphen wachsen hauptsächlich in der Zone unmittelbar hinder der Spitze (Mitose). Hyphen können autonom weiter wachsen, wenn sie getrennt werden.

• telemorphe Arte vermehren sich sexuell 
• Anamorphe Aren hingegen vermehren sich auschliesslich asexuell

Die asexuelle Fruchtifikation beschreibt die Fruchtkörperbildung von Pilzen, die sich nicht sexuell vermehren. Diese Art von Pilzen wird auch als die anamorphe Form bezeichnet. Es gibt verschiedene Arten von Sporen.

• Konidiosporen
  • einzeln oder verkettet und auf Konidienträgern insertiert, Konidienträger sind sehr formenreich
• Sporangiosporen
  • Entwicklung der Sporen in Sporenbehältern, den Sporangien, vorkommend bei den Zygomyceten
• Zoosporen
  • begeisselte Sporen, können sich im Wasser/Wasserfilm fortbewegen, können auf asexuellem oder sexuellem Weg entstehen
• Arthrosporen
  • enstehen durch zerbrechen von Hyphen
• Chlamydosporen
  • Entstehen innerhalb von Hyphen und auch durch Sprossung, sind von einer dicken Wand umgeben

Sie beschreibt die Fruchtkörperbildung von teleomorphen Pilzen (sich sexuell vermehrenden Pilzen). Es werden dabei durch Meiose Sporen gebildet, die anschliessend Verschmelzen. Sexuell gebildete Sporen bilden oft die Überdauerungsform von Pilzen.