Kl. Chemie 3
Chromatographie
Chromatographie
Kartei Details
| Karten | 32 |
|---|---|
| Sprache | Deutsch |
| Kategorie | Chemie |
| Stufe | Andere |
| Erstellt / Aktualisiert | 20.10.2020 / 09.11.2020 |
| Weblink |
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Definition Chromatographie:
Auftrennung verschiedener Substanzen mithilfe der Wechselwirkung zwischen Mobile und Feste Phase
Anwendugsbereiche
In der Toxikologie wird es als Bestätignugstest angewendet
Welche Trennprinzipien gibt es? (4)
''wann ist es eine Chromatographie''?
-Trennung beruht auf Verteilung von Substanzen zwischen Phasen
-zwei nicht mischbare Phasen
-eine mobile und eine stationäre Phase
-kontinuirliche Abfolge von Gleichgewichtseinstellungen
Welche Trennmechanismen (''Gleichgewichtstypen'') gibt es? (5)
Wie Funktionieren sie?
Ausschlusschromatographie (Molekühlgrösse):
-an porösen Oberflächen werden kleine mehr zurückgehaltenals grosse
Adsorption:
-kurze Anlagerung eines Stoffes an einen anderen, ohne chemische Bindungen
-''kurzer Stopp''
Verteilung:
-löslichkeit in zwei nicht miteinander mischbaren Flüssigkeiten (oder gas & Flüssigkeit)
Ionenaustausch:
-durch Ladung
-ungeladene wandern schneller
Affinität:
-spezifische Wechselwirkung zwischen Stationärer Phase und Analyt
Welche 2 Chromatographen schauen wir an?
HPLC
GC
HPLC
Aufbau
Entgaser:
-Sauerstoff wird entfernt = ruhigeres Chromatogramm
Pumpe:
-erzeugt Druck, Spart Zeit -> bus 450bar
Injektionsventil:
-Probe wird eingebracht
-hier befindet sich auch die Probenschleife
Vorsäule & Säule:
-Auftrennung der stoffe
Detektor:
-Erfassen der Probenmoleküle
HPLC
Für was ist die Probenschleife?
-sie kann eine fest definierte Mänge Fassen und wird mit der Probe ''überfüllt''.
(oder man gibt mit einer exakten Spritze ein definiertes Volumen in die Schleife)
HPLC
Ausgeschrieben?
Hight Performance Liquide Chromatographie
HPLC
Mobile Phase?
Stationäre Phase?
Bedingungen für HLFC?
Mobile Phase: Eluent
Stationäre Phase : Säule
Bedingung:
-Probe muss sich in einem Lösungsmittel lösen können
HPLC
Welche Optimierungsmöglichkeiten ?
-Gradienten
-Fluss
-Wellenlänge
-Säule
-Temp.
-pH-Wert
HPLC
Was sind Gradientenläufe?
Was sind isokratischer Lauf?
isokratischer Lauf:
-während des gesemmten Chromatogrielauf wird keine Veränderung vorgenommen
Gradientenlauf:
-bedingungen wärend dem Lauf verändern
-> Analysezeit und qualität beeinflussen
HPLC
Stationäre Phase:
welche 2 Arten gibt es? Welche wird häufig eigesetzt? -> was ist der vorteil bei diesem?
Umkehrphase:
-Stationärphase A-Polar
-Lösemittel Polar
-Analyt A-polar
-OH-Gruppe nicht zugänglich
-häufige verwendet
--> kann mit Wasser in Berührung kommen
--> kann z.T Polar gemacht werden, damit auch Polare Analyten gemessen werden können
Normalphase:
-Stationärphase Polar
-Lösemittel A-Polar
-Analyt Polar
-OH-Gruppe zugänglich
-ACHTUNG: nicht mit Wasser in Berührung kommen!
HPLC
Stationäre Phase:
Säuleneigenschaften
-Teilchengrösse
-Porenstruktur
-Druckstabilität
-Chemische Modifikation
-Länge
-Durchmesser
GC
Aufbau:
1) Trägergas
2) Injektor
3) Säule im Säulenofen
4) Detektor (FID am häufigsten)
5) Signalaufzeichnung
GC
Detektor:
Welches ist der häuifigste?
FID: (Flame ionization detector)
GC
Stationäre Phase?
Mobile Phase?
Stationäre Phase:
-Kapillare
Mobile Phase:
-Trägergas
--> Helium, Wasserstoff, Stickstoff
GC
Voraussetzung des Analyten?
Verdampfbare Stoffe
GC
Welche Optimierungsmöglichkeiten?
-Temperatur
-Flow
-Injektionvolumen
GC
Vorteil: Oft schönere ______
Peaks
Dedektoren
Was macht er?
Erfasst getrennte Analyten und erstellt daraus ein Chromatogramm
Dedektoren:
HPLC (6)
UV:
-Häufigster
-Lichtabsorption durch die Moble Phase im UV-Bereich
Dioden-Array-Detektor (DAD):
-Gleich wie UV, jedoch mehrere Wellenlänge gleichzeitig
Brechungisndex Detektor:
-unempfindlicher als UV, kann jedoch Substanzen erkennen, welche nicht UV-Abdsorption zeigen
Fluereszenz Detektor (FLD):
-1000 mal sensitiver als UV
-mithilfe Fluoreszenz
Lichtstreu Detektor:
-für nicht oider gering UV-Aktive Stoffe
-Lipide, Tenside, Kohlenhydrate, Aminosäre....
MS:
-hiermit kann auf die chemische Struktur der ursprünglichen Substanz in der Probe geschlussfolgert werden
Dedektoren:
HPLC
MS:
Aufbau und Prinzip (nur grob)
Mit diesem Detektor kann die Ionenmasse (also schlussendlich der Gesuchte Analyt) bestimm werden.
Ionenquelle:
-''Schiesst'' geladene teilchen
Wienfilter:
-Sorgt mit der Lorenzkraft, dass nur Ionen, welche eine bestimmte Geschwindigkeit haben, dieses Feld gerade durchqueren
Detektor:
-Je nach Masse Werden die teilchen mit der Zentripedalkraft in einen Halbkreis an einen Detektor geworfen
-Je grösser die Masse, umso grösser der Radius
Dedektoren
GC
FID: Flammenionisationsdetektor
-Universell
-erfasst alle Kohlenstoffhaltige Verbindungen
Prinzip:
Analyt wird durch eine Flamme ionisiert und dadurch fliesst ein messbarer Strom
Chromatgramm:
Definition
die vom Detekor erfassten Signale werden durch ein Computerprogramm in Form eines Duagrammes Dargestellt.
Y-Achse= Signalintensität
X-Achse= Zeit
Chromatgramm:
Basislinie?
Integration?
Basislinie:
-sollte möglicht Ruihg verlaufen = Störungsfrei
Integrationszeit:
-Basisline des Peaks
Chromatgramm
Retentionszeit
Zeit die ein Analyt für das Passieren der Säule benötigt
-> Substanzspezifisch!
Chromatgramm
Totzeit t0
Zeit, die die Mobile Phase benötigt um die Säule zu Durchqueren.
-Substanz, welche mit der Säule keine Wechselwirkung eingeht
Wird für die Bestimmung Nettoretensionszeit benötigt
Chromatgramm
Nettoretentionszeit
Sagt aus, wie lange sich eine Probe in der Stationären Phase aufgehalten hat
-> um diese zu definieren, benötigt man die Totzeit
Chromatgramm
Wie wird Identifiziert?
Wie wird Quantifiziert?
Identifiziert:
-Retensionszeit
Quantifiziert:
-PeakFläche
-PeakHöhe
Chromatgramm
Wie sieht ein idealer Peak aus?
-Symetrisch
-Peak beginnt/Endet auf der Basislinie
Chromatgramm
Welche zwei ''Abweichungsformen'' eines Idealen Chromatogramm gibt es?
Grund?
Wie heisst die Kenngrösse?
Tailing
Fronting
Überladungseffekte
T = Tailingfaktor
Chromatgramm
Was bedeutet Signal to Noise (S/N) ?
Wofür gebraucht?
Welche frage stellt sich?
wie?
Eine Störung der Basislinie ist ''Normal''
Bestimmung der Nachweis Grenze
Handelt es sich um einen echten Peak?
Wird mithilfe einer Blindprobe und einer Probe mit zu bestimmenden Analyt ertsellt
