Automation Hämatologie

• Vorwerte vom Pat. prüfen
• Mikroskop
• Neue Probe mit Citrat oder Heparin
• Messung wiederholen daruaf achten das Citrat 1:10 verdünnt ist --> Verdünnung anpassen
• Makroskopische Prüfung: Aggregation, mini-gerinnsel können mit einem Holzstäbchen überprüft werden.
• Bei Riesnthrombozyten: PLT-O Messung zum Unterscheiden von TC und EC

• Leukozyten
• Zelle wird Lysiert
• Je weiter oben in der Grafik, desto mehr Floreszenz, desto mehr RNA
• SFL: Fluoreszenzmessung
• SSL: Komplexität

• Normoblasten und Leukozytenzahl wird gemessen
• EC lysiert
• Alle Zellen werden auf den Kern geschrumpft
• Basophile nicht, daher können sie seperat gezählt werden
• Viele Debri's: Messung nicht richtig gemacht, zu viele EC/TC, nicht richtig lysiert

• Optische Messung
• Wolke: je unreifer desto mehr rechts, je grösser desto höher
• Blaue Wolke sind EC, daneben Retikulozyten (LFR,MFR, HFR)
• Warum im PLT-O die TC messen: Unterscheidung der TC möglich durch Grösse und Fluoreszenz

LFR = Low Fluorescence Retikulocyte -> reife Reti

MFR = Medium Flu. Reti. -> mittelreife Reti

HFR = High. Flu. Reti. -> unreif

IRF = Immature Ret. Fraction -> MFR+HFR

pink: Lymphozyten

grün: Momozyten

blau: Neutrophile+Basophile

orange: Eosinophile

IG: oberhalb neutro+baso

FSC:

Pink: Normoblasten

dunkel blau: RBC

hell blau: Mono

Violett: Baso

• Referenzwerte beachten
• Scattergramm, Histogramm mit Werten vergleichen
• FLAG, Messages prüfen
• Zeichen beachten
• WBC betreffend mikroskopisch Diff
• Weitere Kanäle zur Ktr einschalten
• Präanalytische Fehler (Aggreagte, zu wenig/ zu viel gefüllt, mischen-hämolyse, Leerwert und mischen vor Messung)
• Zu hohe Zellzahl dan verdünnen

• Differenzierungsmessung
• Normoblasten können nicht dasgestellt werden
• Kann unreife Zellen nicht gut darstellen

• stellt nur unreife Zellen dar
• z.B Linksverschiebung
• Thrombozytenaggregate
•  

Extra Darstellung der Normoblasten

• Thrombozytopenie
• Stärkere Verdünnung

RBC und PLT

Frontsheat bewirkt erhöhte Flussgeschwindigkeit, so das Zellen einzeln durch Messöffnung gehen. Durch die Sorgwirkung wird eine Rezirkulation verhindert.

Jede Zeller erzeugt eine andere Spannung durch die kann die Grösse und das Volumen der Zelle gemessen werden.

Höhe: Anzahl

Breite: Grösse

TC 2-30fl und RBC geht bis 250fl

RBC und PLT werden einzeln dargestellt und es werden variabe Diskiminatoren gesetzt (auf Grundline)

• Zu wenig
• Thrombozytenaggregate: abnormes PLT-Histogramm
• Pseudothrombopenie
• Riesenthrombozyten: abnormes PLT-Histogramm
• Zu viel
• Mikrozyten (ernierdrigtes MCV)
• Fragmentiere EC (Abnormes RBC- und PLT-Histogramm)

• nierdrig
• EC-Aggregate = Kälteagglutine (erhöhtes MCV, MCHC wegen erniedrigtem HCT)
• schwere Mikrozytose (erniedrigtes MCV)
• Fragmentierte EC (Abnormes RBC- und PLT-Histogramm)
• hoch
• Sehr hohe Leukozytenzahl
• ReisenTC
• abnormes RBC und PLT-Histogramm
• Kryoprotein / Kryoglobulin

Wird auf Grundlager der ECvolumina berechnet, welche mit der Impendanzmessung ermittelt wurde.

Kumulative Implushöhensummierung

Sodium-lauryl-sulfat photometrische Messung

• EC lysiert
• hydrophobegruppe von SLS bindet an Globin = Konformationsänderung
• Fe2+ oxidiert zu Fe3+
• hydrophilegruppe von SLS bindet an Fe3+
• Stabiles Produkt welches gemessen werden kann

• 555nm
• Kalibration
• HGB Leerwert
• 1:500 verdünnte Probe
• Probenwert-Leerwert

Mögliche Störungen falsch hohes Hb

• Lipidämie
• Hohe Leuks
• Abnorme Proteine

falsch niedrig

• Kälteagglutine = erhöhtes MCV und MCHC
• Fragmentozyten = abnormes RBC und PLT Histogramm
• MikroEC

flasch hoch

• Leukozytose = extrem hohe LC und gleichzeitig niedrig RC zahl
• Sphährozytose

• Lichtstrahl wird von Zelle in alle Richtungen gestreut
• Streuwinkel gibt Auskunft über physikalischen Eigenschaften
• Durch BH mit Reagenzien werden Unterschiede verstärkt
• Jede Zellline hat somit ihr eigenes Muster des Streulichts 

FSC = Forward Scatter Light = Vorwärtsstreulicht, Zellvolumen

SSC = Side Scattered Light = Seitwärtsstreulicht, interne Zellstruktur

SFL = Side Fluorescencez Light = Seitwärtsfluoreszenzlicht, DNA/RNA

• DNA ist erhöht bei Zellaktivität (Teilungsfähiugkeit Kern)
• RNA erhöht bei Plasma Aktivität (Eiweisssynthese)

Side Scattered Light

• ohne Granula = kleines Seitwärtsstreulicht
•  mit Granula = grosses Seitwärtsstreulicht

Forward Scattered Light

•  klein = kleines Vorwärtsstreulicht
•  gross = grosses Vorwärtsstreulicht

wird für die Lyse der EC und TC benötigt und perforiert die Leukozytenmembran

Dringt in Zelle und färb RNA und DNA 

NRBC können so gut von LC getrennt werden

• Zelle wird mit Fluorcell markiert und mit Cellpack verdünnnt
• Für Thrombopenien, da es kaum Interferenzen gibt.

WBC BF: Differenzierung im PMN- und MN-Zellen

RBC-BF: Zählung EC im sep. Messkanal

Warnung bei Interferenzen, z.B Zelltrümmer, Hochfluoreszierende Zellen