Zellkulturgefäße
Worauf wachsen Zellen
Worauf wachsen Zellen
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J. A.
J. A.
Diese Lernkarten bieten einen umfassenden Überblick über die Grundlagen und Techniken der Zellkultur an der Universität. Sie behandeln wichtige Aspekte wie die Verwendung von Medien, Seren und verschiedenen Kulturgefäßen, einschließlich Zellkulturflaschen, Rollerkulturflaschen und Multikammersystemen. Besonders relevant sind Themen wie der Nachweis und die Kontamination mit Mycoplasmen, die Bedeutung von Glutamin und die Rolle von Puffern wie HEPES und NaHCO3. Diese Karteikarten sind ideal für Studierende und Forscher, die sich mit Zellkulturen beschäftigen und ein tiefes Verständnis der verwendeten Materialien und Methoden erlangen möchten.
Cartes-fiches
15
Utilisateurs
1
Langue
Allemand
Catégorie
Biologie
Niveau
Université
Créé / Mis à jour
13.07.2015 / 13.07.2015
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Cartes-fiches
Was für Kulturgefäße gibt es?
- Zellkulturflaschen
- Rollerkulturflaschen
- Petrischalen
- Multikammersysteme
wie haften Zellen an den Gefäßen?
- Adsorption über divalente Kationen
- Kontakt über Fobronectin
- Anheftung über zelleigene Proteoglycane
- Ausbreitung dann Proliferation
Zellkulturflaschen
- anzüchten größerer Zellmengen
- Deckel teilweise offen lassen ausser sie haben einen Filter
Rollerkulturflaschen
- Suspensionkultur haben keinen Kontakt zur Oberfläche
- Anwachsen und Festwachsen wird verhindert durch ständiges Bewegen
Multikammersysteme
- hervorragend für Mehrfachbestimmungen unter Standardbedingungen
- 6 Well Kammer 3ml pro Medium --> 6 kulturen parallel
- 24 Well kammer 500µl pro Medium
- 96 Well Kammer 100µl pro Medium
was ist wichtig für das Anhaften?
- Bivalente Kationen die sich im Medium befinden
- Proteine im Medium z.B Fibronectin, Kollagen
Aus was bestehen Zellkulturmedien?
- AS
- Salze
- Puffersubstanz
- Vitamine
- Als ersatz für das Immunsytem auch Antibiotikum/Antimykotikum
VT Serum?
- enthält alle für das Wachstum notwendige Faktoren
NT Serum?
- Unberechenbarkeit im Hinblick auf Faktoren die sich neg. auf die Zellkultur auswirken können z.B Wachstum
- Proteasen können unerwünscht Proteine abbauen
- MO können trotz steriler Herstellung des Serums darin enthalten sein und somit die Zellkultur infizieren
VT Serumfrei?
- Vermeidung von Kontamination
- Vermeidung von qualitativer und quantitativer Schwankungen
- Untersuchung über Einfluss einzelner Faktoren können besser Beurteilt werden, da man die im Serum enthaltene Substanzen einzeln und definiert zugibt
Glutamin als nichtessenzielle AS
- für Zellstoffwechsel sehr wichtig
- höchste Stickstoffanteil
- gut für Zellen mit hoher ZT-Rate da größeren Energiebedarf
- wichtigste Wachstumsbegrenzende AS
- NT: nicht lange stabil
kann nichtenzymatisch zu Ammoniak abgebaut werden was in hohen Konz. giftig ist
NaHCO3
- Puffer: bei rasch proliferierende Zellen entstehen Stoffwechselprodukte die sich auf den pH-Wert im Medium auswikrt---> wird dadurch neutralisiert
- Futter
HEPES-Puffer
- für mittelprächtig wachsende Zellen die weniger NaHCO3 benötigen
- Medien mit HEPES brauchen nicht mit CO2 gepuffert werden
- kann in Raumluft damit arbeiten da sich der pH-Wert nicht so schnell ändert
Kontamination mit Mycoplasmen
- Problem da man sie mit bloßem Auge nicht erkennen kann
- sind sehr klein, dass sie sterilfilter durchdringen können
- Mycoplasmen müssen Cholesterin, Aminosäuren, Fettsäuren, Vitaminen und andere Katabolite aufnehmen, was zu einer Schädigung der Zellen durch Nährstoffentzug und zur Sekretion schädlicher Stoffwechselprodukte führt
- morphologische Veränderung der Zelllinie
Nachweis von Mycoplasmen
- mit DAPI
schnell kostengünstig
färbt die Mycoplasmen DNA - mit PCR
vervielfältigung der 16s-RNA
sehr sensitiv - mit ELISA
sensitiv
Nachweis erfolgt dabei über eine Antikörperreaktion auf eventuell vorhandene MycoplasmenAntigene
