Zellkulturgefäße

Worauf wachsen Zellen

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Fichier Détails

Cartes-fiches	15
Langue	Deutsch
Catégorie	Biologie
Niveau	Université
Crée / Actualisé	13.07.2015 / 13.07.2015
Lien de web	https://card2brain.ch/box/zellkulturgefaee
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Was für Kulturgefäße gibt es?

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Zellkulturflaschen
Rollerkulturflaschen
Petrischalen
Multikammersysteme

wie haften Zellen an den Gefäßen?

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Adsorption über divalente Kationen
Kontakt über Fobronectin
Anheftung über zelleigene Proteoglycane
Ausbreitung dann Proliferation

Zellkulturflaschen

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anzüchten größerer Zellmengen
Deckel teilweise offen lassen ausser sie haben einen Filter

Rollerkulturflaschen

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Suspensionkultur haben keinen Kontakt zur Oberfläche
Anwachsen und Festwachsen wird verhindert durch ständiges Bewegen

Multikammersysteme

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hervorragend für Mehrfachbestimmungen unter Standardbedingungen
6 Well Kammer 3ml pro Medium --> 6 kulturen parallel
24 Well kammer 500µl pro Medium
96 Well Kammer 100µl pro Medium

was ist wichtig für das Anhaften?

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Bivalente Kationen die sich im Medium befinden
Proteine im Medium z.B Fibronectin, Kollagen

Aus was bestehen Zellkulturmedien?

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AS
Salze
Puffersubstanz
Vitamine
Als ersatz für das Immunsytem auch Antibiotikum/Antimykotikum

VT Serum?

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enthält alle für das Wachstum notwendige Faktoren

NT Serum?

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Unberechenbarkeit im Hinblick auf Faktoren die sich neg. auf die Zellkultur auswirken können z.B Wachstum
Proteasen können unerwünscht Proteine abbauen
MO können trotz steriler Herstellung des Serums darin enthalten sein und somit die Zellkultur infizieren

VT Serumfrei?

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Vermeidung von Kontamination
Vermeidung von qualitativer und quantitativer Schwankungen
Untersuchung über Einfluss einzelner Faktoren können besser Beurteilt werden, da man die im Serum enthaltene Substanzen einzeln und definiert zugibt

Glutamin als nichtessenzielle AS

für Zellstoffwechsel sehr wichtig
höchste Stickstoffanteil
gut für Zellen mit hoher ZT-Rate da größeren Energiebedarf
wichtigste Wachstumsbegrenzende AS
NT: nicht lange stabil
kann nichtenzymatisch zu Ammoniak abgebaut werden was in hohen Konz. giftig ist

NaHCO3

Puffer: bei rasch proliferierende Zellen entstehen Stoffwechselprodukte die sich auf den pH-Wert im Medium auswikrt---> wird dadurch neutralisiert
Futter

HEPES-Puffer

für mittelprächtig wachsende Zellen die weniger NaHCO3 benötigen
Medien mit HEPES brauchen nicht mit CO2 gepuffert werden
kann in Raumluft damit arbeiten da sich der pH-Wert nicht so schnell ändert

Kontamination mit Mycoplasmen

Problem da man sie mit bloßem Auge nicht erkennen kann
sind sehr klein, dass sie sterilfilter durchdringen können
Mycoplasmen müssen Cholesterin, Aminosäuren, Fettsäuren, Vitaminen und andere Katabolite aufnehmen, was zu einer Schädigung der Zellen durch Nährstoffentzug und zur Sekretion schädlicher Stoffwechselprodukte führt
morphologische Veränderung der Zelllinie

Nachweis von Mycoplasmen

mit DAPI
schnell kostengünstig
färbt die Mycoplasmen DNA
mit PCR
vervielfältigung der 16s-RNA
sehr sensitiv
mit ELISA
sensitiv
Nachweis erfolgt dabei über eine Antikörperreaktion auf eventuell vorhandene MycoplasmenAntigene

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