Tierphysio Teil 5
Exosomes + Small RNA Sequencing
Exosomes + Small RNA Sequencing
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L. H.
L. H.
Diese Lernkarten bieten einen Überblick über die Physiologie von Tieren auf Universitätsniveau, mit Fokus auf RNA-Analysen und Milchkomponenten. Sie behandeln die Bedeutung von RNA-Qualität, Mikrovesikeln und Exosomen, insbesondere in Milch und Blut, sowie deren Rolle im Immunsystem. Die Karten eignen sich für Studierende der Biologie, die sich mit molekularen und zellulären Prozessen in der Tierphysiologie auseinandersetzen.
Cartes-fiches
13
Utilisateurs
1
Langue
Allemand
Catégorie
Biologie
Niveau
Université
Créé / Mis à jour
28.01.2015 / 28.01.2015
Membranvesikel in Biofluiden
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- apoptotische Bläschen
- präapoptotische Zelle
- Frühe apoptotische Zelle
- späte apoptotische Zelle
- shedding Mikrovesikel
- nicht-sekretorisches exocytische Vesikel --> Stimulus--> shedding vesicles
- exosomale Morphologie
- Membranvesikel
- 40-100 nm
- enthält Proteine, mRNA, miRNA
- Sekretiert von verschiedenen Zellen
- Exosomalel Sekretion
- Bild
- Exosomfunktion
- Exosomfusion
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- Bild
-
- directed Fusion mit der Zelle oder der Endosommembran
- Transport von funktionalen mRNAs und miRNAs zwischen
- versch. Zelltypen
- versch. Tieren
Bedeutung von microRNAs
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- eine einzelne messenger RNA kann an viele miRNAs binden
- eine einzelne miRNA kann an viele messenger RNAs binden
Isolierung des Exosoms
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- Plasma / entrahmte Milch
- differentielle Ultrazentrifugation
- Sucrose-Gradient
Ist Milch mehr als nur Ernährung?
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- Hauptnahrungsquelle von Neugeborenen (NÄhrstoffe ausbalanciert)
- Immunstimulierende Komponenten, besonders des Colostrums
- Immunglobuline
- Lactoferrin, Iysosyme
- Anwesenheit von stabilen Mikrovesikeln, die AS enthalten
- Physiologische Bedeutung der Milch
- Brustspezifisches Immunsystem
- Protein und Fett-Stoffwechsel
Konzentrationen in Blut/ Colostrum/ Milch
- RNA
- exosomale RNA
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- Blut >Colostrum>Milch
- Colostrum exosom > Milchexosom> Blutexosom
Beispiel: Transfer des Milchexosoms
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- Vorbereitung
- nach dem ersten Stillen (COlostrum)
- sofort nach der ersten Fütterung des Kalbs
- Damm: Blut + Colostrum
- Kalb: stündlich Blut (bis zur zweiten Fütterung
- Detektion von miRNAs und exosomalen Proteinen
Milchabhängige miRNA Expression
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
l
Next-Generation-RNA-Sequencing
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- Sampling/ RNA Extraction
- cDNA Library/ Sequencing
- Trimming/ QUalitätskontrolle
- Mapping / Annotation
- Differential Analysis
SIze Selection
Commandes clavier:
= tourner,
= avant/arrière,
= faire défiler
- Anreicherung von kleinen RNA inserts
- Reduktion von unspezifischer Noise
- degradierte RNA
- unligierte Adaptoren
- mRNA
- interessante Längen von INserts
- miRNA 18-25 nt
- siRNA 20-23 nt
- piRNA 28-35 nt
Bridge PCR
l
Trimming
- Adapter-Sequenz
- minimale Insertlänge: z.B. 15 Basen
- maximale ANzahl an Mismatches: z.B. 4
Einfluss der RNA-QUalität
- Indikatoren für die RNA-Intaktheit
- Ribosomale RNA-Rate: 2:1 (28s_18s)
- Abwesenheit von Abbau-Produkten
- gut definierte kleine RNA Profile
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Membranvesikel in Biofluiden
- apoptotische Bläschen
- präapoptotische Zelle
- Frühe apoptotische Zelle
- späte apoptotische Zelle
- shedding Mikrovesikel
- nicht-sekretorisches exocytische Vesikel --> Stimulus--> shedding vesicles
- exosomale Morphologie
- Membranvesikel
- 40-100 nm
- enthält Proteine, mRNA, miRNA
- Sekretiert von verschiedenen Zellen
- Exosomalel Sekretion
- Bild
- Exosomfunktion
- Exosomfusion
- Bild
-
- directed Fusion mit der Zelle oder der Endosommembran
- Transport von funktionalen mRNAs und miRNAs zwischen
- versch. Zelltypen
- versch. Tieren
Bedeutung von microRNAs
- eine einzelne messenger RNA kann an viele miRNAs binden
- eine einzelne miRNA kann an viele messenger RNAs binden
Isolierung des Exosoms
- Plasma / entrahmte Milch
- differentielle Ultrazentrifugation
- Sucrose-Gradient
Ist Milch mehr als nur Ernährung?
- Hauptnahrungsquelle von Neugeborenen (NÄhrstoffe ausbalanciert)
- Immunstimulierende Komponenten, besonders des Colostrums
- Immunglobuline
- Lactoferrin, Iysosyme
- Anwesenheit von stabilen Mikrovesikeln, die AS enthalten
- Physiologische Bedeutung der Milch
- Brustspezifisches Immunsystem
- Protein und Fett-Stoffwechsel
Konzentrationen in Blut/ Colostrum/ Milch
- RNA
- exosomale RNA
- Blut >Colostrum>Milch
- Colostrum exosom > Milchexosom> Blutexosom
Beispiel: Transfer des Milchexosoms
- Vorbereitung
- nach dem ersten Stillen (COlostrum)
- sofort nach der ersten Fütterung des Kalbs
- Damm: Blut + Colostrum
- Kalb: stündlich Blut (bis zur zweiten Fütterung
- Detektion von miRNAs und exosomalen Proteinen
Milchabhängige miRNA Expression
l
Next-Generation-RNA-Sequencing
- Sampling/ RNA Extraction
- cDNA Library/ Sequencing
- Trimming/ QUalitätskontrolle
- Mapping / Annotation
- Differential Analysis
SIze Selection
- Anreicherung von kleinen RNA inserts
- Reduktion von unspezifischer Noise
- degradierte RNA
- unligierte Adaptoren
- mRNA
- interessante Längen von INserts
- miRNA 18-25 nt
- siRNA 20-23 nt
- piRNA 28-35 nt
Bridge PCR
l
Trimming
- Adapter-Sequenz
- minimale Insertlänge: z.B. 15 Basen
- maximale ANzahl an Mismatches: z.B. 4
Einfluss der RNA-QUalität
- Indikatoren für die RNA-Intaktheit
- Ribosomale RNA-Rate: 2:1 (28s_18s)
- Abwesenheit von Abbau-Produkten
- gut definierte kleine RNA Profile
