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Flashcards
Was ist Trasnformation?
Übertragung genetischer Information durch Aufnahme freier DNA
Was sind natürlich Kompetente Bakterien?
freie DNA aus der Umwelt durch ihre Zellwand aufnehmen
Was wird bei Gentechnik gemacht?
Transformation, DNA in Zielorganismus einführen
KEINE natürlich kompetenten Stämme, da nichts ausversehen aufgenommen werden soll
Welche Stämme benutzt Gentechnik?
Keine natürlichen (keine aufnahme anderer DNA)
oft E. coli: künstlich kompetent: verlieren Kompetenz nach einmaliger Behandlung
Wie wird E.coli künstlich kompetent gemacht?
durch Behandlung mit Rubidiumchlorid und Calciumchlorid
Ionen setzen sich in Bakterienmembran fest, sodass DNA diffundieren kann
Wofür wird die Transformation mit E-coli verwendet?
ist ein molekularbiologisches Standartverfahren
Vervielfältigung DNA-Moleküle in großer Menge
Proteinüberexpression
Warum wird E. coli für Proteinüberexpression verwenet?
am besten untersucht&einfach genetisch zu manipulieren
vervielfältigt Protein und isoliert es für Versuche (enzymatisch, immunologisch,...)
Wie schafft es das Proteom von E.coli aus bis zu 70% Zielprotein zu bestehen?
Gen wird hinter starke Promotoren kloniert
Welcher Promotor hilft bei der Genexpression in E. coli? und was beinhaltet er?
pQE60
enthält T5-Promotor (steuert Proteinbiosynthese)
zwei Lac-Operon Sequenzen (Regulierbarkeit)
Resistenz gegen Ampicillin
Wie Regulieren Lac Operons in pQE60?
Im Normalzustand mit LacI besetzt.
Durch Zugabe von Isopropylthiogalactosid dissoziation von Operon, sodass Transkription