MAI
MA I Berlin
MA I Berlin
Kartei Details
| Karten | 17 |
|---|---|
| Sprache | Deutsch |
| Kategorie | Biologie |
| Stufe | Universität |
| Erstellt / Aktualisiert | 06.03.2015 / 06.03.2015 |
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Nenne notwendigen Inhaltsstoffe der Luff´schen Lsg, zeige kurz Notwendigkeit beim Nachweis!
Citronsäure : Komplexiermittel, damit Cu in Lsg bleibt, nicht als Kupferhydroxid ausfällt
Natriumcarbonat: basisch (pH 9,3) da sonst Zucker hydrolisieren, nicht nachweisbar wären,dient als Puffer
Kupfersulfat: dient als Oxidationsmittel im Redoxsystem, red.Zucker reagieren mit Cu2+, werden oxidiert, Cu2+ zu Cu+ reduziert
Wasser: Zucker in (reaktive) offenkettige Form vorliegt
Wie kann Glc enzym. bestimmt werden? Nenne alle Schritte
1) D-Glucose+ATP > Hexokinase> D-G-6-P+ADP
Hexokinase kat.(pH7,6) Phosphorylierung von D-Glucose mit Adenosintriphosphat-->D-Glucose-6-phosphat unter Bildung von ADP
2)D-G-6-P + NADP+ > G6P-DH > D-Gluconat-6-phosphat+NADPH+H+
G-6-P von Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat durch Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase spezifisch zu D-Gluconat-6-phosphat oxidiert, reduziertes NADPH entsteht
gebildete NADPH-Menge ist D-Glucose- Menge äquivalent, wird aufgrund Absorption 340nm (Absorptionsmaximum) mit Photometer.
Unterschiedliche Absorptionsspektren von NADP+ und NADPH
Zur GC-Untersuchung Derivatisierung notwendig. Zeichne Oximierung von Dihydroxyaceton
Oximierung
Zur GC-Untersuchung Derivatisierung notwendig. Zeichne Silylierung von Dihydroxyaceton
Silylierung
Zur GC-Untersuchung Derivatisierung notwendig. Zeichne die Strukturformeln der Derivatisiierungsreagenzen der Oximierung und Silylierung von Dihydroxyaceton
Zur GC-Untersuchung Derivatisierung notwendig. Warum wird Pyridin bei Silylierung eingesetzt
Pyridin als wasserfreies Lsg. verwendet, BSTFA würde mit Wasser reagieren, Pyridin wird bei Silylierung von org. Säuren häufig als Lsg. verwendet, weil es einerseits gegen die, zur Veresterung der Carbonylgr. notwendigen TMS-Radikale inert ist und ausserdem die Säure quantitativ löst
Amadorireaktionsprodukt von einem Zucker und einer AS zeichnen
Amadori
nenne benötigten Reagenzien zur Stickstoffbestimmung nach Kjeldahl
Konz. Schwefelsäure (H2SO4)
Reaktions(kat.)Tablette
Natronlauge NaOH
Borsäurelösung
0,05M Schwefelsäure
Mischindikator 5 (Zinkspäne :Methylrot/Bromkresolgrün)
Erstelle ein Fließschema der Stickstoffbestimmung nach Kjeldahl
Fließschema
Vorteile der Kjeldahl-Nachweisreaktion von Stickstoff
Vorteile:
-anwendbar auf alle Arten von Lebensmitteln
- nicht teuer (wenn kein automatisiertes System verwendet wird)
- genau: eine offizoelle Methode zur Bestimmung des Rohproteingehalts
Nachteile des Kjeldahl-Nachweis von Stickstoff
Nachteile:
- zeitaufwendig
- schwierig, den unterschiedlichen N verschiedener Proteine zu unterschieden
- NaOH greift Glasgefäße an
- Zusammensetzung des Eiweißes zB verschiedener Getreide nicht immer die gleiche ist, vielmehr besitzen verschiedene Pflanzen unterschiedlichen prozentualen N-Gehalt im Eiweiß
- wenn man durch Kjedahl N in Proteinen messen will, müssen Nichtprotein-N zuvor entfernt werden
- zeitaufwendig mind 2h
- giftige Reagenzein/starke Säuren/starke Laugen/fehleranfällig/arbeitsaufwendig
- korrosive Reagenzien
- N-haltige Substanzen zB Nukleinsäuren,Harnstoff,Amine,Alkaloide stören
- Serumproteine müssen durch Fällung isoliert werden, um von Harnstoff,Harnsäure und andere proteinfreien N-Träger abzutrennen
Wie heißt das Edman-Reagenz und wie sieht es aus?
Phenylisothiocyanat
Wie heißt und sieht das Endprodukt des Edman-Abbaus aus, schreibe anstelle einer AS ein R!
Phenylthiohydantoin-Derivat
Wie heißt und sieht das erste Zwischenprodukt des Edman-Abbaus aus!
Phenylthiocarbamoyl-Peptid PTC-Peptid
Wie heißt und sieht das zweite Zwischenprodukt des Edman-Abbaus aus!
Anilinthiazolinon-Derivat
Welches zusätzliches Reagenz wird bei der Peptid Ladder Sequencing Methode verwendet? Zeiche !
zusätzliches Reagenz: 5% PIC Phenylisocyanat
Welche AS-Paare lassen sich schlecht mit der Peptid Ladde Sequenzierung schlecht unterscheiden?
- aufgrund gleicher Massen kann nicht zw. Leucin und Isoleucin unterschieden werden
- geringe Massendiff. zw. Asparagin & Asparaginsäure sowie Glutamin & Glutaminsäure von 1 Da erfordert ausreichende Massenrichtigkeit
- moderne kommerzielle MALDI-TOF-MS erreichen diese Massenrichtigkeit für Bereich von etwa 5000Da
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