Immunhistologie
Probenentnahme; Immunglobuline; direkt, indirekt, PAP, APAAP - Methode;
Probenentnahme; Immunglobuline; direkt, indirekt, PAP, APAAP - Methode;
Beschreibe den routinemäßigen Ablauf einer Einbettung in der Histologie und in der Immunhistologie.
In welchen Schritten stimmen Sie überein, wo unterscheidet sich der Ablauf der immunhistologischen Eindeckung von der histologischen Prozedur?
1. Probenentnahme
2. Fixation (Formalin 10%ig)
3. Spülung mit fließendem Wasser
4. Einbetten
a.) Dehydration
b.) Intermedium
c.) Einbettmittel
d.) Ausguss und Erstarren
5.) Schneiden
6.) Färben und Entparrafinieren
7.) Eindecktmittel
- In der Immunhistologie ist die Eindeckung bis Punkt 5 identisch.
- Ausgenommen die Fixation! In der Immunhistologie fixiert man mit 4%igem Formalin.
- Eiweiße spielen wichtige Rolle -> Denaturierung muss verhindert werden, damit AK an das Eiweiß binden können
- Je höher %ig das Formalin ist, desto mehr werden die Eiweiße vernetzt -> 4%ig stabile Vernetzung
- In der Immunhistologie will man mit Farbreaktionen zelluläre Antigene/ Immunreaktionen darstellen
a.) Welche Zellen produzieren Immunglobuline?
b.) Wie heißen die Vorläuferzellen?
a.) Plasmazellen
b.) B-Lymphozyt
Nenne 5 Immunglobulin-Typen.
IgG, IgM, IgA, IgE, IgD
Nenne den strukturellen Unterschied von IgA und IgG.
IgA= Dimer
IgG= Monomer
Wofür steht Fc ?
Fragment-crystalized
Wofür steht FAB ?
Antigen-bindendes-Fragment (antigen-binding-fragment)
Was ist der Unterschied zwischen polygonalen und monoklonalen Antikörpern?
Monoklonale Antikörper (mAK, mAb) -> werden nur von Klonen einer einzelnen B-Zelle hergestellt
-> werden in der Immunhisto verwendet, da sehr spezifisch
-> gegen ein Epitop eines Antigens gerichtet
Poliklonale Antikörper sind Nachkommen vieler verschiedener B-Zellen. Sie haben die Fähigkeit unterschiedliche Oberflächenstrukturen auf einem Antigen anzubinden.
-> Gegen mehrere verschiedene Epitope eines Antigens gerichtet
Herstellung monoklonaler AK?
Hybridom - Technik
1. Maus wird mit Antigen infiziert -> aufgrund der Immunantwort Bildung von B-Lymphozyten, die Antikörper bilden, welche mit dem Antigen reagieren und sich in der Milz anreichern
2. Milz wird entnommen -> Isolierung der B-Lymphozyten; Fusionierung mit aus einem Myelom gewonnenen Zelllinie = Hybridomzelllinien
3. Hybidromzellen vereinen die Eigenschaften ihrer Urspungszellen
- Produktion bestimmter Antikörper (B-Lymphozyt)
- Fähigkeit zu unbegrenztem Wachstum (Myelomzelle)
4.) Gewinnung des monoklonalen Antikörpers, durch Auswahl der Hybridomzelle (welche bindet das gewünschte Epitop am besten auf dem Antigen)
5.) Aufbewahrung Zellüberstand (kann bei Bedarf geerntet werden)
6.) Produktion von monoklonalen Antikörpern kann in vitro / in vivo erfolgen
Herstellung polykonaler Antikörper?
1.) Tier wird mit Antigen gespritzt, z.B. virales Protein oder dessen Gen in einem Expressionsvektor
2.) Tier bildet während der Immunreaktion spezifische Antikörper gegen das fremde Protein
3.) Enstehung eines natürlichen Gemisches mehrerer verschiedener Antikörper mit unterschiedlicher Affinität an jeweils eines der Epitope dieses Antigens zu binden
Was bedeutet
a.) Sensivität
b.) Spezifität
bei Antikörpern?
a.) = Empfindlichkeit; Fähigkeit eines diagnostischen Tests, positive Ergebnisse als solche zu erkennen
b.) Erkennung einer Antigenart; Wahrscheinlichkeit für ein negatives Testresultat bei einem Tier mit negativer Ausprägung des zu diagnostizierenden Merkmals
Antikörper Eigenschaften?
- spezifisch
- sensitiv
- stabil
- kreuzreaktiv
Nenne zwei Methoden zur Antigendemaskierung.
- Ezymatische Vorbehandlung (Pronase, Pepsin)
- Autoklav ("feuchte Hitze" = Dampfdruckkochtopf
Wie kann man die stabile Lagerung von Antikörpern für die Immunhistochemie verbessern?
Mit Serumproteinen
Zu welchem Zweck kann man in der Immunhistochemie einen Dampfdruckkochtopf einsetzten?
Antigenmaskierung
Womit kann man histologische Schnitte enyzmatisch vorbehandeln, um das Antigen zu maskieren?
Pepsin und Pronase
Warum sollte man bei der Immunhistochemie den Schnitt Gegenfärben?
Zur Übersicht/ Orientierung im Gewebeschnitt und zur Erkennung der Zellstrukturen
Welche Haupteigenschaften haben Antigene?
- Bakterien, Viren, Pilze und Parasiten
- Teile von diesen (Zellwand)
- Stoffwechselendprodukte (Zellwand)
- Eiweiße, Nukleinsäuren, Zucker
- konnen spez. Immunantwort induzieren
Über welche mikroskopische Technik wird FITC visualisiert?
Fluoreszensmikroskop
Was ist ein Konjugat?
Antikörper mit Detektionssystem
Was ist Peroxidase?
gehört zu den Oxireduktasen und sind zum Beispiel auf Ery's lokalisiert
Alkalische Phophatase?
Hydrolase; z.B. in Mikrovillisaumen von Enterozyten (Darmzellen)
Worin besteht der wesentliche Unterschied zwischen direkter und indirekter Methode in der Immunhistochemie?
direkte Methode: spezifischer Antikörper wird direkt mit Detektionssystem gekoppelt
indirekte Methode: Detektionssystem wird an Sekundärantikörper gekoppelt
Nennen Sie den wesentlichen Vorteil der indirekten Technik.
Herstellung von Antikörpern die gegen verschiedene Antigene gerichtet sind; mehr Markierung
-
- 1 / 23
-
Cartes-fiches
Beschreibe den routinemäßigen Ablauf einer Einbettung in der Histologie und in der Immunhistologie.
In welchen Schritten stimmen Sie überein, wo unterscheidet sich der Ablauf der immunhistologischen Eindeckung von der histologischen Prozedur?
1. Probenentnahme
2. Fixation (Formalin 10%ig)
3. Spülung mit fließendem Wasser
4. Einbetten
a.) Dehydration
b.) Intermedium
c.) Einbettmittel
d.) Ausguss und Erstarren
5.) Schneiden
6.) Färben und Entparrafinieren
7.) Eindecktmittel
- In der Immunhistologie ist die Eindeckung bis Punkt 5 identisch.
- Ausgenommen die Fixation! In der Immunhistologie fixiert man mit 4%igem Formalin.
- Eiweiße spielen wichtige Rolle -> Denaturierung muss verhindert werden, damit AK an das Eiweiß binden können
- Je höher %ig das Formalin ist, desto mehr werden die Eiweiße vernetzt -> 4%ig stabile Vernetzung
- In der Immunhistologie will man mit Farbreaktionen zelluläre Antigene/ Immunreaktionen darstellen
a.) Welche Zellen produzieren Immunglobuline?
b.) Wie heißen die Vorläuferzellen?
a.) Plasmazellen
b.) B-Lymphozyt
Nenne 5 Immunglobulin-Typen.
IgG, IgM, IgA, IgE, IgD
Nenne den strukturellen Unterschied von IgA und IgG.
IgA= Dimer
IgG= Monomer
Wofür steht Fc ?
Fragment-crystalized
Wofür steht FAB ?
Antigen-bindendes-Fragment (antigen-binding-fragment)
Was ist der Unterschied zwischen polygonalen und monoklonalen Antikörpern?
Monoklonale Antikörper (mAK, mAb) -> werden nur von Klonen einer einzelnen B-Zelle hergestellt
-> werden in der Immunhisto verwendet, da sehr spezifisch
-> gegen ein Epitop eines Antigens gerichtet
Poliklonale Antikörper sind Nachkommen vieler verschiedener B-Zellen. Sie haben die Fähigkeit unterschiedliche Oberflächenstrukturen auf einem Antigen anzubinden.
-> Gegen mehrere verschiedene Epitope eines Antigens gerichtet
Herstellung monoklonaler AK?
Hybridom - Technik
1. Maus wird mit Antigen infiziert -> aufgrund der Immunantwort Bildung von B-Lymphozyten, die Antikörper bilden, welche mit dem Antigen reagieren und sich in der Milz anreichern
2. Milz wird entnommen -> Isolierung der B-Lymphozyten; Fusionierung mit aus einem Myelom gewonnenen Zelllinie = Hybridomzelllinien
3. Hybidromzellen vereinen die Eigenschaften ihrer Urspungszellen
- Produktion bestimmter Antikörper (B-Lymphozyt)
- Fähigkeit zu unbegrenztem Wachstum (Myelomzelle)
4.) Gewinnung des monoklonalen Antikörpers, durch Auswahl der Hybridomzelle (welche bindet das gewünschte Epitop am besten auf dem Antigen)
5.) Aufbewahrung Zellüberstand (kann bei Bedarf geerntet werden)
6.) Produktion von monoklonalen Antikörpern kann in vitro / in vivo erfolgen
Herstellung polykonaler Antikörper?
1.) Tier wird mit Antigen gespritzt, z.B. virales Protein oder dessen Gen in einem Expressionsvektor
2.) Tier bildet während der Immunreaktion spezifische Antikörper gegen das fremde Protein
3.) Enstehung eines natürlichen Gemisches mehrerer verschiedener Antikörper mit unterschiedlicher Affinität an jeweils eines der Epitope dieses Antigens zu binden
Was bedeutet
a.) Sensivität
b.) Spezifität
bei Antikörpern?
a.) = Empfindlichkeit; Fähigkeit eines diagnostischen Tests, positive Ergebnisse als solche zu erkennen
b.) Erkennung einer Antigenart; Wahrscheinlichkeit für ein negatives Testresultat bei einem Tier mit negativer Ausprägung des zu diagnostizierenden Merkmals
Antikörper Eigenschaften?
- spezifisch
- sensitiv
- stabil
- kreuzreaktiv
Nenne zwei Methoden zur Antigendemaskierung.
- Ezymatische Vorbehandlung (Pronase, Pepsin)
- Autoklav ("feuchte Hitze" = Dampfdruckkochtopf
Wie kann man die stabile Lagerung von Antikörpern für die Immunhistochemie verbessern?
Mit Serumproteinen
Zu welchem Zweck kann man in der Immunhistochemie einen Dampfdruckkochtopf einsetzten?
Antigenmaskierung
Womit kann man histologische Schnitte enyzmatisch vorbehandeln, um das Antigen zu maskieren?
Pepsin und Pronase
Warum sollte man bei der Immunhistochemie den Schnitt Gegenfärben?
Zur Übersicht/ Orientierung im Gewebeschnitt und zur Erkennung der Zellstrukturen
Welche Haupteigenschaften haben Antigene?
- Bakterien, Viren, Pilze und Parasiten
- Teile von diesen (Zellwand)
- Stoffwechselendprodukte (Zellwand)
- Eiweiße, Nukleinsäuren, Zucker
- konnen spez. Immunantwort induzieren
Über welche mikroskopische Technik wird FITC visualisiert?
Fluoreszensmikroskop
Was ist ein Konjugat?
Antikörper mit Detektionssystem
Was ist Peroxidase?
gehört zu den Oxireduktasen und sind zum Beispiel auf Ery's lokalisiert
Alkalische Phophatase?
Hydrolase; z.B. in Mikrovillisaumen von Enterozyten (Darmzellen)
Worin besteht der wesentliche Unterschied zwischen direkter und indirekter Methode in der Immunhistochemie?
direkte Methode: spezifischer Antikörper wird direkt mit Detektionssystem gekoppelt
indirekte Methode: Detektionssystem wird an Sekundärantikörper gekoppelt
Nennen Sie den wesentlichen Vorteil der indirekten Technik.
Herstellung von Antikörpern die gegen verschiedene Antigene gerichtet sind; mehr Markierung
