BTA
Fichier Détails
| Cartes-fiches | 23 |
|---|---|
| Langue | Deutsch |
| Catégorie | Chimie |
| Niveau | Apprentissage |
| Crée / Actualisé | 03.01.2015 / 09.04.2017 |
| Lien de web |
https://card2brain.ch/box/chemie_der_nukleinsaeuren_sowie_alles_rundherum
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| Intégrer |
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Nennen Sie 5 verscheidene RNA-Sorten und deren Funktion und den %-Anteil der gesamten RNA
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mRNA - Transport der Informationen vom Zellkern zu den Ribosomen für die Proteinbiosynthese - 1,5 %-Anteil der gesamten RNA
tRNA - bringt Aminosäuren zu den Ribosomen, wird mit Aminosäuren beladen - 15 %-Anteil der gesamten RNA
rRNA - Bestandteil der Ribosomen - 80%-Anteil der gesamten RNA
snRNA - Bestandteil des Spleißosoms, Regulation RNA-Polymerase II & einiger Transk.faktoren - ca. 1%-Anteil der gesamten RNA
siRNA - Verteidigung gegen fremde RNA, zsm mit speziellen Proteinkomponenten => RNA-induced silencing complex (RISC) - ca. 1%-Anteil der gesamten RNA
Die Lebensdauer der mRNA ist auf kurze Zeit reduziert (einige Minuten - einige Stunden).
Erläutern Sie, weshalb diese Begrenzung der Lebensdauer erforderlich ist.
Die mRNA muss wieder abgebaut werden, da sie ansonsten dauernd die weitere Proteinsynthese erregen würde.
Je nach dem welches Protein benötigt wird, wird ein Teil der DNA transkribiert, die mRNA's die zuvor transkribiert wurden müssen isdahin wieder abgebaut sein, damit die neu produzierten an den Ribosomen binden können.
Begründen Sie, warum die eucaryotische mRNA eine längere Lebensdauer in der Zelle hat als procaryotische mRNA.
Die eucaryotische mRNA wird nach der Transkription erst noch aus der dort entstandenen Prä-mRNA prozessiert.
-> Capping am 5'-Ende als Schutz vor Nucleasen
-> Poly-A-tail am 3'-Ende - '' -
-> Splicing => Introns werden rausgeschnitten
auch: alternatives Slpcing (1 Gen für mehrere Proteine)
SCHUTZMECHANISMEN VERLÄNGERN LEBENSDAUER
Beschreiben Sie genau das praktische Vorgehen bei der photometerischen Bestimmung der RNA-Konzentration ausgehend von der unverdünnten RNA-Lösung.
1. Photometer hochfahren und die Wellenlängen 260nm und 280nm einstellen
2. 10mikroL von dem 100mikroL - RNA-Lysat (0,5% SDS) entnehmen, in 1,5mL Eppi geben
3. + 90mikroL DEPC-H2O
4. Der Leerwert (d.h. DEPC-H2O pur in Küvette No.1) wird im Photometer gemessen
5. Die Probe (d.h. RNA-Verdünnung) wird von dem Eppi in die Küvette No.2 überführt und im Photometer gemessen
Sie haben RNA aus 1,5x106 Mausfibroblastenzellen (NIH-3T3) isoliert und in 100mikroL 0,5% SDS gelöst. Am Photometer haben Sie bei einer Verdünnung von 1:10 mit Hilfe einer Mikroküvette (1cm Strahlengang) eine E260nm von 0,555 und eine E280nm von 0,395 gemessen.
Berechnen Sie die Konzentration der unverdünnten RNA-Lösung in mikro.g/mikroL
,\( {0,555 * 40 {mikro.g} * 10 \over 1000 {mikroL}} = 0,222 mikro.g/mikroL\)
B) Sie haben RNA aus 1,5x106 Mausfibroblastenzellen (NIH-3T3) isoliert und in 100mikroL 0,5% SDS gelöst. Am Photometer haben Sie bei einer Verdünnung von 1:10 mit Hilfe einer Mikroküvette (1cm Strahlengang) eine E260nm von 0,555 und eine E280nm von 0,395 gemessen.
Berechnen Sie die Gesamtmenge an isolierter RNA sowie die Menge an RNA pro 1 Mio. NIH-3T3. Bewerten Sie das Ergebnis!
\(V= {0,222 {mikro.g/mikroL} * 100 {mikroL}} = 22,2 {mikro.g}\)
\(1,5 * 10^6 = 22,2 {mikro.g}\)
\(1 * 10^6 = (x){mikro.g}\)
\(x = {22,2 {mikro.g} * 1*10^6\over 1,5 * 10^6} = 14,8 {mikro.g/ 1*10^6 Zellen }\)
=> Das Ergebnis ist gut (erwarteter Wert: 5- 15 mikro.g/1*106 Zellen). Es ist also ausreichend RNA für die entsprechende Zellzahl.
A) Sie haben RNA aus 1,5x106 Mausfibroblastenzellen (NIH-3T3) isoliert und in 100mikroL 0,5% SDS gelöst. Am Photometer haben Sie bei einer Verdünnung von 1:10 mit Hilfe einer Mikroküvette (1cm Strahlengang) eine E260nm von 0,555 und eine E280nm von 0,395 gemessen.
Berechenen Sie den Reinheitsgrad der RNA.
\( {E260nm \over E280nm} = {0,555 \over 0,395} =1,405\)
Das RNA-Lysat ist nicht sehr rein. Das ist daran zu erkennen, dass die Extinktion bei ca. 1,4 liegt. sie sollte jedoch bei ca. 1,8 liegen.
Bei E280nm werden die Proteine maximal angeregt, bei E260nm die RNA. Wenn der E280nm-Wert zu groß ist, ist dieses darauf zurückzuführen, dass die RNA ist Protein-verunreinigt ist.
Analysieren Sie die DNA-Sequenzen und ermitteln Sie die Promotorregion (bitte unterstreichen!) und die Basensequenzen der mRNA.
Siehe Bild!
Bestimmen Sie die Aminosäurensequenz des translatierten Proteins mit Hilfe der Codesonne.
Siehe Bild
Für einen Restriktionsansatz möchten Sie in einem Gesamtvol. von 20mikroL unsgesamt 5 mikro.g genomische DNA mit einem Restriktionsenzym in einer Stunde spalten. Das Enzym hat eine Konzentration von 3u/mikroL. Die DNA-Konzentration kann aus den vorliegenden photometrischen Messwerten errechnet werden:
E260nm=0,925 nei 1:10 Verdünnung
Siehe Bild!
"Beschrifte"!
Siehe Bild
(abgeschnittener Text: Verfielfältigung der DNA)
Erläutern Sie warum bei der Agarosegel-Elektrophorese mit 1xTEA-Puffer zur Anode wandert
Der TAE-Puffer ist alkalisch (pH=8,5) deswegen dissoziiert die Phosphorsäure aus der RNA zu Phosphat und ist somit negativ geladen weil sie ihre H+-Ionen abgegeben hat. Aufgrund der negativen Ladung wandert die RNA zum Pluspol (Anode). Außerdem sind im TAE-Puffer Ionen enthalten, sodass ein elektrischer Strom fließen kann, da eine Spannung von 100Volt anliegt.
Erläutern sie wie sich die RNA-Fragmente im Agarosegel aufteilen und wodurch dies entsteht.
Das Agarosegel besteht aus Galactosemolekülen, die eine netzartige Struktur bilden. Je nachdem wie stark prozentig das Gel ist, sind die Maschen größer oder kleiner. (Hochprozentig = Maschen kleiner)
Größere Moleküle haben in der Gelelektrophorese eine stärkere Reibung, sodass sie langsam durchs Gel laufen oder stecken bleiben. Kleinere Moleküle passen besser durch die Maschen und laufen deswegen schneller durchs Gel.
In der Nucleinsäure GCTA hat welcher Nukleosidanteil eine freie 3'OH-Gruppe?
Guanosid ist ...
Restriktionsendonucleasen erkennen ein ...
Durch die Zugabe von Pheol-Chloroform zu einer DNA-Lösung...
Der codogene Strang ...
Die DNA-Polymerase benötigt für die DNA-Synthese kein ..
Die mRNA spielt wie siRNA eine Rolle bei der Regulation...
Nennen Sie 3 Unterschiede zwischen eucaryotischer und procaryotischer mRNA und erläutern Sie jeweils ein Beispiel für den evolutionären Vorteil für die Eucaryoten
Siehe Bild
Beschreiben Sie stichwortartig ein Verfahren zur Trennung eucaryotischen mRNA aus der isolierten Gesamt RNA deiner Probe.
Eucaryotische mRNA besitzt einen Poly-A-Schwanz.
Man könnte durch Hybridisierung mit einer Poly-T-Kette an einer leicht zu isolierenden Substanz spezifisch die eucaryotische mRNA binden und anschließend von der restlichen RNA trennen (durch herausdiltern der Substanz, an der die eucaryotische mRNA gebunden hat).
Erläutern Sie 3 Methoden, um die RNA während der Isolation aus Zellen vor RNasen zu schützen.
- Lagerung der Proben auf Eis: Durch Kühlung wird die Enzymaktivität herabgesetzt /unterbunden, so dass die RNasen keine RNA verdauen können.
- Verwendung von DEPC-H2O: denaturiert Proteine und inaktiviert RNasen, solange die Lösung enthalten ist.
- Tragen von Handschuhen: Auf der Haut sind viele DNasen & RNasen, die ind die Proben gelangen könnten
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