Chemie der Nukleinsäuren (sowie alles rundherum)
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Fichier Détails
| Cartes-fiches | 23 |
|---|---|
| Langue | Deutsch |
| Catégorie | Chimie |
| Niveau | Apprentissage |
| Crée / Actualisé | 03.01.2015 / 09.04.2017 |
| Attribution de licence | Non précisé |
| Lien de web |
https://card2brain.ch/box/chemie_der_nukleinsaeuren_sowie_alles_rundherum
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| Intégrer |
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Nennen Sie 5 verscheidene RNA-Sorten und deren Funktion und den %-Anteil der gesamten RNA
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.
mRNA - Transport der Informationen vom Zellkern zu den Ribosomen für die Proteinbiosynthese - 1,5 %-Anteil der gesamten RNA
tRNA - bringt Aminosäuren zu den Ribosomen, wird mit Aminosäuren beladen - 15 %-Anteil der gesamten RNA
rRNA - Bestandteil der Ribosomen - 80%-Anteil der gesamten RNA
snRNA - Bestandteil des Spleißosoms, Regulation RNA-Polymerase II & einiger Transk.faktoren - ca. 1%-Anteil der gesamten RNA
siRNA - Verteidigung gegen fremde RNA, zsm mit speziellen Proteinkomponenten => RNA-induced silencing complex (RISC) - ca. 1%-Anteil der gesamten RNA
Die Lebensdauer der mRNA ist auf kurze Zeit reduziert (einige Minuten - einige Stunden).
Erläutern Sie, weshalb diese Begrenzung der Lebensdauer erforderlich ist.
Die mRNA muss wieder abgebaut werden, da sie ansonsten dauernd die weitere Proteinsynthese erregen würde.
Je nach dem welches Protein benötigt wird, wird ein Teil der DNA transkribiert, die mRNA's die zuvor transkribiert wurden müssen isdahin wieder abgebaut sein, damit die neu produzierten an den Ribosomen binden können.
Begründen Sie, warum die eucaryotische mRNA eine längere Lebensdauer in der Zelle hat als procaryotische mRNA.
Die eucaryotische mRNA wird nach der Transkription erst noch aus der dort entstandenen Prä-mRNA prozessiert.
-> Capping am 5'-Ende als Schutz vor Nucleasen
-> Poly-A-tail am 3'-Ende - '' -
-> Splicing => Introns werden rausgeschnitten
auch: alternatives Slpcing (1 Gen für mehrere Proteine)
SCHUTZMECHANISMEN VERLÄNGERN LEBENSDAUER
Beschreiben Sie genau das praktische Vorgehen bei der photometerischen Bestimmung der RNA-Konzentration ausgehend von der unverdünnten RNA-Lösung.
1. Photometer hochfahren und die Wellenlängen 260nm und 280nm einstellen
2. 10mikroL von dem 100mikroL - RNA-Lysat (0,5% SDS) entnehmen, in 1,5mL Eppi geben
3. + 90mikroL DEPC-H2O
4. Der Leerwert (d.h. DEPC-H2O pur in Küvette No.1) wird im Photometer gemessen
5. Die Probe (d.h. RNA-Verdünnung) wird von dem Eppi in die Küvette No.2 überführt und im Photometer gemessen
Sie haben RNA aus 1,5x106 Mausfibroblastenzellen (NIH-3T3) isoliert und in 100mikroL 0,5% SDS gelöst. Am Photometer haben Sie bei einer Verdünnung von 1:10 mit Hilfe einer Mikroküvette (1cm Strahlengang) eine E260nm von 0,555 und eine E280nm von 0,395 gemessen.
Berechnen Sie die Konzentration der unverdünnten RNA-Lösung in mikro.g/mikroL
,\( {0,555 * 40 {mikro.g} * 10 \over 1000 {mikroL}} = 0,222 mikro.g/mikroL\)
B) Sie haben RNA aus 1,5x106 Mausfibroblastenzellen (NIH-3T3) isoliert und in 100mikroL 0,5% SDS gelöst. Am Photometer haben Sie bei einer Verdünnung von 1:10 mit Hilfe einer Mikroküvette (1cm Strahlengang) eine E260nm von 0,555 und eine E280nm von 0,395 gemessen.
Berechnen Sie die Gesamtmenge an isolierter RNA sowie die Menge an RNA pro 1 Mio. NIH-3T3. Bewerten Sie das Ergebnis!
\(V= {0,222 {mikro.g/mikroL} * 100 {mikroL}} = 22,2 {mikro.g}\)
\(1,5 * 10^6 = 22,2 {mikro.g}\)
\(1 * 10^6 = (x){mikro.g}\)
\(x = {22,2 {mikro.g} * 1*10^6\over 1,5 * 10^6} = 14,8 {mikro.g/ 1*10^6 Zellen }\)
=> Das Ergebnis ist gut (erwarteter Wert: 5- 15 mikro.g/1*106 Zellen). Es ist also ausreichend RNA für die entsprechende Zellzahl.
A) Sie haben RNA aus 1,5x106 Mausfibroblastenzellen (NIH-3T3) isoliert und in 100mikroL 0,5% SDS gelöst. Am Photometer haben Sie bei einer Verdünnung von 1:10 mit Hilfe einer Mikroküvette (1cm Strahlengang) eine E260nm von 0,555 und eine E280nm von 0,395 gemessen.
Berechenen Sie den Reinheitsgrad der RNA.
\( {E260nm \over E280nm} = {0,555 \over 0,395} =1,405\)
Das RNA-Lysat ist nicht sehr rein. Das ist daran zu erkennen, dass die Extinktion bei ca. 1,4 liegt. sie sollte jedoch bei ca. 1,8 liegen.
Bei E280nm werden die Proteine maximal angeregt, bei E260nm die RNA. Wenn der E280nm-Wert zu groß ist, ist dieses darauf zurückzuführen, dass die RNA ist Protein-verunreinigt ist.
Analysieren Sie die DNA-Sequenzen und ermitteln Sie die Promotorregion (bitte unterstreichen!) und die Basensequenzen der mRNA.
Siehe Bild!
