BMA Immunphänotypisierung - akute Leukämien
akute Leukämien Phase 4
akute Leukämien Phase 4
-
- 1 / 71
-
Cartes-fiches
Welche Antigene können mittels monoklonaler Antikörper nachgewiesen werden?
Oberflächenproteine: Transmembranär + GPI-verankert (s für surface)
Intrazelluläre Proteine: intrazellulär cytoplasmatisch (cyCD79a) + intrazellulär nucleär (TdT)
Bei welchen Zellen kommt cyCD3 vor?
bei jungen T-Zellen CD3 nur intrazellulär und noch nicht auf der Oberfläche
Bei welchen Zellen kommt cyCD79a vor?
bei jungen B-Zellen CD79a nur intrazellulär und noch nicht auf der Oberfläche; ist Teil des B-Zell-Rezeptors
Arbeitsschritte bei der Probenvorbereitung (Immunphänotypisierung):
- Herstellung einer Einzelzellsuspension
- Probe waschen, um freie Antikörper im Serium zu eliminieren
- Alternativ: vorgängige EC-Lyse des Materials (Zellkonzentration) z.B. für MRD
Strategie EuroFlow
- Standartisiertes Vorgehen
- Panel geht nach der Klinik ( = je nach Symptome + Klinik anderer Panel)
Nenne die wichtigsten Antigene, die im "leukemia orentation tube" enthalten sind.
- HLADR
- CD45 (auf Hämopoetischen Zellen)
- cyCD3 (junge T-Zellen)
- cyMPO (Myeloische Reihe)
- cyCD79a (junge B-Zellen)
- CD34 (Stammzellantigen)
- CD19 (B-Zellreihe)
- CD7 (T-Zellreihe)
- CD3 (T-Zellreihe)
Antigenprofil Basophile
Antigenprofil Neutrophile
Antigenprofil Eosinophile
Antigenprofil Monocyten
Antigenprofil T-Zelle
Antigenprofil B-Zelle
Antigenprofil NK-Zelle
Antigenprofil Plasmazelle
Antigenprofil Erythrocyten
Was zeigt das Vorwärtsstreulicht an?
Zellgrösse
Was zeigt das Seitwärtsstreulicht an?
Granularität
Was ist mit "Gaten" gemeint?
eine Population elektronisch auswählen um sie in anderen Dotplots zu untersuchen;
Zellen die nicht analysiert werden, werden ausgeschlossen -> nur die Zellen, die uns interessieren werden angezeigt
Wovon ist die Expressionsstärke eines Antigens abhänig?
vom Zelltyp und vom Reifungsstadium
Gibt es Einflüsse auf CD-Antigen-Expression?
- keine biologischen, ausser wenn pathologisch
- gesamte Präanalytik (z.B. hitzeempfindliche Antigene)
- Auswahl monoklonale Antikörper
- bereits gebundene Antikörper am Epitop
- Geräteunterschiede
Welche Antigene werden während der Ausreifung in die erythroide Zelllinie als Erstes exprimiert?
CD36 und CD105; CD36 wird auch von anderen Zellen exprimiert -> nur in Kombi mit 105
Sind Antigene spzeifisch für eine Zell-Linie?
Nein!
Kriterien für abnorme Zellen:
- erhöhte/erniedrigte Expression von Antigene
- asynchrone Expression während der Ausreifung (z.B. reife Zelle mit jungen Antigenen)
- aberrante Expression eines Antigens (z.B. myeloische Zelle exprimiert stark CD7 -> gehöhrt zur lymphatischen Reihe)
WHO-Klassifikation: auf welchen diagnostischen Kriterien basiert diese Klassifikation?
- Klinik
- Morphologie
- Patho-Histologie
- Immunphänotyp
- Genetik
Wozu dient die WHO-Klassifikation?
zur Klassifikation in klinisch bedeutsame Krankheiten + wichtig für Therapie
Erster Schritt bei der Immunphänotypisierung bei Verdacht AL - was will man herausfinden? wie weiter?
Frage nach der Zell-Linie; T-, B- oder myeloische Zell-Linie
danach Identifikation des Ausreifungsstadium innerhalb der Zell-Linie
+ Charakterisierung des Abnormen Immunphänotyps (Unterschiede zum Normalen)
Wie können wir nachweisen, dass es sich um Knochenmark-Material handelt und nicht um peripheres Blut?
Zellen nachweisen, die nur im Knochenmark vorkommen wie z.B. Gewebsbasophile, B-Vorläuferzellen oder Plasmazellen
Wieso wissen wir oft nicht viel über die T-Zell-Ausreifung?
Ausreifung findet im Thymus statt und nicht im Knochenmark; erhalten wir i.d.R. kein Material
Antigenmuster Myeloblasten: (SSC, CD45, CD117, HLADR,CD34)
keine Granula=SSC, CD45+, CD34+, CD117+, HLADR +
Antigenmuster Promyelocyten: (SSC, CD45, CD117, HLADR, CD34)
Gewinn an Granula = SSC, CD45+, verlieren HLADR, CD117+, verlieren CD34+
Antigenmuster Proerytrhoblasten: (SSC, CD45, CD117, HLADR,CD34)
verliert HLADR, kein Gewinn an Granula = SSC, verlieren CD45, CD117+, verlieren CD34+
Antigenmuster B-Lymphoblasten: (SSC, CD45, CD117, HLADR)
verlieren am Anfang CD117, behalten HLDAR bis reife B-Zelle, keine Granula=SSC, verlieren CD45
Antigenmuster Promonocyten: (SSC, CD45, CD117, HLADR,CD34)
HLADR bleibt ganze Zeit, verlieren CD34+ und CD117+ gleichzeitig, keine Gewinn Granula=SSC, Gewinn CD45+
Welche Zellen verlieren HLADR während Ausreifung?
- Erythroide
- Promyelocyten
Zelle verliert HLADR und gewinnt SSC:
Was ist mit Back-Bone gemeint?
Antigene die in jedem Tube gesucht werden, um abnormale Population zu finden ("Täter-Identifikation")
CD45, HLADR, CD34, CD117
Prinzip Immunphänotypisierung
Immunphänotypisierung mittels Durchflusszytometrie (FACS)
Einzelzell-Suspensionen werden mit fluoreszierenden Reagenzien, meist Fluorochrome-gekoppelte monoklonale Antikörper, inkubiert -> am Durchflusscytometer nach Anregung durch Laserlich, die Intensität des emittierten Lichtes der einzelnen Zellen gemessen + SSC und FSC für Komplexität und Grösse der Zelle
Lichtintensität ist abhängig von der Expressionsstärke dieses Antigens; Oberflächenmerkmale auf Blutzellen werden gemessen
Worauf geben CD-Marker Hinweise?
- auf Art der Zelle (Differenzierungsmarker: myeloisch, lymphatisch)
- auf den Reifegrad der Zelle (Reifungsmarker)
- es gibt keine absolut spezifischen Leukämiezellmarker!
Was ist mit MPO gemeint?
Myeloperoxidase -> Bedeutung bei der Regulation von Entzündungsprozessen
CD4 ->
T-Helfer-Lymphocyten
