Lernkarten

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Sprache Deutsch
Stufe Berufslehre
Erstellt / Aktualisiert 24.12.2013 / 09.10.2017
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Ablauf der DNA-Isolierung (Fotsetzung)

5. Denaturierung der chromosomalen DNA durch Zugabe von NaOH zum Puffer ⇒ pH-Wert steigt auf pH 12

6. schnelle Neutralisiation der Lösung mit Kalium-Acetat ⇒ denaturierte chromosomale DNA fällt zusammen mit Proteinen, Zellresten etc. aus, Plasmid-DNA renaturiert und bleibt in Lsg.

7. Trennung der Zellreste und denaturierter Bakterien-DNA von Plasmid-DNA (in wässriger Lsg.) durch Zentrifugation

8. evtl. Reinigung der Plasmid-DNA durch Phenol-Extraktion

9. Aufkonzentrierung der Lsg. über z.B.: Alkoholfällung ⇒ reine Plasmid-DNA

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Phagen (Definition)

Viren, die Bakterien befallen, und diese im Verlauf der Infektion lysieren

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Extraktion von Phagen-DNA

1. Bakterienkultur wird mit Phagen infiziert und herangezogen ⇒ Phagen zerstören (lysieren) Bakterienzellwände und werden freigesetzt.

2. Abbau der bakteriellen DNA durch DNasen, Trennung der übrig gebliebenen Bakterienbestandteilen von den Phagenpartikel durch Zentrifugation

3. Phagen-DNA muss aus Phagenkopf (Capsid) extrahiert werden: Phenol-Extration ⇒ Denaturierung der Capsid-Proteine, Phagen-DNA wird freigesetzt

4. Fällung der Phagen-DNA aus der wässrigen Phase über z.B. Alkoholfällung