Biotechnologie 3.3

DNA-Extraktion (Plasmide und Phagen) Klonierung der DNA-Moleküle

5.0 (1)

Fichier Détails

Cartes-fiches	11
Langue	Deutsch
Catégorie	Biologie
Niveau	Apprentissage
Crée / Actualisé	24.12.2013 / 09.10.2017
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Ablauf der DNA-Isolierung (Fotsetzung)

Commandes clavier:

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5. Denaturierung der chromosomalen DNA durch Zugabe von NaOH zum Puffer ⇒ pH-Wert steigt auf pH 12

6. schnelle Neutralisiation der Lösung mit Kalium-Acetat ⇒ denaturierte chromosomale DNA fällt zusammen mit Proteinen, Zellresten etc. aus, Plasmid-DNA renaturiert und bleibt in Lsg.

7. Trennung der Zellreste und denaturierter Bakterien-DNA von Plasmid-DNA (in wässriger Lsg.) durch Zentrifugation

8. evtl. Reinigung der Plasmid-DNA durch Phenol-Extraktion

9. Aufkonzentrierung der Lsg. über z.B.: Alkoholfällung ⇒ reine Plasmid-DNA

Phagen (Definition)

Commandes clavier:

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Viren, die Bakterien befallen, und diese im Verlauf der Infektion lysieren

Extraktion von Phagen-DNA

Commandes clavier:

= tourner,

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1. Bakterienkultur wird mit Phagen infiziert und herangezogen ⇒ Phagen zerstören (lysieren) Bakterienzellwände und werden freigesetzt.

2. Abbau der bakteriellen DNA durch DNasen, Trennung der übrig gebliebenen Bakterienbestandteilen von den Phagenpartikel durch Zentrifugation

3. Phagen-DNA muss aus Phagenkopf (Capsid) extrahiert werden: Phenol-Extration ⇒ Denaturierung der Capsid-Proteine, Phagen-DNA wird freigesetzt

4. Fällung der Phagen-DNA aus der wässrigen Phase über z.B. Alkoholfällung

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