Biologie moléculaire des plantes
SDS-Page: Wie funktioniert diese Methode? Was untersucht sie? Wofür?
SDS-Page: Wie funktioniert diese Methode? Was untersucht sie? Wofür?
Kartei Details
| Karten | 27 |
|---|---|
| Sprache | Français |
| Kategorie | Biologie |
| Stufe | Universität |
| Erstellt / Aktualisiert | 30.01.2016 / 28.01.2023 |
| Lizenzierung | Keine Angabe (Kurs Felix Mauch Universität Freiburg) |
| Weblink |
https://card2brain.ch/box/biologie_moleculaire_des_plantes
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Wofür wird SDS-Page benutzt?
Was unterucht diese Methode? Wofür?
Unterschied zu Agarose?
Für das (separieren) entfalten von PROTEINEN nach MOLEKULARDICHTE. Dabei werden die Proteine entfaltet und linear verglichen; nach Grösse und Ladung. Der Unterschied zur Agarose:Sie befasst sich mit der DNA;SDS braucht Nucleotide damkit Prot im Gel bewegt.
1Was ist Immunoblot /Westernblot?
2Wann gebraucht?
3Vorgang?
4Ziel?
2Nach SDS-PAge, 3Nachdem weiss wie sie sind, BLot SDS> mit AB(antibody) bestreuen, zweites AB gekoppelt an Enzym bindet an 1.AB. Macht farb.produkt
4 Ziel ist die Detektion von Proteinen in Zelle
Immunoprecipitation
1WAS
2Ziel
3 Vorgang
4 CO- Immunoprecipitation
1. 2-3.Isoltaion von spez. Protein X aus Proteinkomplex durch Ab spez gegen Prot, AB gebunden an Kügelchen, was Prot nach unten ziehen soll via centrifugation.-> Direkt/Indirekt (d:Ab+K=Prot unten; I:Ab+K+Hilfsprotein(insolublep.ex.)=Prot unten von ganzem -> Analyse von Intersse Prot.
4: Analyse von Protein-Portein Interaktionen= Precipitaion von Prot X, welches mit Prot Y interagiert für welches der AB aufgezüchtet wurde!
Agarose Gel Elektrophorese
1Wofür
2Wie
1. Wird gebraucht zum aussortieren von DNA/RNA Stände nach grösse
2. Elekt. Feld erzeugt (elektroden) Dna Moleküle (neg geladen) wandern durch Gel. Kleine Moleküle wandern schneller als grössere Je nachdem welche Grösse von Molekülen gesucht-> Agarose Gehalt Lösung reguliert (Klein=viel Agarose). Marker dazu addiert, damit man D(R)NA sieht.(p.ex. EthidiumBromid, oder Coomassie Blue) Abgleich mit Marker zum sehen was wieviel
Southern Blot
1wofür
2Wie
1. SüD= Dna, Ziel ist, eine spez. DNA Sequenz im Genom zu suchen und untersuchen wieviel es davon hat. oder In einem Gemisch eine spez. Dna nachverfolgen können.
2. 0Verdauung durch REstriktionsenzym, Abgleich der Länge der Stücke durch Agarose Gel elek.. 1Dna wird denaturiert (NAOH) und auf Nylonmemb geblottet. 2Radioaktiv markierte Sonde (oder chem. modifizierte Nucleotid, die Immunodetection ermöglicht) wird hinzugefügt mit Ziel dass sie sich mit Dna strand hybridisiert. 3Es kannfestgestellt werden, wo sich Sequenz komplementär befindet.
Northern Blot (NoRd= RNA)
1 Wie
2Wofür
1 RNA; Analyse von RNA Transkripte
2RNA isoliert und in AGarose G.E. nach Grösse aussortiert. Blot auf Nylonmembr. Hybridiserung surch molek. markierte Sonde (radioaktiv, chem.) Komplementarität ermöglicht Bindung. BESAGT, WIE VIEL RNA SICH IN ZELLE BEFINDET!
PCR
Polymerase Chain Reaction
1 Vorgang
HITZEABHängig.Vervielfältigung der DNA
1. Denaturierung durch Hitze, Primerhybridisierung (Primer kann dank abkühlen ansetzen) Primer beginnt Elongation( druch anziehen von der DNA Polymersae)
Molekulare MArker
1Welche kennst du?
2 Wie werden sie untersucht?
1 RFLP (restriktiomsfragment Längenpolymorphismus), STR (short tandem repeats=2BP die sich vermehrt folgen ) SNP (single nucleotid polymorphism)
2. durch PCR oder Southern Blot ; durch PCR, Gelelektrophorese oder Sequenzierung ; Sequenzierung oder Oligonucleotidhybridisierung
RFPL= Vorraussetzung, Eltern unterscheiden sich nach Beschneidung durch Restrinktionsenzym ( 4 vs 5 Stücke), diese Besonderheit ermöglicht es das spez DNA stück in den Nachkommen zu verfolgen. =Das Fragmentmuster ist diagnostisch für einen Elternteil
