Zugabe von AK & Ammoniumsulfat stört die Hydrathülle

Biochemische Übungen

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Diese Lernkarten decken biochemische Übungen auf Universitätsniveau ab. Sie konzentrieren sich auf die Extraktion und Analyse von Proteinen, DNA und Lipiden, einschließlich Techniken wie alkalischer Lyse, SDS-PAGE und Dünnschichtchromatographie. Die Karteikarten behandeln auch Enzymaktivität, Pufferlösungen und die Bestimmung von Vmax und Km-Werten. Ideal für Studierende der Biochemie, die praktische Labortechniken und theoretische Konzepte vertiefen möchten.

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German

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Welchen Puffer muss man verwenden so dass 2ml Serum an den Anionenaustauscher binden?

18ml 10mM TRIS/Cl - bei pH 8,6

1ml 100mM TRIS bei pH 8,2 und 500 mM NaCl pro ml Serum

20 mM Phosphatpuffer bei pH 5,0 nach umpuffern in 20 mM TRIS bei pH 8,5

Ein Lipidgemisch wird mittels DC aufgetrennt. Welche Aussagen treffen zu?

polare Laufmittel trennen bevorzugt Triacylglyceride und Cholestern

Cholesterin wandert immer weiter als Phosphatidylcholin

Iod ist nur zum Nachweis unpolarer Lipide geeignet

Die DC eigent sich nicht zur Auftrennung von Lipiden nach Kettenlänge

SDS-PAGE? Welche Aussagen treffen zu?

Die Proteine sind kationisch geladen.

SDS ist ein anionisches Tensid

Die Proteine werden durch SDS umgefaltet

Mercaptoethanol stabilisiert Disulfidbrücken

Native Elektrophorese

kleine geladene Moleküle stören Trennung der Makromoleküle

DNA wegen Phosphatgruppen zu Kathode gedrängt

Proteine werden nach Größe getrennt

bei Proteinen wird der Puffer mit alkalischen pH gewählt

Lipide extrahieren

vor Extraktion mit CHCl3/MeOH wird SDS zugesetzt

Sphingolipide durch Reextraktion mit Puffer entfernt

Extraktion vor DC

Mischen der extrahierten Proteine im Verhältnis 20:1 entscheiden für vollständige Extraktion

DNA alkalische Lyse isoliert

Genom DNA und Plasmid DNA gemischt

Dodecylsulfat mit K-Salze gefällt

alkalische Lyse bei Prokaryonten angewandt

Probe mit Proteinase K versetzt

Wie wird DNA durch alkalische Lyse isoliert?

Genomische DNA wird von Plasmid DNA getrennt

Die alkalische Lyse wird nur bei Eukaryonten angewandt

Die Proteine werden durch enzymatischen Verdau entfernt

Dodecylsulfat wird als Na-Salz gefällt

Proteine fällen:

Zugabe von AK

Zugabe von SDS

Trichloressigsäure fällt Proteine ohne zu denaturieren

Ammoniumsulfat stört die Hydrathülle

Bei welche der folgenden Bedingungen fällen Sie Proteine, ohne sie zu denaturieren

Die Lösung (pH>9) wird mit Hg2+ Salze versetzt

Durch Zugabe von einen spezifischen Antiserum

Sie setzen der Proteinlösung organische Lösungsmittel in der Kälte zu.

Durch Aussalzen mit einer hohen Ammoniumsulfat-Konzentration

Wie führt man eine Aktivitätsbestimmung durch?

viel Substrat

wenig Substrat

hohe Enzymkonzentration

geringe Enzymkonzentration

Kompetitve Hemmung

Vmax wird kleiner

Vmax bleibt gleich

Km wird größer

Km bleibt gleich

Wie werden kM und Vmax eines Enzyms bestimmt?

Bei Vmax/2 wird nur die Hälfte des Substrates umgesetzt

Vmax kann näherungsweise bei Substratsättigung gemessen werden

Km wird aus der Zeit/Umsatzkurve abgelesen

Zur Bestimmung von Km wird die Substratkonzentration variiert.

Wie bestimmen Sie die Aktivität der Alkoholdehydrogenase (ADH)

Es darf keine Aldehyd-Dehydrogenaseaktivität vorhanden sein

Das Ende der Zeit-Umsatzkurve ist abzuwarten

Es wird eine hohe ADH Konzentration benötigt

EtOH und NAD+ müssen im Überschuss vorliegen

Wie werden Proteinkonzentrationen gemessen?

Die UV-Absorption der Proteine bei 280nm stammt von allen aromatischen Aminosäuren

Bei der Buiret Methode bilden sich kovalente CU-Protein Bindungen

Die Biuretreagenz weist die Peptidbindung nach

Der Fabrstoff Coomassie-Blau bindet an die Seitenketten einiger Aminosäuren (zB Arginin) des Proteins

Wie binden Proteine an einen Ionenaustauscher

Als Polyanionen an quaternäre Amoniumgruppen

Bei hoher Salzkonzentration im Puffer

Immer dann, wenn der pH-Wert des Puffers größer ist als der isoelektrische Punkt des Proteins

Als Kationen an eine CM Matrix

Wie können Lipide nach Folch aus biologischen Proben isoliert werden?

Nach der Extraktion mit 20x Probenvolumen CHCl3/MeOH wird mit Puffer reextrahiert.

Polare Lipide wie zB Sphingolipide werden nur unvollständig extrahiert

Das Methanol im Extraktionsmittel dient als Lösungsvermittler zwischen wässriger und organischer Phase

Vor der Extraktion wird konzentrierter NaOH zugesetzt.

Welche Definition für Einheiten der Enzymaktivität trifft zu?

1 nkat Enzymaktivität setzt 1nM Substrat in der Sekunde um.

Aus der Einheit katal kann die Wechselzahl de Enzyms berechnet werden.

1 U Restriktionsenzxm setzt 1 μg Substrat in 60 min um

1 IU ist die Enzymmenge, die 1 μmol Substrat in der Minute umsetzt.

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