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Basisbearbeitungstechniken

Pflanzenzellkulturtechnik

Pflanzenzellkulturtechnik

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D. R.
Study
D. R.
Diese Lernkarten bieten einen Überblick über grundlegende Bearbeitungstechniken im Bereich der Biologie, speziell auf Universitätsniveau. Sie konzentrieren sich auf die Kultivierung pflanzlicher Zellen, wobei Parameter wie Biomassewachstum, Zellwachstum, pH-Wert und Konduktivität im Mittelpunkt stehen. Die Karteikarten behandeln auch die Messung von Metaboliten, die Phasen des Zellwachstums und die Bestimmung des Frischgewichts und Trockengewichts. Diese Lernkarten sind besonders nützlich für Studierende und Forscher, die sich mit der Zellkultivierung und den damit verbundenen analytischen Methoden auseinandersetzen.
Flashcards
8
Students
8
Language
German
Category
Biology
Level
University
Created / Updated
17.10.2016 / 07.03.2024
  • 1  / 8

Flashcards

Welche zwei Bearbeitungstechniken werden in der ZKT angewandt?

  • Bestimmung des Biomassewachstums  
  • Metaboliten Monitoring

Wie verändert sich das Frischgewicht und Trockengewicht wenn .....

 

1) neue Zellen gebildet werden

2) Zellen Wasser und Nährstoffe aufnehmen

3) kein Zucker mehr im Medium ist

4) genereller Nährstoffmangel herscht.

1) Frischgewicht und trockengewicht nehmen zu

2) Frischgewicht nimmt zu

3)  stationäre phase bis absterbephase --> Trockengewicht sinkt, Frischgewicht steigt. 

4 ) frischgewicht sinkt. 

Was bedeutet PCV? Wie wird es bestimmt?

PCV = Packed Cell Volume

Durchführung

1. Aliquot von 10 ml wird zentrifugiert  ( z.b 5 min 3400g)

2. Verhältniss aus Volumen Feststoffanteil und Volumen der Probe wird abgelesen

Wie erfolgt die Zellzählung in der Zählkammer

  • Auszählung erfolgt in der Neubauerkammer
  • Bei Aggregatbildung Vorbehandlung mit Pectinase
  • Verwendung von Evans-Blue oder anderen Farbstoffen zur Abschätzung der Vitalität
    • Vitalität = Lebende Zellen / Gesamtzellzahl * 100 % 
    • Tote Zellen nehmen den Farbstoff auf
  • 4 - 9 Grossquadrate werden mäanderförmig ausgezählt. 
  • Werte festhalten und Mittelwert bilden
  • Auszählbar sind < 100-200 Zellen pro grossquadrat
  • Mit Evans Blue 1:2 Verdünnung

Wie verhält sich der pH während des Biomassewachstums?

Wie verhält sich die Konduktivität während des Biomassewachstums?

pH-Wert

  • pH fällt häufig auf Werte um 4 (Anfang der Kultivierung) → Ammoniumaufnahme und Ansäuerung
  • pH erreicht wieder Wert um 5 mit zunehmender Nitrataufnahme
    • Ammonium wird in der Regel vor Nitrat von Pflanzenzellen verwertet
  •  pH steigt mit Biomassewachstum (häufig Werte um 6.0 erreicht)

Konduktivität

  • Indirekte Methode
  • Nicht bei Produktsegregation
  • Umgekehrte Proportionalität zwischen elektrischer Leitfähigkeit und Zellgewicht
    • Trockengewichtszunahme → Konduktivität ↓ durch Aufnahme von Mediumsalzen in Ionenform 

Welche Phasen weist eine Typische Pflanzenzellwachstumskurve auf? (4)

  1. Lag Phase   (< 120h / kaum vermehrung)
  2. Log-Phase  (exponentielles Wachstum) 
  3. Stationäre Phase   (zellzahl stagniert)
  4. Absterbephase

Mit welchen Messmethoden (Geräten) werden die Metabolite gemessen?

Welche Metabolite werden gemessen?

  • HPLC
  • Photometrisch

 

  • Saccharose
  • Glukose und Fruktose
  •  Ammonium
  • Nitrat
  • Phosphat

Bei der in vitro Kultivierung pflanzlicher Zellen sollten folgende charakteristische Parameter neben der Produktkonzentration als Funktion der Zeit aufgenommen werden

  • Biomassezunahme und Zellwachstum (direkt)
    • Frischgewicht
    • Trockengewicht
  • Biomassezunahme und Zellwachstum (indirekt)
    • Gesamtzucker (Glukose, Fruktose, Saccharose)
    • Phosphat
    • pH und Konduktivität 
  • Morphologie

Study