Immunhämatologie

Neugeborenen haben keine Isoagglutinine, da der Immunsystem noch im Aufbau ist, Isoagglutinine durch Kontakt gebildet werden und Isoagglutinine treten ab dem 3 Lebensmonat auf kann bis 12 Monate benötigen.

Die vollständige Blutgruppenbestimmung bei Neugeborenen ist nicht möglich nur Vorläufig, da keine Serumgegenprobe möglich.

Blut: Kapilläres/venöses oder Nabelschnurblut

1. und 2. Blutgruppenbestimmung wird mit je zwei verschiedenen Testseren (in einem doppelten Ansatz mit mindestens je einem unterschiedlichen Klon) durchführt.

Fast immer wird  bei Neugeborebeb einen DAT verlangt, weil man wissen will, ob das Kind Morbus hämolyticus neonatorum (MHN) hat.

Durch einen MHN hat das Neugeborene beladene EC, Diese werden im DAT erfasst.

-AHG wird benötigt.

-EC-Suspension des Patienten werden in die Reaktionskammer pipettiert. Die EC sind in diesem Fall bereits beladen.

-Keine Inkubation kein LISS nötig, da die Bindung schon im Patienten stattgefunden hat.

-Zentrifugation: Durch die Zentrifugation, werden die EC in und durch den Gel gedrückt.

-Negative Reaktion=Es kann keine IgG-Beladung der EC nachgewiesen werden.

-Positive Reaktion= Jegliche posititve Reaktion wird als posititv beurteilt (+ - 4+). Die Agglutination weisst auf eine in vivo Beladung der EC mit IgG. Um eine differenzeiertere Aussage der Beladung machen zu können oder um eine Beladung mit IgM, IgA oder C3c nachzuweisen, muss ein Monospezifischer DAT angesetzt werden.

Ein positiver DAT sagt nur aus, dass in vivo Antikörper (oder Komplement) an die EC fixiert wurden. (Um herauszufinden, ob es sich um transfusionsrelevante Antikörper handelt oder nur durch Medikamente verursachte Komplemet Aktivierung muss eine Elution durchgeführt werden.)

-Im Röhrchen sind EC, Antikörper, Plasmaproteine

-3x Waschen mit NaCl nur EC bleiben

-AHG dazugeben

1 Fall: keine Agglutination, AHG + EC sind frei =DAT neg.

2 Fall: AHG + beladene EC binden sich und es entsteht eine Agglutination =Dat pos.

3 Fall: Waschen hat nicht gereicht es hat immernoch Antikörper (ich weiss es aber nicht) AHG binden mit Antikörper =DAT Falsch neg. (ich weiss es aber nicht)

Aus diesem Grund müssen alle negative Resultate müssen mit der Coombs-Kontrolle(Fläschchen mit EC die beladen sind) kontrolliert werden.

Daher Korrekt neg. + Kontrolle = pos. (Test und Waschen korrekt)

Falsch neg. + Kontrolle = neg. (Test und Waschen nicht korrekt)

 Nutzen/Anwendung:

-Angebrochener Beutel muss aufgebraucht werden ausser bei Unverträglichkeiten.

-Inhalt des Beutels muss vor jeder Transfusion durchmischt werden.

-Keine venöse Zugänge mit anderen Substanzen (z.B. Medis, Albumin, Ca)

Indikation:

-Aufgrund klinischer Beurteilung

-Bei plötzlichem Blutverlust, (Um Sauerstofftransport sicherzustellen)

-Bei Blutanämien

-Bei Leukämie

Lagerung und Haltbarkeit:

-1x erwärmtes EC-Konzentrat sollte nicht wieder gelagert werden.

-Haltbarkeit: 42-49 Tage

-Temperatur: 2-6 Grad

Volumen und Inhalt:

-EC

-Stabilisator & Antikoagulanzlösung

-Adaptive Lösung

-Gesamtvolumen 200-350ml

Gesplitterte EC-Konzentrate:

-In mehrere Beutel: 2-fach Beutel und 4 -fach Beutel, (z.B. kleineres Volumen nötig für Babys, angebrochener Beutel muss entsorgt werden.

Besonderheit in der Herstellung:

-Mittels Erythrozytapherese maschinell direkt am Spender gewonnen.

-Auftrennung des gespendeten Vollblutes mittels Zentrifugation

-> in EC und zellfreies Blutplasma

->übriggebliebene EC werden mittels Stabilisatorlösung aufgeschwemmt und mittels zusätzlicher Filterung werden LC entfernt. Es können nie alle LC abgefiltert werden.

 Anwendung:

-Es wird transfundiert bei Patienten mit ausgeprägten Mangel an TC. Es sorgt dass, das Blut innerhalb der Blutgefässe bleibt.

Indikationen:

-Mangel an TC

-Schlechte Blutgerinnung

Lagerung und Haltbarkeit:

-In Suspension von Plasma (32-47%) und additiver Lösung.

-Lagerung erfolgt bei 22 Grad unter ständiger Agitation.

-7 Tage haltbar

Volumen und Inhalt:

-200-400ml

-TC welche in einer Suspension gelagert sind

-Stabilisatorlösung

-Ernährungslösung

Gesplitterte TK:

-Für Kleinkinder.

Herstellung:

-Aus vier verschiedenen Vollblutspenden mit gleichem Rh-D

-Durch Thrombozytapherese bei einem Einzelspender hergestellt

-Rhesus D berücksichtigen, da es Immunogen ist

Inhalt:

-Wasser + Elektrolyte

-Proteine wie Albumin, Immunoglobuline, Komplementfaktoren, Gerinnungsfaktoren

-Hilfstoffe

Volumen:

-180-330ml Vollblut

Anwendung:

-unmittelbar vor Gebrauch im Wasserbad für 20 min bei 37 Grad auftauen, vorsichtig schwenken

-pro kg= 10-15ml

Indikation:

-Ersatz für Gerinnungsfaktoren (Leberinsuffizienz)

-Plasma-Ersatz bei starken Blutverlust

-Flussigkeitshaushalt sinkt

Lagerung & Haltbarkeit:

-bei -25 Grad für ca. 2 Jahre

-4 Monate nach Entnahme Quarantäne-Lagerung

Besonderheiten

-Kaum Zellanteil im FFP

-für Schwangere nur im Notfall geeignet

-zu hohe Menge + zu schnelle Gabe =Hypocalciämie

-nie verwenden bei kaputten Schutzbeutel

-nach Transfusion 30 min klinische Überwachung

Warum Bestrahlung?

-Durch die Bestrahlung wird die Übertragung Immunkompetenter Zellen des Spenders auf den Empfänger vermindert.

Was Passiert Bei Der Bestrahlung?

-Lebende DNA-Zellen & Leukozyten Werden Abgetötet

-Röntgenstrahlung oder Radioaktive Strahlung

-25-50 Gy Bestrahlung

-Bestrahlung Für Den Menschlichen Körper Tödlich

Wann wird es Eingesetzt?

-Zum Ersatz Fehlender Erythrozyten Bei Akuter Oder / Chronischer Anämien

-Bei Patienten mit Einer Immunschwäche:

-Immunsupprimierten

-Frühgeborenen

-Knochenmarktransplantierten

Vorteile?

-Verminderung Graft-Versus-Host-Reaktion (Zytotoxische Reaktion)

-Für Organempfangende PERSON LEBENSBEDROHLICH 

-Inaktivierung von Pathogenen in Blutspenderkonserven, verhindert Transkription DNA-Vermehrung, keine 100% Elimination möglich.

-Wird bei TK & Transfusionsplasma verwendet.

-Wird eingesetzt, damit Krankheiten von Spender zu Empfänger bei Transfusion nicht übertragen werden.

-Bei TK: Zugabe Amotosale-HCL & Bestrahlung UVA-Licht, überschüssige Amotosale wird im Anschluss entfernt.

 -Als minimale Anforderung soll die Rhesus-/K-Phänotyp-Bestimmung einmal durchgeführt werden. 

-nicht angeschriebenen oder nicht zuzuordnenden Blutproben dürfen keine prätransfusionellen Untersuchungen durchgeführt werden.

-Ob jemand Blutgruppe A1 oder A2 hat ist nicht transfusionsrelevant.

-Die wichtigste Blutgruppe ist die 0.

-Kühl lagern

-nur Blut gegeben werden, welches auch vertragen wird.

-nach der Transfusion 30min Patient zur Behandlung behalten.

-Der Antikörpersuchtest wird in der LISS/Coombs Gelkarte angesetzt.

-Die Gelkarte wird unmissverständlich Beschriftet.

-Die Alufolie wird für die benötigten Mikroküvetten abgezogen.

-Als erstes werden die Testec pipettiert.

-Danach wird in jede Mikroküvette das Serum pipettiert.

-Bevor zentrifugiert werden darf, muss eine Inkubation stattfinden -> 37 Grad(Reaktionsoptimum IgG) für 15 min

-Zentrifugation

-Ablesen

-Protokollieren

• Doppelpopulation (oben und unten sedimentierte EC):

Ursachen:

-AB0-Kompatibel Transfusion

-Allogene Knochenmarktransplantation

-Nabelschnurblut: Mischung der ungleichen kindlichen und mütterlichen EC

Massnahmen:

-Transfusionhistorie: intern oder in einem anderen Spital:

Bei Menschen wo man sich nicht sicher ist (Diskrepanz Ec Sediment oben und unten), gibt man Blutgruppe 0 und man sagt man akzeptiert die Blutgruppenbestimmung nicht, Pat. soll nach 3 Monat nochmals kommen (Ec leben 120 Tage) und nochmals testen.

-Stammzelltransplantation: Nachfrage bei Arzt oder Transplantationszentrum

-Nabelschurblut: Fersenblut anfordern

• Positive Kontrolle (Kontrolle muss immer negativ sein):

Ursachen:

-starke Paraproteinämie

-starke Kälteantikörper

-Nabelschnurblut kann vermischt mit der Warton’schen Sulze sein

-Verschleppung der Reagenzien

Massnahmen:

-Mehrmaliges Auswachen der EC mit NaCl

-Mehrmaliges Auswaschen der EC mit warmen NaCl

-Fersenblut Anfordern

-Ansatz wiederholen

• Abgeschwächte Antigene (wenn die Reaktionsstärke kleiner als 3+ ist)

Ursachen:

-A-Untergruppe

-Neugeborene

-Leukämie, MDS

Massnahmen:

-Untergruppe serologisch oder molekulargenetisch Nachweisen.

-Bei Neugeborenen und Kindern <4 Monate dürfen abgeschwächte die Reaktionen bei A und B akzeptiert werden.

-Bestimmung mit anderen Testseren (Antikörper-Klone) wiederholen.

Ursache:

-Neugeborene: frühstens nach 3 Monate spätestens nach 12 Monaten Nachweisbar

-Alter

-Agammaglobulinämie

Massnahmen:

-Ansatz bei 4 Grad und /oder mit doppelter Serummenge

-Wiederholung der AB0-Bestimmung mit anderem Testseren (Antikörper-Klon)

-Molekulargenetische Bestimmung

• Positive Null-Zelle (Gilt als Kontrolle und muss negativ sein)

Ursachen:

-Kälteantikörper (häufig Anti-I und Anti-H, reagieren normalerweise bei 4 Grad, Kälte-Ak welche stark und bei Raumtemperatur reagieren können stören)

-Allo-Antikörper (wenn die Null-Zelle das korrespondierende Antigen besitzen und der Allo-AK bei Raumtemperatur reagiert, Beispiel Allo-Anti-M)

-Blutgruppe Bombay (Besitzt keine H-Substanz und kann selten Anti-H bilden, da die Null-Zelle viel H-Substanz besitzt, reagiert es entsprechend.)

Massnahmen:

-Isoagglutinin-Bestimmung bei 37 Grad wiederholen

-AKST beachten, bei Allo-AK, dass korrespondierende AG der Null-Zelle bestimmen

-Bombay molekulargenetisch abklären, Transfusion: nur Bombay -Blut

Ursachen:

-Selten (2-6%) der Individuen mit Blutgruppe A2 und 25% der Individuen mit der Blutgruppe A2B bilden einen irregulären Anti-A1-AK. Er ist nur Transfusionsrelevant, wenn er bei 37 Grad reagiert.

Massnahmen:

-Isoagglutinin-Bestimmung bei 37 Grad wiederholen. Falls immer noch positiv, muss die A-Untergruppe abgeklärt werden. Bestätigt sich der irreguläre Anti-A1-AK, darf nur A2 oder A2B transfundiert werden.

• Weak D (Beide Rh-D Küvetten weisen eine abgeschwächte (<3+) Reaktion auf.

Ursachen:

-Grundsätzlich ist ein weak D eine abgeschwächte Antigenausprägung. Individuen besitzen die gleichen Epitope wie Rh-D positive, nur die Quantität ist vermindert.

-Als Spender und Empfänger gelten sie als Rh-D positiv.

Massnahmen:

-serologische oder molekulargenetische Rh-D Abklärung.

CAVE: Einige seltene weak D Typen können bei Kontakt von normalen Rh-D Allo-Antikörper bilden. Deshalb wird bei Frauen <50 Jahre eine Bestimmung des weak D immer molekulargenetisch durchgeführt.

• Partial D (Eine der beiden Rh-D Küvetten zeigt eine schwache oder keine Reaktion.

Ursachen:

-Beim partial D handelt es sich um eine qualitative Veränderung der Rh-D Epitope. Das häufigste und wichtigste partielle D-antigen ist das partial D der Kategorie Vl. Partial D Kategorie Vl könne leicht ein Allo-Anti-D bilden.

-Als Spender gelten partial D als Rh-D positiv und als Empfänger Rh-D negativ (Rh-Prophylaxe).

Massnahmen:

-molekulargenetische Rh-D Bestimmung

-Blutgruppe: (<3+)

-D-Küvette beide reagieren gleich

-Kontrolle neg. (<+ nicht gültig)

-Iso passen und 0 Zelle ist neg. (0 ist Kontrolle) (<+)

-Frau Gebärfähigen Alter-> Rh-/K-Phänotyp (<3+)

----Type ist in Ordnung

-AKST -> neg., falls pos.<+, weitere Analysen: Ak muss identifiziert werden

-DAT -> neg. (Falls alle anderen neg. (top) kann trotzdem transfundiert werden)?

----Screen ist in Ordnung

Es kann in den nächsten 96 h ohne weitere Tests Blutgruppenkompatibel transfundiert werden.

Dabei wird die Tatsache ausgenutzt, das Antikörper eine Verbindung mit dem korresponideren Antigen eingeht. -> Schlüssel-Schloss-Prinzip

Substanzen die in der Lage sind, 

-in einem Fremdorganismus eine Immunantwort auszulösen

-mit vorgebildetetn Antikörpern oder sensibilisierten Lyphozyten zu reagieren bzw. zu binden.

In der Immunhämatologie:

-Zellstädnig 

-Auf der Oberfläche nachweisbar

-Mehr oder weniger starke Fähigkeit eine Antikörperbildung auszulösen (Immunnogenität)

-Fähigkeit mit Antikörpern eine Bindung einzugehen (Antigenität)

-Bestehen vor allem aus Proteinen oder Kohlenhydrate

Epitope sind bestimmte Areal an der Oberfläche eines Antigen. Die Epitope eines Antigens unterscheiden sich von den Epitopen anderer Antigene. Epitope sind die Bindungsstellen der Antikörper.

Ein Antigen kann somit verschiedene Epitope besitzen. Ein Antikörper bindet nur mit einem Epitop. Jedes einzelne Epitop vermag eine Antikäörperbindung auszulösen.

Die Immunogenität ist die Eigenschaft eines Stoffes, die eine Immunantwort des Immunsystems auszulösen. Das heisst, wie wahrscheinlich (%) ist es, Antikörper gegen ein Antigen zu bilden.

Es setzt sich aus einem oder mehreren Antigenen zusammen. Diese Antigen werden von einem Gen oder von mehreren eng verbundenen ähnlichen Genen kodiert.

Aktuell ind 43 Blutgruppensysteme bekannt. Mit bis zu 46 Antigenen pro System.

Die Stelle auf einem Chromosomen, die für die bestimmten Eigenschaften z.B. für ein Antigen, codiert.

Beispiel: Auf Chromosom 9 codiert Locus 9q34 die AB0-Blutgruppe.

Allele sind bestimmte Gene, welche zwischen Individuen einer Spezies variieren können.

Grundsätzlich besitzen wir immer jeweils ein Allel der Mutter un eines des Vaters.

Es ist das genetische Erbbild. Die vererbten Eigenschaften können nur mittels molekulargenetischen Methoden nachgewiesen werden. Je nach Vererbung werden Antigene exprimiert (gebildet) oder nicht.

Es ist das Erscheinungsbild. Also die Antigen welche tatsächlich exprimiert (gebildet) werden und serologisch Nachweisbar sind.

Möglicher Genotyp des Phänotypen der blutgruppe A ist: AA oder A0

Da wir jeweils ein Chromosomensatz der Mutter als auch des Vaters erben, erhalten wir für jedes Antigen mind. 2 Allele.

Wenn beide Allele eines Individuums für ein bestommtes Merkmal gleich sind, ist das Erbgut, bezogen auf dieses Merkmal, homozygot.

Liegen dagegen zwei verschiedene Allele vor, wird dies als heterozygot bezeichnet.

Ist eine genetische Eigenschaft dominant, drückt sich diese immer im Phänotyp aus, auch wenn sie heterozygot vererbt wurde. -> Antigen A und B sind dominant über 0

Ist eine genetische Eigenschaft, kommen beide vererbten Eigenschaften phänotypisch vor. 

Antigen A und B sind codominant = Blutgruppe AB

Ist eine genetische Eigenschaft, wird sie phänotypisch nur sichtbar, wenn sie homozygot vererbt wurde.

Antigen 0 ist rezessiv zu A und B.

Sind Proteine, sie werden Immunoglobine bezeichnet und sind im Serum/Plasma nachweisbar.

Sie werden nur gebildetet wenn der antikörperbildenden Organismus das entsprechende Antigen nicht besitzt. In der Immunhämatologie spricht man häufig von irregulären Antikörpern. Das heisst, es muss eine Alloimmunisierung stattgefunden haben.

Antikörper reagieren spezifisch, dass heisst sie binden nur an diejenige Antigenstruktur (EPitop), welche die Bildung des Antikörpers hervorgerufen hat. Sie Spezifität eines Antikörpers ist also die Eigenschaft nur mit einem ganz bestimmten Antigen eine Verbindung einzugehen. Man soricht vom korrespondierenden Antigen bzw. korrespondierenden Antikörper.

In der Immunhämatologie wird hauptsächlich mit IgG und IgM Antikörper gearbeitet bzw. diese indentifiziert.

Die meisten irregulären Ak sind IgG.

Ihr Reaktionsoptimum (um eine Bindung einzugehen) ist bei 37°C, das heisst sie sind Wärmeaktiv.

IgG sind inkomplette Antikörper. Das heisst, sie gehen eine Bindung mit dem korrespondierenden Antigen ein, vermögen es aber nicht mit einem benachbarten Erythrozyt direkt zu agglutinieren. Um eine IgG vermittelte Bindung sichtbar zu machen, benötigt es in der Immunhämatologie Hilfsmittel.

IgG Antikörper sind plazentagägig. Das heisst sie können bei einer
Schwangeren über die Nabelschnur zum Fötus gelangen

Die meisten natürlich vorkommenden Antikörper sind IgM.

Ihr Reaktionsoptimum (um eine Bindung einzugehen) ist bei 4°C, das heisst IgM Antikörper sind kälteaktiv.

IgM sind komplett reagierende Antikörper. Das heisst, sie vermögen zwei oder mehr benachbarte Erythrozyten direkt und ohne Hilfsmittel zu agglutinieren.

IgM sind nicht plazentagängig.

Komplette Antikörper sind typischerweise IgM Antikörper. Sie sind gross genug um den Abstand und die Ladung zwischen zwei oder mehreren Erythrozyten zu überwinden und diese zu einer sichtbaren
Agglutination zu führen.

nkomplette Antikörper sind typischerweise IgG Antikörper. IgG Antikörper sind nicht gross genug um zwei Erythrozyten ohne Hilfsmittel zu binden und zu einer sichtbaren Agglutination zu führen.

Deshalb wird im immunhämatologischen Labor mit verschiedenen Hilfsmitteln, wie Rinderalbumin, Dextrane, PEG, Polybrene, proteolytische Enzyme oder einen weiteren Antikörper als
Bindeglied gearbeitet.

Jede Plasmazelle kann nur einen Antikörper gegen ein Epitop synthetisieren. Kommt ein Individuum in kontakt mit einem Fremdantigen (Erythrozyt, Bakterium ect.) werden viele verschiedene Antikörper gegen verschiedene Epitope des Antigens gebildet. Die Gesamtheit dieser verschiedenen Antikörper gegen ein Antigen nennt man polyklonale Antikörper.