Proteine: Struktur, Funktion und Engineering
Postranslationale Modifikationen
Postranslationale Modifikationen
Kartei Details
| Karten | 23 |
|---|---|
| Sprache | Deutsch |
| Kategorie | Biologie |
| Stufe | Universität |
| Erstellt / Aktualisiert | 02.04.2021 / 10.08.2022 |
| Lizenzierung | Keine Angabe |
| Weblink |
https://card2brain.ch/box/20210402_proteine_altklausuren
|
| Einbinden |
<iframe src="https://card2brain.ch/box/20210402_proteine_altklausuren/embed" width="780" height="150" scrolling="no" frameborder="0"></iframe>
|
Reduktion einer Disulfidbindung durch DDT (Dithiothreitol)
Name der Reakion: Quasi-Einschritt-Reaktion
Weshalb ist DDT ein effizientes Reduktionsmittel?
Entropische Stabilisierung des Produkts aufgrund der energetisch günstigen Zyklisierung => oxidierte Form von DDT ist energetisch stark begünstigt.
Reduktionsmittel der Disulfidbindung (Vor- und Nachteile). Welches davon wird bevorzugt im Sauren eingesetzt?
- Dithiothretiol (DTT)
pH > 7, Thio-Disulfid-Oxidoreduktasen (Dsb-Systeme) und PDI katalysieren diese Reaktion in Bakterien bzw. in höheren Zellen.
- Tris-carboxyethyl-phosphin (TCEP)
nicht membrangängig, stabil gegen Luft-Oxidation, bevorzugt im Sauren eingesetzt, da selektive Reaktion bei pH = 5
- 2-Mercaptoethanol (2 Schritte, schnell bei pH 7)
Reagenz, das zur Quantifizierung von freien Thiolresten allgemein gebräuchlich ist:
- Dithiobisnitrobenzoat, DTNB
Reduktion der Disulfidbindung mit Mercaptoethanol
=> 2-stufige GGW-Reaktion
=> 2-Mercaptoethanol (Thiolat-Form als reaktives Nukleophil)
Eine Cystein-Rest fungiert als Abgangsgruppe und bei der 1. Rektion entsteht ein gemischtes Disulfid => Mercaptoethanol wird nochmal eingesetzt, so dass ein Cystin in 2 freie Cysteine reduziert werden.
Man braucht insgesamt 2 mal Mercaptoethanol.
=> keine Quervernetzung in der Polypeptidkette mehr
=> dann können wir die Länge der Kette bei SDS-PAGE bestimmen
In Abwesenheit von Mercaptoethanol erscheint die Bande kleiner => wegen der Disulfidbindung.
=> Man soll mild alkalische pH haben
Reduktion mittels DTNB (Ellman's Reagenz)
DTT = Dithiolreithol
=> reversible Thiol-Disulfid-Austauschreaktion
=> Quantifizierung von freien Thiolresten über das stöchiometrisch gebildete, gelb gefärbte aromatische Thiolat: NTB = 412 nm
=> pro reagiertem Cystein-Rest wird ein Thiol-Rest freigesetzt
Reduktion mittels TCEP
=> Disulfidbindung wird reduziert
=> benötigt keine basischen pH-Wert
=> selektive Reaktion bei pH 5, stabil gegen Luft-Oxidation
Formulieren Sie die selektive Spaltung einer Peptidkette an einem Methioninrest mit Bromcyan. Bennen Sie dabei entstehende Zwischenprodukt sowie die letztendlich gebildete atypische Aminosäure.
Selektive chemische Reaktion an der Met-Seitenkette, die zur Spaltung der Peptidbindung führt.
- Wichtige Methode zur Spaltung von Proteinen in Peptidfragmente zwecks Sequenzanalyse
Beschreiben Sie die Bildung von Jod-Tyrosin mit Chloramin T (Strukturformel, Zwischenprodukte und gebildete AS) durch radioaktive Jodierung.
Wie heißt diese Reaktion in der Organischen Chemie?
=> chemische Modifizierung von Tyr-Seitenketten
