Kl. Chemie 3

-Temperatur 

-Flow
-Injektionvolumen
 

Peaks

Erfasst getrennte Analyten und erstellt daraus ein Chromatogramm

UV:
-Häufigster
-Lichtabsorption durch die Moble Phase im UV-Bereich

Dioden-Array-Detektor (DAD):
-Gleich wie UV, jedoch mehrere Wellenlänge gleichzeitig

Brechungisndex Detektor:
-unempfindlicher als UV, kann jedoch Substanzen erkennen, welche nicht UV-Abdsorption zeigen

Fluereszenz Detektor (FLD):
-1000 mal sensitiver als UV
-mithilfe Fluoreszenz

Lichtstreu Detektor:
-für nicht oider gering UV-Aktive Stoffe
-Lipide, Tenside, Kohlenhydrate, Aminosäre....

MS:
-hiermit kann auf die chemische Struktur der ursprünglichen Substanz in der Probe geschlussfolgert werden

Mit diesem Detektor kann die Ionenmasse (also schlussendlich der Gesuchte Analyt) bestimm  werden.

Ionenquelle:
-''Schiesst'' geladene teilchen

Wienfilter:
-Sorgt mit der Lorenzkraft, dass nur Ionen, welche eine bestimmte  Geschwindigkeit haben, dieses Feld gerade durchqueren

Detektor:
-Je nach Masse Werden die teilchen mit der Zentripedalkraft in einen Halbkreis an einen Detektor geworfen
-Je grösser die Masse, umso grösser der Radius

FID: Flammenionisationsdetektor
-Universell
-erfasst alle Kohlenstoffhaltige Verbindungen

Prinzip:
Analyt wird durch eine Flamme ionisiert und dadurch fliesst ein messbarer Strom

 

die vom Detekor erfassten Signale werden durch ein Computerprogramm in Form eines Duagrammes Dargestellt.

Y-Achse= Signalintensität
X-Achse= Zeit

Basislinie:
-sollte möglicht Ruihg verlaufen = Störungsfrei

Integrationszeit:
-Basisline des Peaks

 

Zeit die ein Analyt für das Passieren der Säule benötigt

-> Substanzspezifisch!

Zeit, die die Mobile Phase benötigt um die Säule zu Durchqueren.
-Substanz, welche mit der Säule keine Wechselwirkung eingeht

Wird für die Bestimmung Nettoretensionszeit benötigt

 

Sagt aus, wie lange sich eine Probe in der Stationären Phase aufgehalten hat

-> um diese zu definieren, benötigt man die Totzeit

Identifiziert:
-Retensionszeit

Quantifiziert:
-PeakFläche
-PeakHöhe

-Symetrisch
-Peak beginnt/Endet auf der Basislinie

Tailing

Fronting

Überladungseffekte

T = Tailingfaktor

Eine Störung der Basislinie ist ''Normal''

Bestimmung der Nachweis Grenze

Handelt es sich um einen echten Peak?

Wird mithilfe einer Blindprobe und einer Probe mit zu bestimmenden Analyt ertsellt

In der Toxikologie wird es als Bestätignugstest angewendet

-Trennung beruht auf Verteilung von Substanzen zwischen Phasen

-zwei nicht mischbare Phasen

-eine mobile und eine stationäre Phase

-kontinuirliche Abfolge von Gleichgewichtseinstellungen

Ausschlusschromatographie (Molekühlgrösse):
-an porösen Oberflächen werden kleine mehr zurückgehaltenals grosse

Adsorption:
-kurze Anlagerung eines Stoffes an einen anderen, ohne chemische Bindungen
-''kurzer Stopp''

Verteilung:
-löslichkeit in zwei nicht miteinander mischbaren Flüssigkeiten (oder gas & Flüssigkeit)

Ionenaustausch:
-durch Ladung
-ungeladene wandern schneller

Affinität:
-spezifische Wechselwirkung zwischen Stationärer Phase und Analyt

HPLC

GC

Entgaser:
-Sauerstoff wird entfernt = ruhigeres Chromatogramm

Pumpe:
-erzeugt Druck, Spart Zeit -> bus 450bar

Injektionsventil:
-Probe wird eingebracht
-hier befindet sich auch die Probenschleife

Vorsäule & Säule:
-Auftrennung der stoffe

Detektor:
-Erfassen der Probenmoleküle

-sie kann eine fest definierte Mänge Fassen und wird mit der Probe ''überfüllt''.

(oder man gibt mit einer exakten Spritze ein definiertes Volumen in die Schleife)

Hight Performance Liquide Chromatographie

Mobile Phase: Eluent

Stationäre Phase : Säule

Bedingung:
-Probe muss sich in einem Lösungsmittel lösen können

-Gradienten
-Fluss
-Wellenlänge
-Säule
-Temp.
-pH-Wert

isokratischer Lauf:
-während des gesemmten Chromatogrielauf wird keine Veränderung vorgenommen

 

Gradientenlauf:
-bedingungen wärend dem Lauf verändern
-> Analysezeit und qualität beeinflussen

Umkehrphase:
-Stationärphase A-Polar
-Lösemittel Polar
-Analyt A-polar
-OH-Gruppe nicht zugänglich
-häufige verwendet
--> kann mit Wasser in Berührung kommen
--> kann z.T Polar gemacht werden, damit auch Polare Analyten gemessen werden können

Normalphase:
-Stationärphase Polar
-Lösemittel A-Polar
-Analyt Polar
-OH-Gruppe zugänglich
-ACHTUNG: nicht mit Wasser in Berührung kommen!

-Teilchengrösse
-Porenstruktur
-Druckstabilität
-Chemische Modifikation
-Länge
-Durchmesser

1) Trägergas
2) Injektor
3) Säule im Säulenofen
4) Detektor (FID am häufigsten)
5) Signalaufzeichnung

FID: (Flame ionization detector)