Immunologie 2
Verfahren Monoklonale Gammopathien
Verfahren Monoklonale Gammopathien
Monoklonale Gammopathie
Definition & Ursache
eine übermässige Produktion von monoklonalen Immunglobulinen
--> dies ist die Folge von einer monoklonalen Proliferation von differenzierten B-Zellen oder Plasmazellen
Welche 5 Verfahren werden zur Diagnose von Monoklonale Gammopathie eingesetzt?
Elektrophorese
Immunfixation Serum
Immunfixation Urin
Messung der freien Leichtketten im Serum/Urin
Messung der Hevylite/Freelite
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Wie wird sie gelesen?
es entsehen durch zusammenspiel Grösse & Ladung 5 Banden:
Albumin:
-am deutlichsten
-viel vorhanden
-klein, leicht
a1 & a2:
Akut-phasen-Proteine
B-Globuline:
-Transferin
-Plasminogen
...
y-Globuline:
-G,E,A,M,D
-sehr breite Bande und normalweise ohne klare abgränzung, da unzählig verschiedene AK
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Alle Proteine sin negativ geladen, wiso wandern die AK trozdem eher zum Negativ-Pol?
Durch den Puffer-Fluss, da der Puffer Positiv geladen ist.
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
für was hauptsächlich eingesetzt? (3)
Erkennung & Beobachtung Eiweissverlust
Erkennung & Beobachtung Enzündungen
Erkennung und Verlaufs-Beobachung von Monoklonalen Proteinen
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
werden alle monoklonalen Gammopathien damit erkannt?
gibt es eine Alternative?
Nein, da sich unter dem a- oder B- Globulinbalken monoklonale AK/Leichtketten verstecken können
--> sensitiver ist die Immunfixation
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Normal:
-Albuminfraktion Dominiert
-danach die a1 & a2 Globuline (Akut-Phasen)
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Akute Enzündung:
a1 & a1 Globuline sind erhöht --> Akut-Phasenproteine
MERKE:
-Es dauert ca. 2 Tage, bis diese Globuline ansteigen.
-bei Virusinfektionen ist der Anstieg kleiner
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Leberzirrhose:
B und Y gehen one klare Abgrenzung ineinander, da Erhöhung der Immunglobuline. (vorallem IgA bei Leberzirrhose und vergiftungen)
Albumin welches in der Leber produziert wird ist vermindert
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Monoklonale Gammopathhie:
Normalerweise reagiert der Körper mit verschiedenen (polyklonale) AK.
Wenn aufgrund einer Malignen Entartung nurnoch eine Gruppe AK (monoklonal) produzuert, entsteht dieseer Peak bei den Y-Globulinen.
MERKE:
Die Serum-Protein-Elektrophorese gilt hierbei nur als grobe Screeningmethode
Serumimmunfixation:
Definition & Anwendung
Was wird vorgängig gemacht?
Das Patientenserum wird geeignet verdünnt und auf 6 Elektrophorese-Spuren pipettiert.
nach Elektrophoresischer auftrennung erfolgt die Präzipation der einzelnen Immunglobuline anhand des passenden Antiserums & Färbung.
vorgängig quantitative Immunglobulinmessung und entsprechende Verdünnung herstellen
Serumimmunfixation:
Was ist in der ersten Spur?
Referenzspur : Alle Proteine kommen zur Darstellung
Serumimmunfixation:
Interpretation
Unauffällig:
Alle Spuren zeigen eine diffuse Anhäufung von Immunglobulinen ohne klar ersichtliche Banden.
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie IgG-Lambda:
Bande bei IgG und Lambda
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie IgM-Kappa:
Bande bei IgM und Kappa
(Bande bei G und A sind artefakte)
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie IgA-Lambda:
Bande bie IgA & Lambda
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie mit Schwerketten von IgG:
Starke BAnde bei IgG ohne passende Bande bei Kappa/Lampbda = Schwerkette betroffen.
Serumimmunfixation:
Interpretation
Biklonale Gammopathie IgA-Kappa + IgG-Kappa:
bei einer Biklonalen Gammopathie produzieren ZWEI entartete Plasmaklons ZWEI UNTERSCHIEDLICHE Monoklonale AK.
Serumimmunfixation:
Interpretation
Speziell?
Monoklonale Bande Lambda:
Bande bei Lambda, jedoch nicht bei jedoch nicht bei G,A,M = Freie Lamda, IgD oder IgE
Um dies zu klähren benötigt es einen zweiten Ansatz Antiserum gegen IgE und IgD
Serumimmunfixation:
Interpretation
Was ist auf diesem 2. Gel nun erkennbar?
Monoklonale Gammopathie IgD Lambda
Serumimmunfixation:
Es gibt auch Antiseren gegen Freie Leichtketten. Welche Epitope werden wie erkannt?
Diese Antiseren erkennen Epitope, welche bei kompletten Immunglobulinen verdeckt sind
Serumimmunfixation:
Interpretation
(freie Leichtketten)
Was ist nun auf dem Gel2 ersichtlich?
Monoklonale Gammopathie nit freien Lambda-Leichtketten
Serumimmunfixation:
Wann spricht man von Oligoklonale Immunfixationsmuster?
Bei welchen Patienten sind sie zu finden?
Wenn mehrere monoklonale Balken entstehen.
->Immundefizienten, Autoimmunerkrankungen. Krebserkrankten & Stammzelltransplantation.
MERKE:
Die Proteinelektrophorese ist nicht sensitiv zuer Erkennung von monoklonalen Gammopathhien
--> Die Immunfixation ist überlegen
Was ist hier der einzige Hinweis(Bei der Proteinelektrophorese), dass es eine Verdeckte Kammopathie?
einzige was auf fällt, ist die verminderte Y-Globulin Fraktion
Serumimmunfixation:
Wo kommen die verschiednen Immunglobuline (IgA, IgG, IgM)zu stehen?
Wo das Prä-Albumin?
- IgG igM IgA +
--> Die AK sind nur schwach negativ geladen und werdenm mit dem Positiv-geladenem Strom ''mitgezogen''
--> IgG ist das kleinste und wird somit am weitesten zurückgezogen
Prä-Albumin: am weitesten beim Plus-Pol
Serumimmunfixation:
Weche vier Muster gibt es?
Polyklonales Muster
Monokolnales Muster
Oligoklonales Muster
Biklonales Muster
Serumimmunfixation:
Polyklonales Muster:
-typische ''Ursache''?
Unauffällige Immunfixation:
-Alle spuren zeigen eien Diffuse Anhäufung vin Immunglobulinen --> alles normal
Serumimmunfixation:
Monoklonale Muster:
-typische ''Ursache''?
-Eine Entartete Plasmazelle produziert eine Art von Ig.
-Andere meist unterdrückt
Hier: IgG-Lambda
Serumimmunfixation:
Biklonales Muster:
-typische ''Ursache''?
Zwei entartete Plasmazellen produzieren zwei unterschiedliche monoklonale Proteine
Serumimmunfixation:
Oligoklonales Muster:
-typische ''Ursache''?
Mehrere monoklonale Banden:
-vorallem bei Immunsupremierten
-Stammzelltransplantation
Wird nicht weiter getestet
Messung der freien Leichtketten im Serum:
Prinzip?
Was wird ''verglichen''?
Mithilfe von Antiserum welches an die Freien Ketten bindet.
Der gesunde Mensch hat etwa gleich viele Kappa wie Lambda, verändert sich dies klar, ist das verdächtig auf eine Monoklonale Gammopathie.
Wenn eines erhöht: Maligne Monoklonale gammopathie
Wenn beide erhöht: Reaktiv Nierenschaden
Kappa/Lampbda-Quotient:
Ideal: 0.26-1.65
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Welche Proteine werden vom Glomeruli Filtriert?
Welche nicht?
Filtriert:
Alle Grossen (Grösser Als Albumin):
-Albumin
-Transferin
-IgG
nicht Filtriert:
alle kleinen:
-alpha-1-Mikroglobulin
-beta-2-mikroglobulin
-Leichtketten
Merke: die nicht filtrierten werdn z.T rückresorbiert!
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Was ist nun das Problem bei monoklonalen Gammopathie bei den Glomeruli?
SPEZIELL?
-lässt vermehrt Grosse Proteine durch
-ist ''überfordert'' und resorbiert die kleinen Proteine nicht mehr genügen zurück
SPEZIELL:
diese freien Leichtketten, welche nicht mehr zurückresorbiert werden können, können mithilfe von einer Immunfixation im Urin nachgewiesen werden.
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Achtung:
Monoklonale, freie Leichtketten führen zu einer Proteinurie jedoch beim Urinstix nicht zwingen zu einem Positivem Protein, da auf diesem Albumin nachgewiesen wird.
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Welche Proteine geben Hinweis auf eine Glomerulären Schaden, wenn sie vermehrt im Urin auftreten? welche auf einen Tubulären?
Glomelurär:
Filtriert:
Alle Grossen (Grösser Als Albumin):
-Albumin
-Transferin
-IgG
Tubulär:
nicht Filtriert:
alle kleinen:
-alpha-1-Mikroglobulin
-beta-2-mikroglobulin
-Leichtketten
Immunfixation Urin:
Was will man besonders nachweisen?
Die freien Monoklonalen Leichtketten.
Deswegen sind IgG,A und M auf einer Spur zusammen
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Lernkarten
Monoklonale Gammopathie
Definition & Ursache
eine übermässige Produktion von monoklonalen Immunglobulinen
--> dies ist die Folge von einer monoklonalen Proliferation von differenzierten B-Zellen oder Plasmazellen
Welche 5 Verfahren werden zur Diagnose von Monoklonale Gammopathie eingesetzt?
Elektrophorese
Immunfixation Serum
Immunfixation Urin
Messung der freien Leichtketten im Serum/Urin
Messung der Hevylite/Freelite
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Wie wird sie gelesen?
es entsehen durch zusammenspiel Grösse & Ladung 5 Banden:
Albumin:
-am deutlichsten
-viel vorhanden
-klein, leicht
a1 & a2:
Akut-phasen-Proteine
B-Globuline:
-Transferin
-Plasminogen
...
y-Globuline:
-G,E,A,M,D
-sehr breite Bande und normalweise ohne klare abgränzung, da unzählig verschiedene AK
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Alle Proteine sin negativ geladen, wiso wandern die AK trozdem eher zum Negativ-Pol?
Durch den Puffer-Fluss, da der Puffer Positiv geladen ist.
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
für was hauptsächlich eingesetzt? (3)
Erkennung & Beobachtung Eiweissverlust
Erkennung & Beobachtung Enzündungen
Erkennung und Verlaufs-Beobachung von Monoklonalen Proteinen
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
werden alle monoklonalen Gammopathien damit erkannt?
gibt es eine Alternative?
Nein, da sich unter dem a- oder B- Globulinbalken monoklonale AK/Leichtketten verstecken können
--> sensitiver ist die Immunfixation
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Normal:
-Albuminfraktion Dominiert
-danach die a1 & a2 Globuline (Akut-Phasen)
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Akute Enzündung:
a1 & a1 Globuline sind erhöht --> Akut-Phasenproteine
MERKE:
-Es dauert ca. 2 Tage, bis diese Globuline ansteigen.
-bei Virusinfektionen ist der Anstieg kleiner
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Leberzirrhose:
B und Y gehen one klare Abgrenzung ineinander, da Erhöhung der Immunglobuline. (vorallem IgA bei Leberzirrhose und vergiftungen)
Albumin welches in der Leber produziert wird ist vermindert
Elektrophorese:
Serumproteinelektrophorese:
Interpretation
Monoklonale Gammopathhie:
Normalerweise reagiert der Körper mit verschiedenen (polyklonale) AK.
Wenn aufgrund einer Malignen Entartung nurnoch eine Gruppe AK (monoklonal) produzuert, entsteht dieseer Peak bei den Y-Globulinen.
MERKE:
Die Serum-Protein-Elektrophorese gilt hierbei nur als grobe Screeningmethode
Serumimmunfixation:
Definition & Anwendung
Was wird vorgängig gemacht?
Das Patientenserum wird geeignet verdünnt und auf 6 Elektrophorese-Spuren pipettiert.
nach Elektrophoresischer auftrennung erfolgt die Präzipation der einzelnen Immunglobuline anhand des passenden Antiserums & Färbung.
vorgängig quantitative Immunglobulinmessung und entsprechende Verdünnung herstellen
Serumimmunfixation:
Was ist in der ersten Spur?
Referenzspur : Alle Proteine kommen zur Darstellung
Serumimmunfixation:
Interpretation
Unauffällig:
Alle Spuren zeigen eine diffuse Anhäufung von Immunglobulinen ohne klar ersichtliche Banden.
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie IgG-Lambda:
Bande bei IgG und Lambda
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie IgM-Kappa:
Bande bei IgM und Kappa
(Bande bei G und A sind artefakte)
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie IgA-Lambda:
Bande bie IgA & Lambda
Serumimmunfixation:
Interpretation
Monoklonale Gammopathie mit Schwerketten von IgG:
Starke BAnde bei IgG ohne passende Bande bei Kappa/Lampbda = Schwerkette betroffen.
Serumimmunfixation:
Interpretation
Biklonale Gammopathie IgA-Kappa + IgG-Kappa:
bei einer Biklonalen Gammopathie produzieren ZWEI entartete Plasmaklons ZWEI UNTERSCHIEDLICHE Monoklonale AK.
Serumimmunfixation:
Interpretation
Speziell?
Monoklonale Bande Lambda:
Bande bei Lambda, jedoch nicht bei jedoch nicht bei G,A,M = Freie Lamda, IgD oder IgE
Um dies zu klähren benötigt es einen zweiten Ansatz Antiserum gegen IgE und IgD
Serumimmunfixation:
Interpretation
Was ist auf diesem 2. Gel nun erkennbar?
Monoklonale Gammopathie IgD Lambda
Serumimmunfixation:
Es gibt auch Antiseren gegen Freie Leichtketten. Welche Epitope werden wie erkannt?
Diese Antiseren erkennen Epitope, welche bei kompletten Immunglobulinen verdeckt sind
Serumimmunfixation:
Interpretation
(freie Leichtketten)
Was ist nun auf dem Gel2 ersichtlich?
Monoklonale Gammopathie nit freien Lambda-Leichtketten
Serumimmunfixation:
Wann spricht man von Oligoklonale Immunfixationsmuster?
Bei welchen Patienten sind sie zu finden?
Wenn mehrere monoklonale Balken entstehen.
->Immundefizienten, Autoimmunerkrankungen. Krebserkrankten & Stammzelltransplantation.
MERKE:
Die Proteinelektrophorese ist nicht sensitiv zuer Erkennung von monoklonalen Gammopathhien
--> Die Immunfixation ist überlegen
Was ist hier der einzige Hinweis(Bei der Proteinelektrophorese), dass es eine Verdeckte Kammopathie?
einzige was auf fällt, ist die verminderte Y-Globulin Fraktion
Serumimmunfixation:
Wo kommen die verschiednen Immunglobuline (IgA, IgG, IgM)zu stehen?
Wo das Prä-Albumin?
- IgG igM IgA +
--> Die AK sind nur schwach negativ geladen und werdenm mit dem Positiv-geladenem Strom ''mitgezogen''
--> IgG ist das kleinste und wird somit am weitesten zurückgezogen
Prä-Albumin: am weitesten beim Plus-Pol
Serumimmunfixation:
Weche vier Muster gibt es?
Polyklonales Muster
Monokolnales Muster
Oligoklonales Muster
Biklonales Muster
Serumimmunfixation:
Polyklonales Muster:
-typische ''Ursache''?
Unauffällige Immunfixation:
-Alle spuren zeigen eien Diffuse Anhäufung vin Immunglobulinen --> alles normal
Serumimmunfixation:
Monoklonale Muster:
-typische ''Ursache''?
-Eine Entartete Plasmazelle produziert eine Art von Ig.
-Andere meist unterdrückt
Hier: IgG-Lambda
Serumimmunfixation:
Biklonales Muster:
-typische ''Ursache''?
Zwei entartete Plasmazellen produzieren zwei unterschiedliche monoklonale Proteine
Serumimmunfixation:
Oligoklonales Muster:
-typische ''Ursache''?
Mehrere monoklonale Banden:
-vorallem bei Immunsupremierten
-Stammzelltransplantation
Wird nicht weiter getestet
Messung der freien Leichtketten im Serum:
Prinzip?
Was wird ''verglichen''?
Mithilfe von Antiserum welches an die Freien Ketten bindet.
Der gesunde Mensch hat etwa gleich viele Kappa wie Lambda, verändert sich dies klar, ist das verdächtig auf eine Monoklonale Gammopathie.
Wenn eines erhöht: Maligne Monoklonale gammopathie
Wenn beide erhöht: Reaktiv Nierenschaden
Kappa/Lampbda-Quotient:
Ideal: 0.26-1.65
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Welche Proteine werden vom Glomeruli Filtriert?
Welche nicht?
Filtriert:
Alle Grossen (Grösser Als Albumin):
-Albumin
-Transferin
-IgG
nicht Filtriert:
alle kleinen:
-alpha-1-Mikroglobulin
-beta-2-mikroglobulin
-Leichtketten
Merke: die nicht filtrierten werdn z.T rückresorbiert!
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Was ist nun das Problem bei monoklonalen Gammopathie bei den Glomeruli?
SPEZIELL?
-lässt vermehrt Grosse Proteine durch
-ist ''überfordert'' und resorbiert die kleinen Proteine nicht mehr genügen zurück
SPEZIELL:
diese freien Leichtketten, welche nicht mehr zurückresorbiert werden können, können mithilfe von einer Immunfixation im Urin nachgewiesen werden.
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Achtung:
Monoklonale, freie Leichtketten führen zu einer Proteinurie jedoch beim Urinstix nicht zwingen zu einem Positivem Protein, da auf diesem Albumin nachgewiesen wird.
Messung der freien Leichtketten im Urin:
Welche Proteine geben Hinweis auf eine Glomerulären Schaden, wenn sie vermehrt im Urin auftreten? welche auf einen Tubulären?
Glomelurär:
Filtriert:
Alle Grossen (Grösser Als Albumin):
-Albumin
-Transferin
-IgG
Tubulär:
nicht Filtriert:
alle kleinen:
-alpha-1-Mikroglobulin
-beta-2-mikroglobulin
-Leichtketten
Immunfixation Urin:
Was will man besonders nachweisen?
Die freien Monoklonalen Leichtketten.
Deswegen sind IgG,A und M auf einer Spur zusammen
