Mikrobio - Labormethoden/Diagnostik
Osteopathie HES-SO
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Wie kann man die Eigenschaften eines einzigen Mikroorganismus analysieren, ohne dass andere Mikroorganismen das Ergebnis beeinflussen?
Man muss eine Reinkultur (Kultur aus einer Organismenart) des Mikroorganismus herstellen, die nicht mit anderen Mikroorganismen kontaminiert ist.
Bedingung: Versorgung mit den richtigen Nährstoffen, Haltung unter entsprechenden Bedingungen, keine Kontamination
Verhindern einer Kontamination: Sterilisation des Kulturmediums: Arbeit mit sterilen Materialien unter sterielen BEdingunen
Wie verhindert man Kontaminationen? Nenne 2 Beispiele
Sterilisation des Kulturmediums, Arbeit mit sterilen Materialien
Bsp: Autoklavieren, Hitzesterilisation, Sterilbank
Welche Funktion hat Agar, wenn es zu flüssigem Kulturmedium hinzugegeben wird?
Agar ist ein Geliermittel, welches das Kulturmedium (wässerige Lösung) halbfest (Gel) macht. So wird es in Petrischalen gelagert.
Was ist der Unterschied zwischen komplexen und chemisch definierten Medien?
chemisch definiertes Kulturmedium: exakte Mengen hochgereinigte anorganische oder organische Chemikalien sin in destilliertem Wasser gelöst (spezifisch für eine bestimmte Bakterienart)
komplexes Kulturmedium (undefiniertes Kulturmedium): keine spezifische Zusammensetzung, wird verwendet, wenn die genaue Zusammensetzung eines ediums nicht entscheidend ist (zB Bakterien mit einfachen Nährstoffansprüchen)
Wann sind Blutkulturen wichtig und nach welchen Eigenschaften lassen sich die Erreger im Blut durch diese Kulturen unterscheiden?
- Sepsis: Blutvergiftung, Infektion des Blutes durch das Eindringen eines virulenten Organismus, der sich vermehrt und verschiedene Gewebe infiziert
- Bakteriämie: grosse Anzahl von Bakterien im Blut durch die Ausbreitung in viele Gewebe (systemische Infektion)
--> die Blutkultur ist die einzige schnelle Methode, um die Erreger zu isolieren und zu identifizieren
Für welche Infektionen werden Messstreifentests zur Diagnostik verwendet? Welche „Arten“ von Urinproben werden analysiert?
- Harnwegsinfektionen
- Spontanurinproben (Morgenurin, Mittelstrahlurin), Sammeluinproben (24h Urin sammeln)
Was ist der Guajak-Test? (Name, Verwendung, Ergebnis) Was ist das Problem zwischen Probenentnahme und Analyse von Fäzesproben?
Biochemischer Nachweis von okkultem (verborgenen, nicht sichtbaren) Blut im Stuhl
- Name: Harz aus Guajak-Bäumen
- Verwendung: Stuhlprobe auf Guajak Harz wird mit Wasserstoffperoxis beträufelt
- Ergebnis: eine Blaufärbung zeigt ein positives Testergebnis
Während der Lagerung nimmt der Säuregehalt der Fäzes zu --> möglichst rasche Verarbeitung der Proben nach Probenentnahme nötig.
Was ist der Liquor? Wie wird er zur Untersuchung gewonnen? Wie sieht er normalerweise aus und wie sieht er im Fall einer Entzündung, Einblutung oder einer Störung der Blut-HirnSchranke aus?
Liquor = Liquor cerebrospinalis = Gehirn-Rückenmarksflüssigkeit
wir durch eine Lumbalpunktion im LWS Bereich gewonnen
- normal: klar
- frische Blutung: rot
- erhöhte Proteinkonzentration: gelb
- Entzündung: getrübt
Wie werden Proben mit möglicherweise anaeroben Bakterien, z.B. aus Wunden oder Abszessen, zum Labor transportiert? Wozu dient Resazurin?
Abgesaugte Probe oder Biopsie wird in einem Röhrchen mit sauerstoffreinem Gas transportiert.
Resazurin ist ein Redoxindikator: im Falle einer Kontamination mit Sauerstoff färbt sich Resazurin durch Oxidation rosa
Was sind selektive und differentielle Medien?
selektive Medien: enthalten Substanzen, die selektiv das Wachstum bestimmter Mikroorganismen hemmen, das anderer Organismen jedoch nicht.
Differenzielle Medien; enthalten einen Indikator (meistens einen Farbstoff), der eine Unterscheidung verschiedener chemischer Reaktionen ermöglicht, die während des Wachstums stattfinden.
Was macht ein Indikator bei der Identifizierung von Bakterien?
- die Farbe von hinzugefügten pH-Indikatorfarbstoffen wird verändert
- die Erzeugung von H2 und/oder CO2 sieht man zB in Gassammelröhrchen
Was ist die MHK? Durch welche beiden Methoden lässt sich die MHK bestimmen? Wie funktionieren diese Methoden? Wie unterscheiden sich beim Agardiffussionstest die Hemmhöfe von Antibiotika-empfindlichen und Antibiotika-resistenten Bakterien?
MHK = minimale Hemmstoffkonzentration: die kleinste Menge eines Antibiotikums, die nötig ist, um das Wachstum eines Testorganismus zu inhibieren.
Bestimmung durch Röhrchenverdünnungstest, Agrardiffusionstest.
Röhrchenverdünnungstest: Jedes Röhrchen enthält Medium mit einer anderen Konzentration des Antibiotikums. Anschliessend werden alle Röhrchen mit dem Testorganismus beimpft. Dann folgt die Inkubation. Das Röhrchen mit der geringsten Konzentration des Antibiotikums, welches das Wachstum des Testorganismus vollständig hemmt, bestimmt die MHK.
Agrardiffusionsethode: Eine Petrischale mit einem Agarmedium wird gleichmässig mmit dem Testorganismus geimpft. Bestimmte Mengen des Antibiotikums werden auf kleine Filterpapierscheiben aufgetragen, die auf der Agaroberfäche platziert werden. Während der Inkubation diffundiert das Antibiotikum von dem Filterpapier in den Agar. Je weiter das Antibiotikum von dem Filterpapier entfernt ist, desto geringer wird seine Konzentration. in einer bestimmten Entfernung von der Scheibe wird die MHK erreicht (Inhibitionszone).
Empfindlicher Keim: grosse Hemmöfe, gute Wirkung der Antibiotika
Multiresistenter Erreger: kleine Hemmhöfe
Was versteht man unter Spezifität und Sensitivität?
Spezifität: Fähigkeit eines Antikörpers, eine einzige Antigenart zu erkennen --> Antikörper ist für ein Antigen spezifisch
Sensitivität: geringste Menge an Antigen, die sich noch nachweisen lässt --> der Antikörper erkennt bereits ein einziges Antigenmolekül
Was ist ein Antikörpertiter und wozu bestimmt man ihn?
Dieser gibt an, wiviele Antikörper gegen ein bestimmtes Antigen im Serum sind.
Verdünnungsreihe des Patientenserums, zu jeder Verdünnungsreihe wird die geiche Antigenmenge hinzugegeben --> Bestimmung der höchstem Verdünnung, bei der eine Antigen-Antikörper-Reaktion stattfindet = Antikörpertiter
Was versteht man unter einer Agglutination und wo wird diese Methode angewendet?
Agglutination =Antigen-Antikörper-Reaktion, Schnelldiagnose
Methode zur ABO-Blutgruppenbestimmung
Kann man mit fluoreszenzmarkierten Antikörper auch andere Antikörper nachweisen?
nein
Hat der Patient diesen Antikörper nicht, kann der markierte Zweitantikörper nicht binden, wird in einem Waschschritt weggewaschen --> kein Fluoreszenzsignal
Wozu dient die FACS-Analyse?
Durchflusszytometrie
Ziel: Bestimmung von Anzahl und Art bestimmter Zellen in einer Probe
Wie lassen sich Zellzahlen mittels der Neubauer-Zählkammer bestimmen? Wie erfolgt die Berechnung (Formel!)?
Die Neubauer-Zählkammern bestehen aus Zählquadraten:
Formel: Zellzahl/ml = Anzahl gezählter Zellen in 1 Grossquadrat x Verdünnungsfaktor X 104
Wie funktioniert der Sandwich-ELISA-Test? Warum heisst er Sandwich-ELISA? Wofür ist ELISA die Abkürzung?
ELISA: enzyme linked immunosorbent assay
Sandwich: Ein Antigen ist zwischen 2 Antikörperlagen gefangen.
Methode: Ein Antikörper wird zB gegen ein Virusprotein an die Vertiefungen einer Mikrotitierplatte gebunden. Patientenserum hinzugeben, Enzym-gekoppelter anti-Virusprotein-AK hinzugeben, Enzymsubstrat zugeben --> Mensche des farbigen Produkts bestimmen.
Was kann man mit folgenden Verfahren nachweisen: Western-Blotting, Southern-Blotting, Northern-Blotting? Was bedeutet Blotting?
Blotting: Transfer aus einem Gel auf eine Membran (Blot = Fleck als identischer Abdruck des Originals)
Western-Blotting: Verfahren, um bestimmte pathogene Proteine zu identifizieren
Southernblotting = Identitifizierung von DNA
Northernblotting = Identifizierung von RNA
Nenne 2 Vorteile der DNA-Diagnostik?
- schnelle Diagnostik
- hohe Sensitivität
- hohe Spezifität
Wozu dient die PCR (polymerase chain reaction)? Wie funktioniert die PCR?
Ziel: Vervielfältigung und Identifikation eines bestimmten DNA-Abschnitts
Durchführung: DNA + hochspezifischer Primer + dNTPs + Pufferlösung + DNA-Polymerase
Was ist die Problematik der Virusdiagnostik? Welche Methoden gibt es, Viren zu identifizieren? Mit welchem Test kann man Viren quantifizieren?
Zur Kultivierung benötigt man Wirtszellen, da Viren nicht alleine im Kulturmedium wachsen können, zB HeLa-Zellen
Methoden: immundiagnostische Methosen (ELISA), DNA-Diagnostik (PCR), Elektronenmikroskopie
Quantifizierung von Viren mittels des Plaque Assays
