Labortechnik 2

• ist der gesuchte Antikörper in der Probe vorhanden, bindet er an das gefärbte Antigen im Reagenz
• Es entsteht ein Komplex.
• Hdh-Effekt möglich

Die Geflügelerythrozyten der Testzellen sind mit Treponema pallidum-Antigen beschichtet, welche in Gegenwart von T. pallidum-Antikörpern agglutinieren.
Kommt es zur Agglutination, d.h. der gesuchte Antikörper ist in der Patientenprobe vorhanden, bilden die Erythrozyten aufgrund der Vernetzung auf dem Boden des Wells einen gleichmässigen Schleier. Findet keine Agglutination statt, rollen sich die Erythrozyten in der runden Vertiefung der Testplatten-Kavität zu einem Punkt zusammen.

1. Einer Maus wird ein Ag verabreicht
2. Die Plasmazellen der Maus beginnen Ak herzustellen.
3. Die Plasmazellen werden der Maus entnommen und mit Myelomazellen fusioniert. Dadurch enstehen Hybridzellen die unendlich lange leben und Ak produzieren.
4. Die Zellen werden auf einem HAT-Medium platziert, dieses dient als Selektivmedium. Es überleben nur Hybridzellen
5. Die Hybridzellen werden ausgesucht und auf einem weiteren Medium angesetzt.

• Polyklonal: Haben unterschiedliche Epitope gegen ein Antigen. Günstig, hohe Sensitivität jedoch anfällig für Kreuzreaktionen.
• Monoklonal: Richten sich gegen ein einziges Epitop. Sehr spezifisch, teuer

1. Ak oder Ag werden mit einem Coating-Puffer überzogen und in die Küvennten gegeben.
2. Die Überzogenen Ak/Ag bleiben am Boden der Polystyrol Platte haften. (VdW-Kräfte)
3. Zugabe des Blockieres -- dieser blockiert die noch freien Bindungstellen auf der Platte, sodas ein Analyt nicht auf der direkt auf der Platte binden kann.
4. Auftragen des Sealer, dieser stabilisiert die Ak/Ag und erhöht die Haltbarkeit.

• Qualitativ: Chromatographische Immunoassays (Schnelltests)
• Quantitativ: ELISA (Enyzme-linked immunosorbent assay)
• ELFA (Enzyme-linked fluoreszenz assay)
• RIA (Radioimmunoassay)

Beim Sandwichprinzip ist die Messsignalstärke proportional zum Analyten, d.h. je höher das Messsignal umso höher die Konzentration des Analyten.

Beim kompetitiven Messprinzip konkurriert der Analyt (Antigen oder Antikörper) mit einem im Reagenz enthaltenen identischen aber markierten Ag oder Ak um die Bindungsstellen der fixierten Bestandteile.

Hier ist die Messsignalstärke umgekehrt proportional zum Analyten d.h. je höher das Messsignal umso tiefer die Konzentration des Analyten.

Dieses Messprinzip wird vor allem zum Nachweis eines Haptens eingesetzt.

Ein Hapten ist zu klein um zwei Antikörper binden zu können. Aus diesem Grund ist zum Nachweis eines Haptens das Sandwich-Prinzip ungeeignet.

Bei der nephelometrischen Messung wird der Teil des Lichts gemessen, welcher durch die Antigen-Antikörper-Aggregate seitlich gestreut wird.
Die Zunahme des seitlichen Streulichts ist direkt proportional zur Menge des Analyten (Antigen oder Antikörper). Je höher das Messsignal, umso höher die Konzentration.

Bei der turbidimetrischen Messung wird der Teil des Lichts gemessen, welcher durch die Präzipitate absorbiert wurde. Es wird die Intensitätsminderung des Lichtstrahls (axiales Licht) gemessen.
Je schwächer das Messsignal umso höher die Konzentration des Analyten (umgekehrt proportional).

Man misst stehts die Extinktionsdifferenz nach einer bestimmten Zeit. Ein höherer oder tieferer Leerwert würde die Differenz nicht beeinflussen.

Elektrophoreseart bei der die Analyten anhand ihres p.H Wert aufgeteilt werden.

Wird durchgeführt bei Verdacht einer Intrazellebralen Entzündung (Enzündung im Liquorraum) IgG können so quantitativ nachgewiesen werden.

1. Herstellung des p.H Trägergels
2. Auftragen der Serum und Liquorprobe nebeneinander.
3. Anlegen der Spannung -- Proteine wandern durchs Gel, bis sie die Zone ereichen, die ihrem Isoelektrischen Punkt entspricht. Dort bleiben die Fokusiert
4. Zugabe Anti-Human IgG (Komplexvergrössung)
5. Waschen und  Zugabe einer Farblösung
6. Visuelle Auswertung

IEF Muster 2 Ak Produktion im Liquoir

Intrathekale Ak Produktion

IEF Muster 3 Ak Produktion im Serum, jedoch im Liquor stärker

Intrathekale Ak Produktion

IEF Muster 4 beide Banden gleich stark

Keine Intrathekale AK Produktion

IEF Muster 5 Banden gleich dick

Keine Intrathekale Ak Produktion

IEF Muster  1 Kaum Banden sichtbar und gleichmässig

Keine Intrathekale Ak Produktion

8h

• Negativ Kontrolle
• Standart
• Leerwert

• Agarosegel: EInfach in der handhabung, Ungiftig,
• Nachteil: Niedrige Siebwirkung bei kleinen Proteinen
• Polyacrylamidgel: Chemisch inert, stabil, geringer EOF
• Nachteil: Grosse Proteine können nicht getrennt werden. Schwierig in der Handhabung

• Bei pathologischen Gesamtprotein-Werten
• Bei Lebererkrankungen
• Bei malignen Tumoren
• Bei Verdacht auf einen Antikörpermangel

• Molekülgrösse
• Ladung der Moleküle
• Angelegte Spannung
• Konzentration des Gels
• p.H Wert
• Temperatur

• DNA-Leiter
• Pos/neg Kontrolle
• Aufsteigende Bläschen bei Minus pol
• Loading Dye

Durch den LAdungsunterschied von Trägergel und Puffer entstehen kleine "Wölkchen". Diese wandern richtung Minus Pol sobald man den Strom anlegt.

Durch die Wirkung des EOF wandern sehr schwach geladene Proteine nicht in Richtung Plus-Pol, sondern sie werden in Richtung Minus-Pol mitgerissen.

Nach der Elektrophorse wird dem Agarosegel ein Proteinfarbstoff hizugefügt und getrocknet.

Es entsteht eine trochene Agarosefolie mit den sichtbaren Proteinbanden.

Die Folie wird anschliessend von einem Densitometer (misst Farbdichte) in ein Densitogramm umgewandelt

• Hämolytische Seren können einen zusätzlichen Gipfel im Alpha-2-Globulin-Bereich aufweisen und das Resultat einer Serumprotein-Elektrophorese verfälschen.
• Plasma statt Serum: Hier ist ein Fibrinogenpeak im Beta-Bereich nachweisbar, welcher unter Umständen eine monoklonale Gammopathie (Typ IgA) vortäuschen kann.

Monoklonal: Fehlverhätniss von Kappa und Lambda Ketten. Ausgelöst durch Mutierte Plasmazellen. (Pysiologisch 2:1) Keine Immunantwort.

Polyklonal: Vermehrte Bildung von Funktionierenden Antikörpern. Aufgrund Autoimmunkrankheit, Hepatitis

Monolonale Gammophatie IgM

Gesund

Gammopathie IgG

• Morbus Waldenström
• Multibles Myelom

• Bei zweifelhafen Ergebnissen oder Extremwerten.
• Flüssigkeiten die zu Viskös für die Geräte sind. Synovialflüssigkeit
• Nachteile: Zeitaufwendig, jeder BMA zählt anders

weniger als 2 G/L

Mehr als 40 G/L

• weniger als 69g/L
• Mehr als 200 g/L

• Weniger als 50 G/L
• Mehr als 1000 G/L

• Tief: Blutverlust, Eisenmangel, Malaria
• Hoch:Doping (Epo), dehydration

• tief: Knochenmarkinsuffizienz, HIV, schwere Sepsis
• hoch: Leukämie,Entzündungen, Rauchen

• tief: Knochenmarksinsuffizienz, Blutverlust, Chronischer Alkoholkonsum
• Hoch: Nach Splenektomie oder OPs