Labortechnik 2
Phase 1b
Phase 1b
Wie funktioniert ein einfacher Agglutinationsschnelltest?
Kann ein High-dose-hook effekt auftreten?
- ist der gesuchte Antikörper in der Probe vorhanden, bindet er an das gefärbte Antigen im Reagenz
- Es entsteht ein Komplex.
- Hdh-Effekt möglich
Wie Funktioniert ein Hämagglutinationstest z.B. TPHA?
Die Geflügelerythrozyten der Testzellen sind mit Treponema pallidum-Antigen beschichtet, welche in Gegenwart von T. pallidum-Antikörpern agglutinieren.
Kommt es zur Agglutination, d.h. der gesuchte Antikörper ist in der Patientenprobe vorhanden, bilden die Erythrozyten aufgrund der Vernetzung auf dem Boden des Wells einen gleichmässigen Schleier. Findet keine Agglutination statt, rollen sich die Erythrozyten in der runden Vertiefung der Testplatten-Kavität zu einem Punkt zusammen.
Erkläre die Entstehung von Monoklonaleen Antikörpern
- Einer Maus wird ein Ag verabreicht
- Die Plasmazellen der Maus beginnen Ak herzustellen.
- Die Plasmazellen werden der Maus entnommen und mit Myelomazellen fusioniert. Dadurch enstehen Hybridzellen die unendlich lange leben und Ak produzieren.
- Die Zellen werden auf einem HAT-Medium platziert, dieses dient als Selektivmedium. Es überleben nur Hybridzellen
- Die Hybridzellen werden ausgesucht und auf einem weiteren Medium angesetzt.
Unterschied von Polyklonalen und Monoklonalen Antikörpern?
- Polyklonal: Haben unterschiedliche Epitope gegen ein Antigen. Günstig, hohe Sensitivität jedoch anfällig für Kreuzreaktionen.
- Monoklonal: Richten sich gegen ein einziges Epitop. Sehr spezifisch, teuer
Wie wird eine ELISA-Platte hergestellt?
- Ak oder Ag werden mit einem Coating-Puffer überzogen und in die Küvennten gegeben.
- Die Überzogenen Ak/Ag bleiben am Boden der Polystyrol Platte haften. (VdW-Kräfte)
- Zugabe des Blockieres -- dieser blockiert die noch freien Bindungstellen auf der Platte, sodas ein Analyt nicht auf der direkt auf der Platte binden kann.
- Auftragen des Sealer, dieser stabilisiert die Ak/Ag und erhöht die Haltbarkeit.
Welche Arten von Immunsassays gibt es?
- Qualitativ: Chromatographische Immunoassays (Schnelltests)
- Quantitativ: ELISA (Enyzme-linked immunosorbent assay)
- ELFA (Enzyme-linked fluoreszenz assay)
- RIA (Radioimmunoassay)
Wie funktioniert das Sandwichprinzip?
Wie verhält sich die Messsignalstärke?
Beim Sandwichprinzip ist die Messsignalstärke proportional zum Analyten, d.h. je höher das Messsignal umso höher die Konzentration des Analyten.
Wie funktioniert das kompetitive Messprinzip?
Wie verhält sich die Messsignalstärke?
Beim kompetitiven Messprinzip konkurriert der Analyt (Antigen oder Antikörper) mit einem im Reagenz enthaltenen identischen aber markierten Ag oder Ak um die Bindungsstellen der fixierten Bestandteile.
Hier ist die Messsignalstärke umgekehrt proportional zum Analyten d.h. je höher das Messsignal umso tiefer die Konzentration des Analyten.
Wozu wird das kompetitive Messprinzip am häufigsten eingesetzt?
Dieses Messprinzip wird vor allem zum Nachweis eines Haptens eingesetzt.
Ein Hapten ist zu klein um zwei Antikörper binden zu können. Aus diesem Grund ist zum Nachweis eines Haptens das Sandwich-Prinzip ungeeignet.
Unterschied von Nephelometrie und Turbidimetrie?
Wie verhält sich das Messsignal?
Bei der nephelometrischen Messung wird der Teil des Lichts gemessen, welcher durch die Antigen-Antikörper-Aggregate seitlich gestreut wird.
Die Zunahme des seitlichen Streulichts ist direkt proportional zur Menge des Analyten (Antigen oder Antikörper). Je höher das Messsignal, umso höher die Konzentration.
Bei der turbidimetrischen Messung wird der Teil des Lichts gemessen, welcher durch die Präzipitate absorbiert wurde. Es wird die Intensitätsminderung des Lichtstrahls (axiales Licht) gemessen.
Je schwächer das Messsignal umso höher die Konzentration des Analyten (umgekehrt proportional).
Wieso muss bei der Kinetischen Messung kein Reagenzienleerwert bestimmt werden?
Man misst stehts die Extinktionsdifferenz nach einer bestimmten Zeit. Ein höherer oder tieferer Leerwert würde die Differenz nicht beeinflussen.
Was versteht man unter der Isoelektrischen Fokusierung?
Wozu wird sie eingesetzt?
Elektrophoreseart bei der die Analyten anhand ihres p.H Wert aufgeteilt werden.
Wird durchgeführt bei Verdacht einer Intrazellebralen Entzündung (Enzündung im Liquorraum) IgG können so quantitativ nachgewiesen werden.
Wie wird eine IEF durchgeführt?
- Herstellung des p.H Trägergels
- Auftragen der Serum und Liquorprobe nebeneinander.
- Anlegen der Spannung -- Proteine wandern durchs Gel, bis sie die Zone ereichen, die ihrem Isoelektrischen Punkt entspricht. Dort bleiben die Fokusiert
- Zugabe Anti-Human IgG (Komplexvergrössung)
- Waschen und Zugabe einer Farblösung
- Visuelle Auswertung
IEF Muster 2 Ak Produktion im Liquoir
Intrathekale Ak Produktion
IEF Muster 3 Ak Produktion im Serum, jedoch im Liquor stärker
Intrathekale Ak Produktion
IEF Muster 4 beide Banden gleich stark
Keine Intrathekale AK Produktion
IEF Muster 5 Banden gleich dick
Keine Intrathekale Ak Produktion
IEF Muster 1 Kaum Banden sichtbar und gleichmässig
Keine Intrathekale Ak Produktion
In welcher Zeitspanne müssen Proben mit dem Microsemi verarbeitet werden?
8h
Welche Kontrollmechanisen werden bei Immunologischen Tests eingsetzt?
- Negativ Kontrolle
- Standart
- Leerwert
Welche Elektrophoresearten gibt es?
- Kapilarelektrophorese
- Gelelektrophorse
- Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelekrophorese
Unterschied von Agarosegel und Polyarylamidgel?
- Agarosegel: EInfach in der handhabung, Ungiftig,
- Nachteil: Niedrige Siebwirkung bei kleinen Proteinen
- Polyacrylamidgel: Chemisch inert, stabil, geringer EOF
- Nachteil: Grosse Proteine können nicht getrennt werden. Schwierig in der Handhabung
Wann wird eine Serumprotein-Elektrophorese durchgeführt? (indikatoren)
- Bei pathologischen Gesamtprotein-Werten
- Bei Lebererkrankungen
- Bei malignen Tumoren
- Bei Verdacht auf einen Antikörpermangel
Wovon ist die Wandergeschwindigkeit der Moleküle in der Elekrophorse abhängig?
- Molekülgrösse
- Ladung der Moleküle
- Angelegte Spannung
- Konzentration des Gels
- p.H Wert
- Temperatur
Welche Kontrollmassnahmen gibt es bei der Elektrophorse?
- DNA-Leiter
- Pos/neg Kontrolle
- Aufsteigende Bläschen bei Minus pol
- Loading Dye
Was versteht man unter dem Elektro-osmotischen FLuss (EOF)?
Durch den LAdungsunterschied von Trägergel und Puffer entstehen kleine "Wölkchen". Diese wandern richtung Minus Pol sobald man den Strom anlegt.
Durch die Wirkung des EOF wandern sehr schwach geladene Proteine nicht in Richtung Plus-Pol, sondern sie werden in Richtung Minus-Pol mitgerissen.
Wie entsteht ein Densitogramm? (Arbeitsablauf)
Nach der Elektrophorse wird dem Agarosegel ein Proteinfarbstoff hizugefügt und getrocknet.
Es entsteht eine trochene Agarosefolie mit den sichtbaren Proteinbanden.
Die Folie wird anschliessend von einem Densitometer (misst Farbdichte) in ein Densitogramm umgewandelt
Welche Präanalytischen EInfalussfaktoren können eine Serumeiweiss-Elektrophorse beeinflussen?
- Hämolytische Seren können einen zusätzlichen Gipfel im Alpha-2-Globulin-Bereich aufweisen und das Resultat einer Serumprotein-Elektrophorese verfälschen.
- Plasma statt Serum: Hier ist ein Fibrinogenpeak im Beta-Bereich nachweisbar, welcher unter Umständen eine monoklonale Gammopathie (Typ IgA) vortäuschen kann.
Unterschied einer Monoklonalen Gammopathie und der einer Polyklonalen?
Monoklonal: Fehlverhätniss von Kappa und Lambda Ketten. Ausgelöst durch Mutierte Plasmazellen. (Pysiologisch 2:1) Keine Immunantwort.
Polyklonal: Vermehrte Bildung von Funktionierenden Antikörpern. Aufgrund Autoimmunkrankheit, Hepatitis
Monolonale Gammophatie IgM
Gesund
Gammopathie IgG
Welche Krankheiten können eine Monoklonale Gammopathie auslösen?
- Morbus Waldenström
- Multibles Myelom
Wann wird im Labor eine manuelle Zellzählung durchgeführt?
Was sind die Vor / Nachteile?
- Bei zweifelhafen Ergebnissen oder Extremwerten.
- Flüssigkeiten die zu Viskös für die Geräte sind. Synovialflüssigkeit
- Nachteile: Zeitaufwendig, jeder BMA zählt anders
Wo liegen die Alarmwerte bei Leuk?
weniger als 2 G/L
Mehr als 40 G/L
Wo liegen die Alarmwerte bei Ec? Hb
- weniger als 69g/L
- Mehr als 200 g/L
Wo liegen die Alarmwerte bei Tc?
- Weniger als 50 G/L
- Mehr als 1000 G/L
Gründe für sehr hohe / tiefe Ec Zahlen?
- Tief: Blutverlust, Eisenmangel, Malaria
- Hoch:Doping (Epo), dehydration
Gründe für hohe / tiefe Lc zahlen?
- tief: Knochenmarkinsuffizienz, HIV, schwere Sepsis
- hoch: Leukämie,Entzündungen, Rauchen
Gründe für hohe / tiefe Tc zahlen?
- tief: Knochenmarksinsuffizienz, Blutverlust, Chronischer Alkoholkonsum
- Hoch: Nach Splenektomie oder OPs
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Flashcards
Welche Elektrophoresearten gibt es?
- Kapilarelektrophorese
- Gelelektrophorse
- Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelekrophorese
Unterschied von Agarosegel und Polyarylamidgel?
- Agarosegel: EInfach in der handhabung, Ungiftig,
- Nachteil: Niedrige Siebwirkung bei kleinen Proteinen
- Polyacrylamidgel: Chemisch inert, stabil, geringer EOF
- Nachteil: Grosse Proteine können nicht getrennt werden. Schwierig in der Handhabung
Wann wird eine Serumprotein-Elektrophorese durchgeführt? (indikatoren)
- Bei pathologischen Gesamtprotein-Werten
- Bei Lebererkrankungen
- Bei malignen Tumoren
- Bei Verdacht auf einen Antikörpermangel
Wovon ist die Wandergeschwindigkeit der Moleküle in der Elekrophorse abhängig?
- Molekülgrösse
- Ladung der Moleküle
- Angelegte Spannung
- Konzentration des Gels
- p.H Wert
- Temperatur
Welche Kontrollmassnahmen gibt es bei der Elektrophorse?
- DNA-Leiter
- Pos/neg Kontrolle
- Aufsteigende Bläschen bei Minus pol
- Loading Dye
Was versteht man unter dem Elektro-osmotischen FLuss (EOF)?
Durch den LAdungsunterschied von Trägergel und Puffer entstehen kleine "Wölkchen". Diese wandern richtung Minus Pol sobald man den Strom anlegt.
Durch die Wirkung des EOF wandern sehr schwach geladene Proteine nicht in Richtung Plus-Pol, sondern sie werden in Richtung Minus-Pol mitgerissen.
Wie entsteht ein Densitogramm? (Arbeitsablauf)
Nach der Elektrophorse wird dem Agarosegel ein Proteinfarbstoff hizugefügt und getrocknet.
Es entsteht eine trochene Agarosefolie mit den sichtbaren Proteinbanden.
Die Folie wird anschliessend von einem Densitometer (misst Farbdichte) in ein Densitogramm umgewandelt
Welche Präanalytischen EInfalussfaktoren können eine Serumeiweiss-Elektrophorse beeinflussen?
- Hämolytische Seren können einen zusätzlichen Gipfel im Alpha-2-Globulin-Bereich aufweisen und das Resultat einer Serumprotein-Elektrophorese verfälschen.
- Plasma statt Serum: Hier ist ein Fibrinogenpeak im Beta-Bereich nachweisbar, welcher unter Umständen eine monoklonale Gammopathie (Typ IgA) vortäuschen kann.
Unterschied einer Monoklonalen Gammopathie und der einer Polyklonalen?
Monoklonal: Fehlverhätniss von Kappa und Lambda Ketten. Ausgelöst durch Mutierte Plasmazellen. (Pysiologisch 2:1) Keine Immunantwort.
Polyklonal: Vermehrte Bildung von Funktionierenden Antikörpern. Aufgrund Autoimmunkrankheit, Hepatitis
Monolonale Gammophatie IgM
Gesund
Gammopathie IgG
Welche Krankheiten können eine Monoklonale Gammopathie auslösen?
- Morbus Waldenström
- Multibles Myelom
Wann wird im Labor eine manuelle Zellzählung durchgeführt?
Was sind die Vor / Nachteile?
- Bei zweifelhafen Ergebnissen oder Extremwerten.
- Flüssigkeiten die zu Viskös für die Geräte sind. Synovialflüssigkeit
- Nachteile: Zeitaufwendig, jeder BMA zählt anders
Wo liegen die Alarmwerte bei Leuk?
weniger als 2 G/L
Mehr als 40 G/L
Wo liegen die Alarmwerte bei Ec? Hb
- weniger als 69g/L
- Mehr als 200 g/L
Wo liegen die Alarmwerte bei Tc?
- Weniger als 50 G/L
- Mehr als 1000 G/L
Gründe für sehr hohe / tiefe Ec Zahlen?
- Tief: Blutverlust, Eisenmangel, Malaria
- Hoch:Doping (Epo), dehydration
Gründe für hohe / tiefe Lc zahlen?
- tief: Knochenmarkinsuffizienz, HIV, schwere Sepsis
- hoch: Leukämie,Entzündungen, Rauchen
Gründe für hohe / tiefe Tc zahlen?
- tief: Knochenmarksinsuffizienz, Blutverlust, Chronischer Alkoholkonsum
- Hoch: Nach Splenektomie oder OPs
IN Welchen Fachbereichen wird die manuelle Zellzählung sonst noch eingesetzt?
- Hämat
- KC
- ZEllkulturtechnik und Stammzelllabor
Was passiert mit einer Blutprobe im Microsemi?
- Probe wird angsesaugt, mit einer Leitfähigen Lösung verdünnt und auf zwei verschiedene Messzellen verteilt.
- In Messzelle 1 wird die Probe zusätzlich verdünnt und die Leuk und Thrombo gezählt
- In Messzelle 2 werden mit einem Reagenz die Ec Lysiert, dass frei gewordene Hb wird oxidiert und wird so zu 3-wertigem Eisen. Dieses ist trüber und wird Fotometrisch gemessen.
Wie wird verhindert das mehrere Zellen gleichzeitig im Durchflusszytometer gemessen werden?
Durch hydrodynamische Fokusierung.
Entsteht durch einen Mantelstrom, dieser Steht unter Druck und wird nach vorne zu Messöffnung gepresst. Bei der Messäffnung ist er nur noch so breit wie ein Lc. Die Zellen werden quasi durch die Messöffnung gezogen.
Durch welche Interferenzen können die Ergebnissen der Autmomatischen Zellzählung beeinflusst werden?
LC: Lysierte EC, Kälteagglutinate, Erythoblasten
EC: Riesen Tc, Kälteagglutinate
TC: Pilze, Riesen Tc
Wie ist das weiterre Vorgehen bei einem Gerätefalg am Microsemi?
Die Probe wird mikroskopisch überprüft
Welche Vorteile haben automatische Urinanalyzer gegenüber der Handmethode?
- Hoher Probendurchsatz bis 150 Proben pro Stunde
- Standardisierte Methode
- Geringeres Probenvolumen nötig
- Unauffällige Resultate müssen nicht Mikroskopiert werden
Mit welcher Technik werden die Urinstix in einem Automatischen Analysegerät abgelsen?
Durch Refelxionsfotometrie:
Die einzelnen Testfelder eines Urin-Teststreifens werden an der Messposition von einer Leuchtdiode mit Licht bestimmter Wellenlänge angestrahlt. Das vom Testfeld reflektierte Licht wird vom Farbsensor/Detektor aufgefangen, mit den Werten der zuvor durchgeführten Kalibration verglichen und in einen Messwert umgewandelt. Die reflektierte Lichtmenge ist ein Mass für die Intensität der Verfärbung eines Testfeldes und somit auch für die Parameterkonzentration.
Welche zwei Gerätearten für die Automatische Urinanalyse gibt es?
Wo liegen die Unterschiede?
Analyse mittels Mirkoskopie-Bilder:
- Vorteile: Bei Auffälligkeiten können die gemachten Bilder am Monitor angesehen werden.
- Reagenzlose Geräte, Geringer Materialverbrauch.
- Nachteile: Gerät kann teileweise die Urinbestandteile nicht unterscheiden.
Analyse mittels Durchflusszytometrie:
- Vorteile: Höhere Anzahl an Partikeln wird analysiert
- Nachteile: Keine Bilder, Reagnezienverbrauch
Wie funktioniert das Messprinzip für Urinproben beim UX-2000?
Erkläre den Probendurchfluss
- Ansaugen der Probe
- Verdünnung mit Isotonischer Lösung
- Aufteilung der Probe in zwei Kammern
- In der Sedimentpartikel-Reaktionskammer werden die Zellen mit Fluoreszenzfarbstoff eingefärbt.
- In der Bakterien-Reaktionskammer wird die DNA der Bakterien angefärbt und Zylinder lysiert.
- Anschliessend werden beide Kammer in einem separaten Messkaneal gemessen.
Was verstehent man unter der Konduktivitäts-Messung eines Urins?
Kurz bevor der Urin aus der Sedimentpartikel-Reaktionskammer in die Messzelle gelangt, wird in der Probenkapillare eine Konduktivitäts-Messung durchgeführt. Konduktivität steht für die Ermittlung der Leitfähigkeit des Urins mittels Wechselstrom.
Mit dieser Messung können Informationen über die Osmolalität des Urins gewonnen werden
Welche Partikel können bei der Urinanalyse mittels Durchfusszytometrie einen Geräteflag auslösen?
Pilze, Nicht-Plattenepithelien, Kristalle, pathologische Zylinder, Spermien und Schleim
Welche Faktoren müssen stimmen, damit ein Enzym seine Maximale Reaktionsgeschwindikeit erreicht?
- p.H-Wert
- Temeratur
- Substratkonzentraiton
Entsteht bei einem Enzymtest im letzten Reaktionsschritt aus NAD+ ---- NADH misst man eine....?
Entsteht bei einem Enzymtest im letzten Reaktionsschritt aus NADH --- NAD+ misst man eine....?
Wie funktioniert das Signalverstärkersystem bei einem Immunologischen Test?
Wieso ist es nötig?
- An einen Antikörper werden mehrere Biotin-Moleküle gekoppelt.
- Das Biotin hat eine hohe affinität zu Avidin
- Gibt man zum Biotin zusätzlich Enzymarkiertes Avidin hinzu vergrössert sich der Komplex und die Signalwirkung erhöht sich deutlich
Erhöht die Sensitivität eines Tests
Was versteht man unter einem RIA?
Vorteile? Sandwich oder kompetitiv?
- Immunoassay bei dem radioaktives Jod verwerdent wird.
- Extrem niedrige Nachweisgrenze
- Kompetitives Messprinzip
Wie funktioniert ein einfacher Agglutinationsschnelltest?
Kann ein High-dose-hook effekt auftreten?
- ist der gesuchte Antikörper in der Probe vorhanden, bindet er an das gefärbte Antigen im Reagenz
- Es entsteht ein Komplex.
- Hdh-Effekt möglich
Wie Funktioniert ein Hämagglutinationstest z.B. TPHA?
Die Geflügelerythrozyten der Testzellen sind mit Treponema pallidum-Antigen beschichtet, welche in Gegenwart von T. pallidum-Antikörpern agglutinieren.
Kommt es zur Agglutination, d.h. der gesuchte Antikörper ist in der Patientenprobe vorhanden, bilden die Erythrozyten aufgrund der Vernetzung auf dem Boden des Wells einen gleichmässigen Schleier. Findet keine Agglutination statt, rollen sich die Erythrozyten in der runden Vertiefung der Testplatten-Kavität zu einem Punkt zusammen.
Erkläre die Entstehung von Monoklonaleen Antikörpern
- Einer Maus wird ein Ag verabreicht
- Die Plasmazellen der Maus beginnen Ak herzustellen.
- Die Plasmazellen werden der Maus entnommen und mit Myelomazellen fusioniert. Dadurch enstehen Hybridzellen die unendlich lange leben und Ak produzieren.
- Die Zellen werden auf einem HAT-Medium platziert, dieses dient als Selektivmedium. Es überleben nur Hybridzellen
- Die Hybridzellen werden ausgesucht und auf einem weiteren Medium angesetzt.
Unterschied von Polyklonalen und Monoklonalen Antikörpern?
- Polyklonal: Haben unterschiedliche Epitope gegen ein Antigen. Günstig, hohe Sensitivität jedoch anfällig für Kreuzreaktionen.
- Monoklonal: Richten sich gegen ein einziges Epitop. Sehr spezifisch, teuer
