Histologie 2
10 Kern und Zytoplasmafärbung
10 Kern und Zytoplasmafärbung
Wieso ist die korrekte Kernfärbung so wichtig?
Für die Beurteilung von gesundem und pathologischem Gewebe:
-die Mänge und Verteilung des Cromatins und Nukleolen gibt Auskunft über die Zellaktivität
--> Tumordiagnostik
Auf welche zwei Arten ist es möglich, Kerne anzufärben?
1)
mit positiv geladenen/kationischen/basischen Farbstoffen -->bindung an Phosphatgruppe COO-
2)
mit negativ geladenen/anionischen/sauren Farbstoffen --> bindung an die positiv geladenen Histone (nukleoproteine)
Was sist Chromatin?
Chromatin ist das Material, aus dem die Chromosomen bestehen. Es handelt sich um einen Komplex aus DNA und speziellen Proteinen, von denen wiederum etwa die Hälfte Histone sind.
Was ist wie geladen?
HE-Färbung:
in welchen zwei Schritten und mit was läuft sie ab?
Kernfärbung:
Anfärbung mit Hamalaun -> Diefferenzieren in HCL -> Bläueln in Leitungswasser
Differenzieren:
-> In Eosin (sauerer FB in sauerer Lösung)
HE-Färbung:
Kernfärbung mit Hämatoxylin:
Herstellung und Zusammensetzung von Hämatoxylin
(3Schritte)
Hämatoxylin ist ein Naturfarbstoff, welcher aus dem Campechebaum gewonnen wird. Er muss noch weiterferarbeitet werden:
->Hämatoxylin oxidiert zu Hämatein (natürliche Reifung oder mithilfe von Oxidatinszusätzen)
->Hämatein selbts ist noch nich brauchbar, da kene grosse Ladung vorhanden
->druch Zusatz von Metallionen kommt es zur Komplexbildung zwischen Hämatein und Metallion = HämatoxylinLacke (HämateinLacke)
HE-Färbung:
Kernfärbung mit Hämatoxylin:
Wie funktioniert nun die Färbung, nachdem der Hämatoxylinlack hergestellt wurde?
-> was spielt eine entscheidende Rolle?
Der Farblack bindet mit negativ geladenen Phosphatgruppen Komplexe.
-> der pH spielt eine Massgebende Rolle pH : 2-3 = Selektiv für die Kerne
HE-Färbung:
Bläueln:
-Was geschieht wiso?
-Voraussetzung
-Was bewirkt es?(3)
->Wechel von rot zu blau
->hämtoxylinlack pH unter 3 erscheint rot, über drei erscheint blau
-> das Leitungswasser mus Neutral oder leicht alkalisch sein
-stabilisiert Farbstoff
-Stoppt Differenzierung
-HCL wird entfernt
HE-Färbung:
Gegenfärbung:
-mit welchem Farbstoff?
-wieso?
-was ist das Ziel?
-> mit Eosin
->ermöglicht Unterscheidung von Bindegewebe, Muskulatur und EC's
-> drei Klare Farbvarianten :
-Bindegewebe und Muskulatur -> unterschiedliche Rottöne
-EC's -> leichtend Rot
HE-Färbung:
Gegenfärbung:
Was wird wie angefärbt?
regressiv oder Progressiv?
->NH3+ der Proteini mithilfe von saurem Farbstoff(-) in saurer lösung
->regressiv: Differenzierung in Alk
HE-Färbung:
Gegenfärbung:
Der Ideale pH-Wert des Eosins liegt bei 4.5-5.
Was passiert bei zu saurem pH?
Entladung des Farbstoffes
HE-Färbung:
Kernfärbung :
Der ideal pH liegt beim Hämalaun zwischen 2-3
-was gescghieht wenn der pH höher ist?
Er verliert seine Selektivität für die Kerne ->es werden auch andere Strukturen angefärbt wie Proteine
Welche zwei weiteren Kernfarbstoffe gibt es und zu welchen Verwendungszwecken?
Weigerts Eisenhämalaun:
-Kerne werden braun-schwarz gefärbt
-bedeutend grössere Säure (gegen anschliessend gebrauchte saure Farblösungen)
Kernechtrot:
-einfache und sichere Kernfärbung
-vorallem als kontrastreiche Gegenfärbung bei der Versilberung
-
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Wieso ist die korrekte Kernfärbung so wichtig?
Für die Beurteilung von gesundem und pathologischem Gewebe:
-die Mänge und Verteilung des Cromatins und Nukleolen gibt Auskunft über die Zellaktivität
--> Tumordiagnostik
Auf welche zwei Arten ist es möglich, Kerne anzufärben?
1)
mit positiv geladenen/kationischen/basischen Farbstoffen -->bindung an Phosphatgruppe COO-
2)
mit negativ geladenen/anionischen/sauren Farbstoffen --> bindung an die positiv geladenen Histone (nukleoproteine)
Was sist Chromatin?
Chromatin ist das Material, aus dem die Chromosomen bestehen. Es handelt sich um einen Komplex aus DNA und speziellen Proteinen, von denen wiederum etwa die Hälfte Histone sind.
Was ist wie geladen?
HE-Färbung:
in welchen zwei Schritten und mit was läuft sie ab?
Kernfärbung:
Anfärbung mit Hamalaun -> Diefferenzieren in HCL -> Bläueln in Leitungswasser
Differenzieren:
-> In Eosin (sauerer FB in sauerer Lösung)
HE-Färbung:
Kernfärbung mit Hämatoxylin:
Herstellung und Zusammensetzung von Hämatoxylin
(3Schritte)
Hämatoxylin ist ein Naturfarbstoff, welcher aus dem Campechebaum gewonnen wird. Er muss noch weiterferarbeitet werden:
->Hämatoxylin oxidiert zu Hämatein (natürliche Reifung oder mithilfe von Oxidatinszusätzen)
->Hämatein selbts ist noch nich brauchbar, da kene grosse Ladung vorhanden
->druch Zusatz von Metallionen kommt es zur Komplexbildung zwischen Hämatein und Metallion = HämatoxylinLacke (HämateinLacke)
HE-Färbung:
Kernfärbung mit Hämatoxylin:
Wie funktioniert nun die Färbung, nachdem der Hämatoxylinlack hergestellt wurde?
-> was spielt eine entscheidende Rolle?
Der Farblack bindet mit negativ geladenen Phosphatgruppen Komplexe.
-> der pH spielt eine Massgebende Rolle pH : 2-3 = Selektiv für die Kerne
HE-Färbung:
Bläueln:
-Was geschieht wiso?
-Voraussetzung
-Was bewirkt es?(3)
->Wechel von rot zu blau
->hämtoxylinlack pH unter 3 erscheint rot, über drei erscheint blau
-> das Leitungswasser mus Neutral oder leicht alkalisch sein
-stabilisiert Farbstoff
-Stoppt Differenzierung
-HCL wird entfernt
HE-Färbung:
Gegenfärbung:
-mit welchem Farbstoff?
-wieso?
-was ist das Ziel?
-> mit Eosin
->ermöglicht Unterscheidung von Bindegewebe, Muskulatur und EC's
-> drei Klare Farbvarianten :
-Bindegewebe und Muskulatur -> unterschiedliche Rottöne
-EC's -> leichtend Rot
HE-Färbung:
Gegenfärbung:
Was wird wie angefärbt?
regressiv oder Progressiv?
->NH3+ der Proteini mithilfe von saurem Farbstoff(-) in saurer lösung
->regressiv: Differenzierung in Alk
HE-Färbung:
Gegenfärbung:
Der Ideale pH-Wert des Eosins liegt bei 4.5-5.
Was passiert bei zu saurem pH?
Entladung des Farbstoffes
HE-Färbung:
Kernfärbung :
Der ideal pH liegt beim Hämalaun zwischen 2-3
-was gescghieht wenn der pH höher ist?
Er verliert seine Selektivität für die Kerne ->es werden auch andere Strukturen angefärbt wie Proteine
Welche zwei weiteren Kernfarbstoffe gibt es und zu welchen Verwendungszwecken?
Weigerts Eisenhämalaun:
-Kerne werden braun-schwarz gefärbt
-bedeutend grössere Säure (gegen anschliessend gebrauchte saure Farblösungen)
Kernechtrot:
-einfache und sichere Kernfärbung
-vorallem als kontrastreiche Gegenfärbung bei der Versilberung
