Examen Serologie Fragenkatalog

Indikatorsystem für Komplement-Bindungs-Reaktion

Hämagglutinations-Hemmungstest

Antikörper-Nachweis 

- Hemmung der Hämagglutination von Erythrozyten 

Hämaglutinine (produziert von bestimmten Bakterien und Viren, Verklumpen das Blut -> Körper bildet Ak)

Patientenserum + Hämagglutinine 

-> Ak vorhanden (positiv) -> fangen Hämagglutinie ab -> Erys agglutinieren nicht (Knopfbildung) 

-> Ak nicht vorhanden (negativ) -> Hämagglutinine verklumpen Erys (Trübung; Vernetzung)

HAH-Titer: geometrische Verdünnungsreihe Hämagglutienierede Einheit (Virus) mit Patientensera -> Kehrwert der letzten Serumverdünnung die noch zu einer vollständigen Hämagglutinationshemmung führt

Serum-Langsam-Agglutination

Nachweis von Antikörpern

Patientenserum wird mit Ag gemischt

positiv: Netzartige Agglutination (gleichmäßiger Bodensatz)

negativ: Absinken des Ag auf den Boden (Knopfbildung)

-> Sichtbarmachung durch Farbstoffe (z.B. Safranin)

- Titerbestimmung über Serumverdünnungsreihe

Ak bzw. Ag Nachweis

- Ag/Ak nach Infektion/Impfung

- maternale Ak

falsch positiv:

- Kreuzreaktion verwandter Erreger

- unspezifische Reaktion

- kein Ak/Ag in Probe vorhanden (Patient gesund)

falsch negativ:

- unterhalb der Nachweisgrenze

- Testantigen entspricht nicht dem Feldstamm

- Imuntoleranz des Patienten

- Mängel bei Testdurchführung

Positiv Kontrolle: sicher positives Testserum 

Negativ Kontrolle: sicher negatives Testserum

Leerwert: Ohne Serumprobe oder Kontrollserum

Antikörper + Enzym

- ELISA

- Imunhistochemie

- Immunoblot

- FACS

- Imunfluoreszenz

diagnostische Methode der Immunhistochemie

- Betrachtung im Fluoreszenzmikroskop

indirekt:

- primär Antikörper bindet an Antigen (z.B. Virusablagerungen im Gehirn)

- sekundär Antikörper mit Flurochrom bindet an primär Antikörper

direkt:

- primär Antikörper mit Flurochrom bindet an Antigen

Nachweis erregerspezifischer Serumantikörper

- Größenauftrennung der Proteine (SDS-PAGE (Sodium-Dodecly-Sulfat-Poly-Acrilamid-Gel-Elektrophorese)

- Transfer auf Nitrocellulose-Membran

- Inkubation der Membran mit Ag der Nachzuweisenden erregerspezifischen Antikörper

- anschließende Inkubation mit Enzymmarkierten Ak gegen Ag

- Zugabe von Substrat und Sichtbarmachung mittels Chemilumineszenz

passive Immunisierung: direkte Gabe von erregerspezifischen Antikörpern 

-> keine Immunantwort -> keine Gedächtniszellen

Subunit Vakzine

aktive Immunisierung: Gabe von Tot- oder Lebendimpfstoffen

Totimpfstoffe: abgetötete MO -> keine Vermehrung im Patienten

- meist Boosterimpfung nötig

- keine orale Gabe möglich

Lebendimpstoffe: attenuierte Erreger; avirulente Stämme oder Ausnutzung der Kreuzprotektiviät ähnlicher Errger -> Vermehrungsfähig

-> hervorrufen einer Immunantwort und Bildung von Gedächtniszellen

Zusatzstoff, der die Impfwirkung verstärken soll

- Depoteffekt und langsame Freisetzung des Ag -> längere Stimulation des Immunsystems

- Aktivierung von Makrophagen und Lymphozyten

(

Ein Adjuvanz ist ein Zusatzstoff der selbst (therapeutisch) unwirksam ist, aber bei Impfungen zum Beispiel die Wirkung (humorale und/oder zellvermittelte Immunantwort (zellvermittelte Immunität) verstärkt.  Im allgemeinen handelt es sich um Substanzen, wie z. B. Aluminiumhydroxid, Emulsionen von Mineralölen,Saponine, Siliciumverbindungen, Thioharnstoff oder um Endotoxine gramnegativer und Exotoxinegrampositiver Bakterien.

Der Wirkungsmechanismus des Adjuvans beruht einerseits darauf, daß das Antigen in dem Adjuvans in einer Emulsion vorliegt und deswegen langsam und kontinuierlich freigegeben wird (Depot-Effekt), andererseits darauf, daß die in manchen Adjuvantien auftretenden mikrobiellen Produkte zu einer unspezifischen Aktivierung der Makrophagen führen.)

- Ag dringt in Körper ein

- Kontakt mit dendritischen Zellen -> Erkennung als körperfremd

- Aufnahme des Ags durch dendritische Zellen

- dendritische Zelle wandert in Lymphknoten ein 

- Präsentation von Ag-Bestandteilen mittels MCH II-Molekülen 

- Erkennung durch T-Helferzellen -> aktivieren B-Zellen

- Differenzierung der B-Zelllen zu Plasmazellen -> Ak Produktion

- Elimination des Ag

Erstkontakt: Elimination und Bildung von Gedächtniszellen

Zweitkontakt: Reaktivierung der Gedächtniszellen -> schnellere Elimination des Ag

- relatives Maß für die Antikörperkonzentration im Testserum

- Ermittlung durch fortlaufende Verdünnung -> Kehrwert der höchsten Verdünnungsstufe, bei der noch eine positive Reaktion nachweisbar ist

Nachweis von spezifischen Serumantikörpern bzw. Antigenen

Bindung des komplementären Ag/Ak an Latexpartikel und Zugabe des Patientenserums

Positiv: Antikörper und Antigen vernetzen miteinander (Agglutination) -> sichtbares Präzipitat -> Bestimmung im Photometer

- qualtitativer Ag-/Ak-Nachweis

Doppeldiffusion: Antigen und Antikörper diffundieren im Agargel aufeinander zu und bilden ein Präzipitat in der Äquivalenzzone 

Agargel mit Stanzlöchern

Ag-Nachweis mittels Enzym gekoppelter Antikörper

- beschichtete Mikrotiterplatte (prim. Ak )

- Serum (gesuchtes Ag)

- sek. Antikörper mit Enzym ( gegen Ag )

- Zugabe Substrat -> Farbumschlag

Nachweis von Antikörpern

- Ag- beschichtete Platte

- Ak aus der Probe konkurrieren mit markierten ELISA-Antikörpern

-> Konkurrieren um Bingung an Ag (natürliche Ak haben eine höhere Affinität) 

- Zugabe von Enzymsubstrat nach Waschschritten -> Farbumschlag

positiv: kein Farbumschlag (native Ak ohne Enzym)

negativ: Farbumschlag ( markierte ELISA-Antikörper)

Teilgebiet der Immunologie, welches sich mit den Antigen-Antikörper-Reaktionen im Blutserum auseinander setzt. 

Serum = Zell- und firbinfreier Überstand

- venöse Blutabnahme (am besten 10-14 Tage nach Impfung/Infektion, 2-3 Tage nach Wiederholungsimpfung) in Serumröhrchen (Keine Antikoagulation! Gerinnungsverstärker)

- ruhen lassen, bis Probe vollständig geronnen

- zentrifugieren und Zellfreien Überstand abpipettieren -> Serum

Je nach Fragestellung

10-14 Tage nach Infektion/nach Impfung

2-3 Tage nach Wiederholungsimpfung

Gegen Antigen gerichteter Antikörper (Ag-spezifischerRezeptor)

Immunität durch cytotoxische T-Zellen und natürliche Killerzellen

Immunität durch im Plasma lösliche Moleküle (Antikörper, Komplementsystem)

Untereinheit eines Antigens, dass von einem Rezeptor erkannt werden kann.

Ein Antigen besitzt mehrere Epitope

(Konformationsepitope und lineare Epitope

Das Paratop (Fab-Abschnitt) eines Antikörpers bindet spezifisch nach dem Schlüssel-Schloss-Prinzip an das Epitop eines Antigens

Monomer

Dimer

Pentamer

Antikörper des Muttertieres, welche in Utero diaplazentar und postnatal laktogen über das Kolostrum an das Jungtier weitergegeben werden.

- Antikörper die nach Bindung die Infektiösität eines Antigens hemmen/aufheben können

- Antikörper binden an die Oberfläche des Antigens und verhindern so weitere Schritte des Infektionszyklus

- Antikörper, die nach Bindung die Zellyse einleiten können

- Antikörper bindet an Antigen und aktiviert Komplement

- Antikörper bindet an Antigen und wird durch NK-Zellen erkannt

IgG (wird verzögert gebildet und bleibt lange erhalten)

Reaktion von Antikörper mit löslichem Antigen führt zur Bildung unlöslicher Immunkomplexe die ausfallen

Reaktion von Antikörper mit unlöslichen Partikeln, die zur Aggregation (Verklumpung) der Partikel führt

Agglutination von Latexpartikeln durch Antikörper die mit gesuchten Antigen beschichtet sind (auch umgekehrt möglich)