Examen Serologie Fragenkatalog
Examen VMTA 2018
Examen VMTA 2018
Was ist das hämolytische System?
Indikatorsystem für Komplement-Bindungs-Reaktion
Erläutern Sie den Begriff HAH.
Hämagglutinations-Hemmungstest
Erläutern Sie das Funktionsprinzip des HAH.
Antikörper-Nachweis
- Hemmung der Hämagglutination von Erythrozyten
Hämaglutinine (produziert von bestimmten Bakterien und Viren, Verklumpen das Blut -> Körper bildet Ak)
Patientenserum + Hämagglutinine
-> Ak vorhanden (positiv) -> fangen Hämagglutinie ab -> Erys agglutinieren nicht (Knopfbildung)
-> Ak nicht vorhanden (negativ) -> Hämagglutinine verklumpen Erys (Trübung; Vernetzung)
HAH-Titer: geometrische Verdünnungsreihe Hämagglutienierede Einheit (Virus) mit Patientensera -> Kehrwert der letzten Serumverdünnung die noch zu einer vollständigen Hämagglutinationshemmung führt
Erläutern Sie den Begriff SLA.
Serum-Langsam-Agglutination
Erläutern Sie das Funktionsprinzip des SLA.
Nachweis von Antikörpern
Patientenserum wird mit Ag gemischt
positiv: Netzartige Agglutination (gleichmäßiger Bodensatz)
negativ: Absinken des Ag auf den Boden (Knopfbildung)
-> Sichtbarmachung durch Farbstoffe (z.B. Safranin)
- Titerbestimmung über Serumverdünnungsreihe
Welche Urachen gibt es für ein positives serologische Testergebnis?
Ak bzw. Ag Nachweis
- Ag/Ak nach Infektion/Impfung
- maternale Ak
falsch positiv:
- Kreuzreaktion verwandter Erreger
- unspezifische Reaktion
Welche Ursachen gibt es für ein negatives serologische Testergebnis?
- kein Ak/Ag in Probe vorhanden (Patient gesund)
falsch negativ:
- unterhalb der Nachweisgrenze
- Testantigen entspricht nicht dem Feldstamm
- Imuntoleranz des Patienten
- Mängel bei Testdurchführung
Welche Kontrollen benötigt man um einen ELISA auswerten zu können?
Positiv Kontrolle: sicher positives Testserum
Negativ Kontrolle: sicher negatives Testserum
Leerwert: Ohne Serumprobe oder Kontrollserum
Was ist ein Konjugat (ELISA)?
Antikörper + Enzym
Welche Techniken zum Antikörper Nachweis beruhen auf einer Markierung von Antigen oder Antikörper?
- ELISA
- Imunhistochemie
- Immunoblot
- FACS
- Imunfluoreszenz
Beschreiben Sie das Funktionsprinzip der Immunfluoreszenz.
diagnostische Methode der Immunhistochemie
- Betrachtung im Fluoreszenzmikroskop
indirekt:
- primär Antikörper bindet an Antigen (z.B. Virusablagerungen im Gehirn)
- sekundär Antikörper mit Flurochrom bindet an primär Antikörper
direkt:
- primär Antikörper mit Flurochrom bindet an Antigen
Beschreiben Sie das Funktionsprinzip des Immunoblots.
Nachweis erregerspezifischer Serumantikörper
- Größenauftrennung der Proteine (SDS-PAGE (Sodium-Dodecly-Sulfat-Poly-Acrilamid-Gel-Elektrophorese)
- Transfer auf Nitrocellulose-Membran
- Inkubation der Membran mit Ag der Nachzuweisenden erregerspezifischen Antikörper
- anschließende Inkubation mit Enzymmarkierten Ak gegen Ag
- Zugabe von Substrat und Sichtbarmachung mittels Chemilumineszenz
Erklären Sie das Prinzip der Impung.
passive Immunisierung: direkte Gabe von erregerspezifischen Antikörpern
-> keine Immunantwort -> keine Gedächtniszellen
Subunit Vakzine
aktive Immunisierung: Gabe von Tot- oder Lebendimpfstoffen
Totimpfstoffe: abgetötete MO -> keine Vermehrung im Patienten
- meist Boosterimpfung nötig
- keine orale Gabe möglich
Lebendimpstoffe: attenuierte Erreger; avirulente Stämme oder Ausnutzung der Kreuzprotektiviät ähnlicher Errger -> Vermehrungsfähig
-> hervorrufen einer Immunantwort und Bildung von Gedächtniszellen
Was ist ein Adjuvants?
Zusatzstoff, der die Impfwirkung verstärken soll
- Depoteffekt und langsame Freisetzung des Ag -> längere Stimulation des Immunsystems
- Aktivierung von Makrophagen und Lymphozyten
(
Ein Adjuvanz ist ein Zusatzstoff der selbst (therapeutisch) unwirksam ist, aber bei Impfungen zum Beispiel die Wirkung (humorale und/oder zellvermittelte Immunantwort (zellvermittelte Immunität) verstärkt. Im allgemeinen handelt es sich um Substanzen, wie z. B. Aluminiumhydroxid, Emulsionen von Mineralölen,Saponine, Siliciumverbindungen, Thioharnstoff oder um Endotoxine gramnegativer und Exotoxinegrampositiver Bakterien.
Der Wirkungsmechanismus des Adjuvans beruht einerseits darauf, daß das Antigen in dem Adjuvans in einer Emulsion vorliegt und deswegen langsam und kontinuierlich freigegeben wird (Depot-Effekt), andererseits darauf, daß die in manchen Adjuvantien auftretenden mikrobiellen Produkte zu einer unspezifischen Aktivierung der Makrophagen führen.)
Beschreiben Sie die Entwicklung der natürlichen Immunantwort.
- Ag dringt in Körper ein
- Kontakt mit dendritischen Zellen -> Erkennung als körperfremd
- Aufnahme des Ags durch dendritische Zellen
- dendritische Zelle wandert in Lymphknoten ein
- Präsentation von Ag-Bestandteilen mittels MCH II-Molekülen
- Erkennung durch T-Helferzellen -> aktivieren B-Zellen
- Differenzierung der B-Zelllen zu Plasmazellen -> Ak Produktion
- Elimination des Ag
Erstkontakt: Elimination und Bildung von Gedächtniszellen
Zweitkontakt: Reaktivierung der Gedächtniszellen -> schnellere Elimination des Ag
Was ist ein Antikörpertiter?
- relatives Maß für die Antikörperkonzentration im Testserum
- Ermittlung durch fortlaufende Verdünnung -> Kehrwert der höchsten Verdünnungsstufe, bei der noch eine positive Reaktion nachweisbar ist
Beschreiben Sie den Mechanismus der Latexagglutination.
Nachweis von spezifischen Serumantikörpern bzw. Antigenen
Bindung des komplementären Ag/Ak an Latexpartikel und Zugabe des Patientenserums
Positiv: Antikörper und Antigen vernetzen miteinander (Agglutination) -> sichtbares Präzipitat -> Bestimmung im Photometer
Beschreiben Sie den Agargeldifussionstest nach Outcherlony.
- qualtitativer Ag-/Ak-Nachweis
Doppeldiffusion: Antigen und Antikörper diffundieren im Agargel aufeinander zu und bilden ein Präzipitat in der Äquivalenzzone
Agargel mit Stanzlöchern
Was ist ein Sandwich-ELISA?
Ag-Nachweis mittels Enzym gekoppelter Antikörper
- beschichtete Mikrotiterplatte (prim. Ak )
- Serum (gesuchtes Ag)
- sek. Antikörper mit Enzym ( gegen Ag )
- Zugabe Substrat -> Farbumschlag
Wie funktioniert ein kompetitiver ELISA?
Nachweis von Antikörpern
- Ag- beschichtete Platte
- Ak aus der Probe konkurrieren mit markierten ELISA-Antikörpern
-> Konkurrieren um Bingung an Ag (natürliche Ak haben eine höhere Affinität)
- Zugabe von Enzymsubstrat nach Waschschritten -> Farbumschlag
positiv: kein Farbumschlag (native Ak ohne Enzym)
negativ: Farbumschlag ( markierte ELISA-Antikörper)
Was ist ein Antigen?
Ein Stoff (Protein), der in der Lage ist eine spezielle Immunantwort an Antigen-Rezeptoren zu verursachen.
Definieren Sie den Begriff Serologie.
Teilgebiet der Immunologie, welches sich mit den Antigen-Antikörper-Reaktionen im Blutserum auseinander setzt.
Serum = Zell- und firbinfreier Überstand
Wie gewinnt man Blutserum?
- venöse Blutabnahme (am besten 10-14 Tage nach Impfung/Infektion, 2-3 Tage nach Wiederholungsimpfung) in Serumröhrchen (Keine Antikoagulation! Gerinnungsverstärker)
- ruhen lassen, bis Probe vollständig geronnen
- zentrifugieren und Zellfreien Überstand abpipettieren -> Serum
Welches ist der beste Zeitpunkt für die Entnahme von Blut für eine serologische Untersuchung?
Je nach Fragestellung
10-14 Tage nach Infektion/nach Impfung
2-3 Tage nach Wiederholungsimpfung
Was ist ein Immunglobulin?
Gegen Antigen gerichteter Antikörper (Ag-spezifischerRezeptor)
Was versteht man unter zellulärer Immunität?
Immunität durch cytotoxische T-Zellen und natürliche Killerzellen
Was versteht man unter humoraler Immunität?
Immunität durch im Plasma lösliche Moleküle (Antikörper, Komplementsystem)
Skizzieren Sie den Verlauf der humoralen Immunität nach einer Infektion.
Was ist ein Epitop?
Untereinheit eines Antigens, dass von einem Rezeptor erkannt werden kann.
Ein Antigen besitzt mehrere Epitope
(Konformationsepitope und lineare Epitope
Beschreiben Sie die Antigen-Antiköper-Interaktion.
Das Paratop (Fab-Abschnitt) eines Antikörpers bindet spezifisch nach dem Schlüssel-Schloss-Prinzip an das Epitop eines Antigens
Skizzieren Sie den Aufbau eines IgG-Moleküls
Monomer
Skizzieren Sie den Aufbau eines IgA-Moleküls.
Dimer
Skizzieren Sie den Aufbau eines IgM-Moleküls.
Pentamer
Was sind maternale Antikörper, wann und wo findet man Sie?
Antikörper des Muttertieres, welche in Utero diaplazentar und postnatal laktogen über das Kolostrum an das Jungtier weitergegeben werden.
Was versteht man unter neutralisierenden Antikörpern?
- Antikörper die nach Bindung die Infektiösität eines Antigens hemmen/aufheben können
- Antikörper binden an die Oberfläche des Antigens und verhindern so weitere Schritte des Infektionszyklus
Was versteht man unter lysierenden Antikörpern?
- Antikörper, die nach Bindung die Zellyse einleiten können
- Antikörper bindet an Antigen und aktiviert Komplement
- Antikörper bindet an Antigen und wird durch NK-Zellen erkannt
Welche Antikörper weist man in der Refel in serologischen Verfahren nach?
IgG (wird verzögert gebildet und bleibt lange erhalten)
Beschreiben Sie den Mechanismus der Präzipitatipn?
Reaktion von Antikörper mit löslichem Antigen führt zur Bildung unlöslicher Immunkomplexe die ausfallen
Beschreiben Sie den Mechanismus der Agglutination.
Reaktion von Antikörper mit unlöslichen Partikeln, die zur Aggregation (Verklumpung) der Partikel führt
Beschreiben Sie den Mechanismus der Latexagglutination-
Agglutination von Latexpartikeln durch Antikörper die mit gesuchten Antigen beschichtet sind (auch umgekehrt möglich)
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Was ist ein Antigen?
Ein Stoff (Protein), der in der Lage ist eine spezielle Immunantwort an Antigen-Rezeptoren zu verursachen.
Definieren Sie den Begriff Serologie.
Teilgebiet der Immunologie, welches sich mit den Antigen-Antikörper-Reaktionen im Blutserum auseinander setzt.
Serum = Zell- und firbinfreier Überstand
Wie gewinnt man Blutserum?
- venöse Blutabnahme (am besten 10-14 Tage nach Impfung/Infektion, 2-3 Tage nach Wiederholungsimpfung) in Serumröhrchen (Keine Antikoagulation! Gerinnungsverstärker)
- ruhen lassen, bis Probe vollständig geronnen
- zentrifugieren und Zellfreien Überstand abpipettieren -> Serum
Welches ist der beste Zeitpunkt für die Entnahme von Blut für eine serologische Untersuchung?
Je nach Fragestellung
10-14 Tage nach Infektion/nach Impfung
2-3 Tage nach Wiederholungsimpfung
Was ist ein Immunglobulin?
Gegen Antigen gerichteter Antikörper (Ag-spezifischerRezeptor)
Was versteht man unter zellulärer Immunität?
Immunität durch cytotoxische T-Zellen und natürliche Killerzellen
Was versteht man unter humoraler Immunität?
Immunität durch im Plasma lösliche Moleküle (Antikörper, Komplementsystem)
Skizzieren Sie den Verlauf der humoralen Immunität nach einer Infektion.
Was ist ein Epitop?
Untereinheit eines Antigens, dass von einem Rezeptor erkannt werden kann.
Ein Antigen besitzt mehrere Epitope
(Konformationsepitope und lineare Epitope
Beschreiben Sie die Antigen-Antiköper-Interaktion.
Das Paratop (Fab-Abschnitt) eines Antikörpers bindet spezifisch nach dem Schlüssel-Schloss-Prinzip an das Epitop eines Antigens
Skizzieren Sie den Aufbau eines IgG-Moleküls
Monomer
Skizzieren Sie den Aufbau eines IgA-Moleküls.
Dimer
Skizzieren Sie den Aufbau eines IgM-Moleküls.
Pentamer
Was sind maternale Antikörper, wann und wo findet man Sie?
Antikörper des Muttertieres, welche in Utero diaplazentar und postnatal laktogen über das Kolostrum an das Jungtier weitergegeben werden.
Was versteht man unter neutralisierenden Antikörpern?
- Antikörper die nach Bindung die Infektiösität eines Antigens hemmen/aufheben können
- Antikörper binden an die Oberfläche des Antigens und verhindern so weitere Schritte des Infektionszyklus
Was versteht man unter lysierenden Antikörpern?
- Antikörper, die nach Bindung die Zellyse einleiten können
- Antikörper bindet an Antigen und aktiviert Komplement
- Antikörper bindet an Antigen und wird durch NK-Zellen erkannt
Welche Antikörper weist man in der Refel in serologischen Verfahren nach?
IgG (wird verzögert gebildet und bleibt lange erhalten)
Beschreiben Sie den Mechanismus der Präzipitatipn?
Reaktion von Antikörper mit löslichem Antigen führt zur Bildung unlöslicher Immunkomplexe die ausfallen
Beschreiben Sie den Mechanismus der Agglutination.
Reaktion von Antikörper mit unlöslichen Partikeln, die zur Aggregation (Verklumpung) der Partikel führt
Beschreiben Sie den Mechanismus der Latexagglutination-
Agglutination von Latexpartikeln durch Antikörper die mit gesuchten Antigen beschichtet sind (auch umgekehrt möglich)
Welche Klassen Immunglobuline kennen Sie?
- IgG (langlebig, wird meist in ELISAs nachgewiesen)
- IgM (Erstkontaktantikörper, Pentamer)
- IgA (Schleimhautantikörper, Dimer)
- IgD (geringe Mengen, Differenzierung von B-Zellen)
- IgE (aktiviert Mastzellen, Allergieantikörper)
Beschreiben Sie den Aufbau einer geometrischen Verdünnungsreihe.
- fortgesetzte Verdünnung um Faktor x
Beschreiben Sie den Aufbau einer logarithmischen Verdünnungsreihe.
geometrische Verdünnungsreihe (fortgesetzte Verdünnung) um den Faktor 10
Was versteht man unter einem falsch positiven Ergebniss?
das tatsächliche Ergebniss ist negativ, der Test zeigt aber ein positives Ergebnis
(z.B.: Tier hat keine Ak gegen Krankheit x, der test weist aber Ak nach)
Was versteht man unter einem falsch negativen Ergebnis?
Das Ergebnis ist positiv, der Test zeigt aber ein negatives Ergebnis an.
(z.B.: Tier hat Ak gegen Krankheit x, der Test weist diese nicht nach)
Erläutern Sie den Begriff Sensitivität eines diagnostischen Test.
Empfindlichkeit
Die Sensitivität beschreibt wie hoch die Konzentration der nachzuweisenden Substanz sein muss um noch ein Ergebnis zu erzielen.
Je sensitiver ein Test desto kleinere Konzentrationen z.B. an Antigen wird für ein positives Ergebnis benötigt.
Erläutern Sie den Begriff Spezifität eines diagonstischen Tests.
Zuverlässigkeit
Eignung bei gesunden Tieren kein falsch positives Ergebniss zu liefern
Was versteht man unter Prävalenz?
Häufigkeit einer Krankheit in einer Population zu einem bestimmten Zeitpunkt
Was versteht man unter aktiver Immunität?
Körper bildet selbst adaptive Effektorzellen nach Kontakt mit Antigen
Tritt nach Infektion/Impfung auf
Was versteht man unter passiver Immunität?
Antikörper nicht selbst vom Körper gebildet bedingen die Immunität
z.B. maternale Antikörper, passive Immunisierung
Erläutern Sie den Begriff ELISA.
Enzym
Link (vermittelter)
Immuno (Immuno)
Sorbent (Anreicherung)
Assay (Test)
Erläutern Sie das Funktionsprinzip des ELISA.
Antigen/Antikörper an fester Phase (z.B. Mikrotiterplatte) gebunden
Nachweis über Enzymmarkierte Antikörper/Antigene
katalysierter Farbumschlag eines Substrates
photometrisch darstellbar
Erläutern Sie den Begriff KBR.
Komplement-Bindungs-Reaktion
Erläutern Sie das Funktionsprinzip der KBR.
Komplementsystem: System aus Plasmaproteinen, welche gelöst und zellgebunden vorliegen -> Abwehr von Mikroorganismen
- Nutzung des Systems zum Antikörper-Nachweis
1. Reaktion: Antigen + Testserum + Komplement
-> Ag-Ak-Komplexe (Antikörper im Testserum vorhanden) + Komplement verbraucht
oder
-> kein Ak im Testserum -> Komplement noch verfügbar
2.Reaktion: Ery-Antikörper-Komplex + Produkt von Reaktion 1
-> Ery-Lyse nach Komplementbindung -> Trübung -> negativ (kein Antikörper in Testserum)
oder
-> keine Lyse, wenn Komplement zuvor verbraucht wurde -> Knopfbildung -> positiv (Antikörper in Testserum)
Welche Kontrollen werden in der KBR benötigt?
- Serumkontrolle (Überprüfung ob das Serum ohne Zugabe eines Ag die Bindung des Komplement verhindert)
- Antigenkontrolle (keine Reaktion bei Verwendung anderes Antigenmaterials)
- Komplementkontrolle (Überprüfung ob geeignete Menge an Komplement eingesetzt wurde
- Ambozeptorkontrolle (Überprüfung der Ambozeptorfunktion)
- positiv Kontrolle (sicher positives Serum)
- negative Kontrolle (sicher negatives Serum)
Was ist ein Ambozeptor?
Ein Antikörper der gegen ein Antigen auf der Oberfläche von Erys gerichtet ist
(Spezifischer (hämolysierender) Antikörper mit zwei haptophoren Gruppen als Verbindung zwischen Antigen und Komplement)
Was ist das hämolytische System?
Indikatorsystem für Komplement-Bindungs-Reaktion
Erläutern Sie den Begriff HAH.
Hämagglutinations-Hemmungstest
Erläutern Sie das Funktionsprinzip des HAH.
Antikörper-Nachweis
- Hemmung der Hämagglutination von Erythrozyten
Hämaglutinine (produziert von bestimmten Bakterien und Viren, Verklumpen das Blut -> Körper bildet Ak)
Patientenserum + Hämagglutinine
-> Ak vorhanden (positiv) -> fangen Hämagglutinie ab -> Erys agglutinieren nicht (Knopfbildung)
-> Ak nicht vorhanden (negativ) -> Hämagglutinine verklumpen Erys (Trübung; Vernetzung)
HAH-Titer: geometrische Verdünnungsreihe Hämagglutienierede Einheit (Virus) mit Patientensera -> Kehrwert der letzten Serumverdünnung die noch zu einer vollständigen Hämagglutinationshemmung führt
Erläutern Sie den Begriff SLA.
Serum-Langsam-Agglutination
