Labor
MiBi
MiBi
Kartei Details
| Karten | 22 |
|---|---|
| Sprache | Deutsch |
| Kategorie | Medizin |
| Stufe | Universität |
| Erstellt / Aktualisiert | 11.06.2015 / 12.06.2015 |
| Weblink |
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Gramfärbung
- Ziel
- Verfahren
- Aussehen
- Dauer
Ziel: DD gram- und gram+
Verfahren
- (blaue) basische Anilinfarbstoffe binden an Substanzen im Cytoplasma von Bakterien
- Stabiliserung über Jod-Jodkali-Beizung
- gram- gefärbte Bakterien lassen sich durch Alkohol wieder entfärben, gram+ ist für den Jod-Farbstoffkomplex undruchlässig.
- die entfärbten gram- Bakterien werdenen durch eine Gegenfärbung mit Fuchsin dargestellt
Aussehen
- gram+ blauviolett
- gram- rot
Dauer
- 5min
Methylenblaufärbung
Bakterien: blau
Schleimkapseln: zartrosa
Körperzellen: blaugrün
Dauer: 30s
Neisser-Färbung
- Ziel
- Aussehen
Ziel: Polkörperchen (Babes-Erns'sche Körperchen) der Diphteriebakterien werden angefärbt
Aussehen: Polkörperchen dunkelblau, Zelleib gelbbraun
Ziehl-Neelsen-Färbung
- Ziel
- Aussehen
- Verfahren
- Dauer
Ziel: Nachweis von säurefesten Stäbchen --> Tbc
Aussehen: säurefeste Stäbchen erscheinen zartrosa bis rot auf blauen Untergrund
Verfahren
- reich an Lipiden, daher geringe Permeabilität für Farbstoffe und Entfärbungsmittel
- mit aggressiver Behandlung --> Ziehl-Neelsen-Färbung wird Farbstoff gebunden und kann durch Säuren nicht ohen weiteres extrahiert werden
- nichtsäurefeste Formen werden nachträglich durch Gegenfärbung dargestellt
Dauer: ca 30min
Blutagarplatte
Endoplatte
Blutagarplatte
- Nährbouillon, Agar, Schafblut
- dient als Nährboden für Bakterien, die Bestandteile des Blutes für ihr Wachstum benötigen.
- es können hämolysierende Eigenschaften bestimmt werden
- Es gibt auch Blutagar mit AB's
Endoplatte:
- Selektivmedium zur Anzucht von Enterobakterien.
- Enterobakterien verwerten den enthaltene Lactose und produzieren dabei Aldehyde und organische Säuren.
- Die entstandenen Aldehyde setzen Fuchsin aus dem Fuchsin-Sulfit-Komplex frei, wobei sich die Kolonien tiefrot/violett färben
- Kolonien des E.coli zeigen zusätzlich noch einen charakteristisch gelblich-grünen Glanz, wenn das Fuchsin auskristallisiert. (--> Fuchsinglanz)
- gram+ Bakterien werden durch Natriumsulfit und Fuchsin am Wachstum gehindert.
Hemmstofftest
Nachweis von hemmenden Substanzen im Urin (zB. AB nach Therapie)
Urin wird aufh Agarplatte getropft, worauf Sporenbildner sind. Bei Hemmstoffen im Urin bilden sich Hemmhöfe.
McConkey-Agar
CLED-Agar
Eintauchkultur zum Nachweis von Enterobakterien und gram+
McConkey-Agar --> rot: Enterobakterien
CLED --> gelbgrün: Enterobakterien und gram+
Koagulasereaktion
- Verfahren
...
Optochin-Test
Strept. pneumoniae ist empfindlich gegenüber Optochin und kann so von anderen vergrünenden Streptokokken abgegrenzt werden.
Hemmhof um das Optochinplättchen --> >10mm: sensibel
Ammenphänomen bei H.influenza
H. influenza benötigt die Faktoren X und V zum Wachstum. V-Faktor kann vom Staph. aureus auf gleicher Platte produziert werden, sodass H. influenza wachsen kann.
Resistenzen von Pneumokokken gegen Penicillin G
Meningitis Nachweis geht nicht über...
kein typischer respiratorischer Infektionserreger ist...
- 2%
- AK-Nachweis
- Staph. epididimis
Dilutionsmethoden
Verdünnungsreihe des Antibiotika.
damit kann MHK (minimale Hemmkonzentration) abgeschätzt werden. (Konzentration des Röhrchens, wo erstmals kein Wachstum mehr auftritt.)
Bestimmung MBK
MBK - minimale bakterizide Konzentration
von der AB-Verdünnungsreihe wird vom letzten trüben und den nächsten sechs klaren Rähren eine Subkultur angelegt. (Auf einer Platte an den Rand im Uhrzeigersinn impfen). Befinden sich die Keim im Zustand der Bakteriostase ist in der Subkultur erneut ein Wachstum zu beobachten.
MBK entspricht der niedrigsten AB-Konz, die nach Überimpfung in eine Subkultur keine Koloniebildung mehr aufweist.
Ermittlung der MNK ist nur bei Ansatz in einem flüssigen Medium möglich ??
Welche chemische Reaktion geschieht bei der Spaltung von Beta-Laktamasen?
Welche Konzentration ist höher - MBK oder MHK?
Welcher Agar wird zur Sensibilitätstestung verwendet?
Hydrolyse
AB-Konz. der MBK ist höher als die der MHK. In der Patientenversorgung wird nicht mit MBK gearbeitet, da es zu lange dauert. MHK in der Patientendiagnostik
Blukultur nicht!
chemische Reaktion des anti-alpha-Toxins
B. fragilis - Aerobier oder Anaerobier
Wie lange dauert es, eine Kultur für Mycobakterium tuberculosis herzustellen?
Neutralisation
strikter Anaerobier
2-6 Wochen
Natürliche Resistenz / Primäre Resistenz
klinische Resistenz
Eine Bakterienart ist gegenüber einem AB natürlich resistent, wenn eine Wirkungslücke besteht und die natürliche Population der Substanz gegenüber klinisch resistent ist.
Klinisch resistent heisst, dass ein Bakterienstamm in vitro erst bei einer so hohen AB-Konz inhibiert wird, die mit einer grossen Wahrscheinlichkeit des Therapieversagens assoziiert ist. (toxisch, Konzmenge im Körper)
Natürliche Resistenzen
- gram-
- Enterobakterien
gram-
- Primärresistenz gegen Vancomycin und Teicoplanin (Glykopeptide), Clindamycin (Lincosamide)
- Glykopeptide können die äussere Membran von gram- Bakterien nicht durchdringen
Enterobakterien
- Primärresistenz gegen Penicillin G
- Penicillin kann die äusseren Porine der LPS-Membran von Enterobakterien nicht durchdringen
- viele Enterobakterien - bspw. Klebsielle species: Primärresistenz gegen Aminopenicillin (Ampicillin, Amoxicillin) --> Grund: Penicillinase
Beta-Laktamasen
Bakterien, die BetaLaktamasen bilden sind resistent gegenüber Betalaktam-AB
Enzyme werden in den periplasmatischen Raum bzw. extrazellulär ausgeschieden und hydrolysieren dort die Betalaktamringe der AB.
Betroffene AB
- Aminopenicilline (Ampicillin, Amoxicillin)
- ggf. Cephalosporine der Grupe 1 (Cefazolin)
55% der E.coli haben diese Resistenzen erworben
ESBL
extended spectrum BetaLaktamasen = Beta-Laktamasen mit erweitertem Wirkungsspektrum
im Allgemeinen die Enzyme der gram- Enterobacteriaceae
ESBL besitzen die Fähigkeit auch Cephalosporin der Gruppe 3a und 3b zu inaktivieren.
Können Beta-Laktamase-Inhibitoren (Clavulansäure, Sulbactam Tazobactam) gehemmt werden.
Erreger
- E.coli
- Klebsiella pneumoniae
- Proteus mirabilis
- Serratia spp.
plasmidkodiert
Carbapenemasen
Beta-Laktamasen mit erweitertem Wirkungsspektrum, die zusätzlich noch Carbapenem spalten --> SuperGau
Hydrolysieren nahezu jedes Beta-LaktamAB einschliesslich der Carbapeneme.
grosse Herausforderung --> strenge Überwachung, Isolation
Modifizierter Hodge-Test (MHT)
- ob wirklich Carbapenemase vorliegt
- sensibler e.coli wird auf Agarplatte ausgestrichen.
- Carbapenem-Plättchen --> Hemmhöfe
- Verdächtiger e.coli zwischen den Carbapenemen ausstreichen, falls Carbapenemase vorhanden, kann e.coli entlang diesem Streifen wachsen --> Herz/Apfelform ist positiv
Veränderung der Penicillin-bindenden Proteine (PBP)
Veränderung oder zusätzliche Bildung von PBP's, die eine verringerte Affinität gegenüber Beta-LaktamAB aufweisen.
va. bei Staph aureus: Bildung von PBP2a führt zur Methicillin-/Oxacillinresistenz (MRSA). dies führt zur Resistenz gegenüber allen Betalaktam-AB einschliesslich der Beta-Laktamaseinhibitoren, die durch das veränderte PBP2a nicht mehr an Zielstrukturen binden können.
Diagnostik für Kultur von MRGN oder MRSA
MRGN: Rektum
MRSA: Rachen- und Nasenabstrich
