Molekulare Zellbiologie II (Zytologie)

· \(^{\space \mathrm{Auge}}_{0.2 \space mm} \space \xrightarrow{\mathrm{x} \space 1000} \space ^{\space \space \space \mathrm{LM}}_{200 \space nm} \space \xrightarrow{\mathrm{x} \space 1000} \space ^{\space \space \space \mathrm{EM}}_{0.2 \space nm} \)

· sichtbar im LM: Pflanzenzelle > Tierzelle > Bakterium

· sichtbar im EM: Virus > Ribosom > globuläres Protein > kleines Molekül (> Atom)

· Vergrösserung: um wieviel ein Bild vergrössert wurde

· Auflösung: Mass, wie gut kleinste Details eines Bildes unterschieden werden können

· Solange die Auflösung eines Bildes begrenzt ist, gibt eine Vergrösserung des Bildes keine neue Information

· Objekte, die kleiner sind als die halbe Wellenlänge des sichtbaren Lichts, sind nicht sichbar im LM

· praktisch ist die Auflösung auch durch die Linsenqualität limitiert

→ mit dem LM sind keine Objekte < 200nm sichtbar

· Objekte, die kleiner sind als die halbe Wellenlänge der Elektronen, sind nicht sichbar im EM

· Elektronen haben eine 1000x kleinere Wellenlänge als sichtbares Licht

→ mit dem EM sind keine Objekte < 0.2 nm sichtbar

· helle Lichtquelle, die mit einer Sammellinse auf die Probe gebündelt wird

· sehr dünne Probe, die lichtdurchlässig ist

· Optik um das Bild auf das Auge zu fokussieren

· Gewebe entnehmen → fixieren → dehydrieren → clearing → in Paraffin einschliessen → zerschneiden → einfärben

· Fixation: alle biochemischen Reaktionen stoppen / Probe vor Zerfall schützen / normalerweise mit Aldehyden

· Dehydratation: Alkoholbäder um Wasser zu entziehen

· Clearing: Xylolbad um Alkohol zu entfernen

· Einbettung in Paraffin: Härten des Gewebes / ermöglicht die Probe in dünne Scheibe zu zerschneiden

· Zerschneidung: mittels Microtom / 2 - 10 µm für LM / 40 - 100 nm für EM

· Einfärbung: Rehydratation in verdünnten Alkoholbädern / Zugeben von Färblösungen

· erste Antikörper binden an Mikrotubuli

· zweite Antikörper, die mit Fluoreszenzfarbstoff verbunden sind, können an erste Antikörper binden