Molekularbiologie fortgeschritten
Abkürzung für zellbiologische Agitatoren, zellbiologische Prozesse, Allgemeines zur Zellbiologie und Molekularbiologie
Abkürzung für zellbiologische Agitatoren, zellbiologische Prozesse, Allgemeines zur Zellbiologie und Molekularbiologie
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Lernkarten
Smc
Smc-2 + Smc-4 +Kleisin = DNA-Klammer
NAP-1
- =Histonchaperon
- belädt Nucleosomen mit H2A-H2B Dimeren
CAF-1
- =Histonchaperon
- belädt Nucleosomen mit H3-H4 Tetrameren
menschliche DNA-Länge in Basenpaaren
Länge des größten menschlichen Gens in Basenpaaren
Exonanteil von Gesamtgenom (Mensch)
Anteil von nicht-Exon aber konservierte Sequenz an Gesamtgenom
3,5%
LINE
- durchschnittliche LINE-Länge: 6 bis 8 • 103bp
- Long INterspersed Elements
- häufig im eukaryotischen Genom
- RNA pol II Promotor innerhalb LINE -> RNA, außerdem reverse Transkriptase, oftmals auch Endonuklease (bspw. RNAse H)
- "The reverse transcriptase has a higher specificity for the LINE RNA than other RNA, and makes a DNA copy of the RNA that can be integrated into the genome at a new site."
SINE
- durschnittliche SINE-Länge: 100-400 bp
- Short INterspersed Elements repräsentieren revers-transkribierte RNA Moleküle
- Retrotransposon ohne eigene reverse Transkriptase
- die meisten = Alu-Elemente
PCNA
- = proliferating cell nuclear antigen
- eukaryotische sliding clamp
- N-Terminus und C-Terminus topologisch identisch -> drei Stück = Ringstruktur
Pol alpha
- =Primase der Replikation
- -> RNA Primer
Pol delta
- = eukaryotische DNA-Polymerase
- -> Verzögerungsstrangsynthese
Pol epsilon
- = eukaryotische DNA-Polymerase
- -> Leitstrangsynthese
RNAse H
- = Exonuklease
- entfernt RNA Primer zwischen Okazakifragmenten
MCM2-7
- = eukaryotische Helicase
- spaltet Doppelstrang mechanisch, ATP-abhängig
- wandert auf Leitstrang 3'-5'
- prokaryotische wandert auf Verzögerungsstrang 5'-3'
- Test nach Laufrichtung: Einzelstrang mit zwei unterschiedlich langen Einzelstrang Stücken an den Enden -> Auftrennung nach Größe
Pre-RC (eukaryotisch)
- Cdc6, Cdt1 und MCM2-7 binden an ORC (origin recognition complex) -> Cdt wird phosphoryliert und degradiert, Cdc ebenfalls weg -> ORC +MCM2-7 = Pre-RC
- assembliert in G1
- ORC bleibt immer gebunden, Cdc6 und Cdt1 werden durch Cdk regulierte Phosphorylierung abgebaut bzw. inhibiert + Phosphorylierung von ORC = Regulation des Zellzyklus
CMG
- = Pre-Rc + GINS + Cdc45
- -> GINS und Cdc45 ermöglichen Bindung von ssDNA durch MCM2-7
- binden der ssDNA stimuliert ATPase-Aktivität von MCM2-7
RPA
= eukaryotisches SSBP
allgemeine Mutationsrate in Basenpaar pro Basenpaaren
Erkennung von Fehlpaarung -> Stück des neuen Strangs wird ausgeschnitten
500 bis 1000 Nukleotide/Sekunde
Geschwindigkeit der Replikationsgabel in E.coli
Geschwindigkeit der Replikationsgabel in Eukaryoten
Schäden an DNA pro Tag und Zelle
1,5 % an codierender DNA...
... ist der DNA-Reparatur gewidmet.
Depurinierungen pro Tag und Zelle
Deaminierungen an Cytosin pro Tag und Zelle
Pol eta
- = DNA-Polymerase
- Transläsionreplikation
Ku
- Heterodimer
- Erkennung von dsEnden
DnaP Kinase 3
Brückenbildung zwischen Enden eines dsBruchs
ATR
- ATRIP befördert ATR zu gestockter Replikationsgabel
- ATR reguliert Antwort auf UVStress, Replikationsgabelstop
ATM
- Wahrnehmung von dsBrüchen
- bspw. ->Einleitung vom Phosphorylierungskaskade -> phosphoryliertes p53 =TF für p21=Inhibitor von S/G1-cdk und S-cdk
- primärer Sensor, rekrutiert über MRN Komplex zum dsBruch
Transkriptionsinitiation
- PIC= Präinitiationskomplex
- prokaryontisches Holoenzym (DNA-Pol, sigma-Faktoren) der Transkriptionsinitiation am Promotor
- auch eukaryotisch: TBP +TFIIB + Komplex aus Pol II, TFIIF + TFIIE + TFIIH -> Phosphorylierung der CTD: Elongation; Mediatorkomplex reguliert TFIIH und Pol III
- Regulation durch Promotorstärke
- Sigma70 consensus promotor (E.coli) (für sigma 70 ;) )
- Tatabox (= RNA pol II Bindestelle), core promotors (=TF-Bindestellen) auch downstream (Eukaryoten): BRE, INR (Initiator der Transkription), upstream und downstream enhancer
Epigenetik
- Histoncode:
- K9-Methylierung -> Kompaktierung
- K9-Acetylierung + K14-Acetylierung + K4-Methylierung -> Öffnung
- H2A.Z, polydA:dT-Spuren -> offene Promotoren
- Methylierung ~ Expressionhemmung, 5-Azacidin= Cytosinanalogon -> DNA-Methyltransferasehemmung
- Imprinting
- durch long ncRNA reguliert
- ca. 100 menschliche Gene
- -> monoallelische Expression, Dosiskompensation
- über Methylierung, CTCF-Rekrutierung (-> Chormatinstruktur) (über Methylierung)
- PcG Protein -> aus (Chromatinkompaktierung, H2A-Ubiquitylierung), trxG Proteine -> an (Acetylierung, Nukleosomremodellierung); Aufrechterhaltung differenzierter Zellen u.m.
X-Inaktivierung
- Zygote: beide aktiv, maternaler Imprint auf XM verhindert Xist, maternaler Rnf12-Überschuss -> XP-Inaktivierung: Xistproduktion = Ausfall der Rnf12-Produktion, Rnf12-Überschuss nimmt ab
- Blastozyste (ICM): XM aktiv (maternaler Imprint weg) ->Tsix -> inhibiert Xist -> XP aktiv
- Embryo: beide aktive -> Rnf12-Überschuss -> zufällige X-Inaktivierung
- Rex1
- reprimiert Xist
- aktiviert Tsix, das über Signalinterferenz Xist hemmt
- macroH2A, DNAmethylierung = Inaktivierung
hnRNA-Proteine
- binden an ESS von prä-mRNA und inhibieren Spleißen
- verhindern ungewollte Sekundärstruktur
- pendelnde Proteine, hauptsächlich im Kern
- RRM-, KH-, RGG-Domänen
- Bsp: PTB und nPTB
SR-Proteine
- binden an ESE der prä-mRNA -> ermöglichen (alternatives) Spleißen
- RRM-Domäne, RS-Domäne (Arg,Ser Wdh)
- in speckles im Kern, pendelnd
- aktivieren mRNA-Export
snoRNA
- Geleit für Bearbeitungsprozess von rRNA, t-RNA, snRNA:
- BoxC/D => 2'OH-Methylierung
- BoxH/ACA => Pseudouridin
- Assemblierung von snoRNPs, Modifizierung von snRNA in Cajalbodies (Coilin=Markerprotein)
THO
- bindet an CBC und verhindert DNA/RNA Hybridisierung
- befördert Transkriptionselongation
- RNAhelicase UAP56 bindet (zusammen: Trex)
CBC
- Komplex aus CBP20-80 der an die 5'Cap der mRNA bindet
- wichtig für mRNAExport und Elongation
UAP56
bildet mit THO complex eine Einheit und fungiert als RNA-Helicase