c2b_default

Biotechnologie 3.3

DNA-Extraktion (Plasmide und Phagen) Klonierung der DNA-Moleküle

DNA-Extraktion (Plasmide und Phagen) Klonierung der DNA-Moleküle

11
5.0 (1)
A. A.
Lernen
A. A.
Diese Lernkarten bieten einen Überblick über biotechnologische Verfahren zur Isolierung und Reinigung von DNA, insbesondere von Plasmiden und Phagen-DNA, auf Berufsschulniveau. Sie behandeln Techniken wie Zentrifugation, Alkalidenaturierung und Dichtegradienten-Zentrifugation, sowie die Unterschiede zwischen chromosomaler DNA und Plasmiden. Die Karteikarten sind ideal für Studierende und Berufsleute in der Biotechnologie, die sich mit molekularbiologischen Labortechniken vertraut machen möchten.
Karten
11
Lernende
5
Sprache
Deutsch
Kategorie
Biologie
Stufe
Berufslehre
Erstellt / Aktualisiert
24.12.2013 / 09.10.2017
  • 1  / 11

Lernkarten

Ablauf der DNA-Isolierung (Fotsetzung)

5. Denaturierung der chromosomalen DNA durch Zugabe von NaOH zum Puffer ⇒ pH-Wert steigt auf pH 12

6. schnelle Neutralisiation der Lösung mit Kalium-Acetat ⇒ denaturierte chromosomale DNA fällt zusammen mit Proteinen, Zellresten etc. aus, Plasmid-DNA renaturiert und bleibt in Lsg.

7. Trennung der Zellreste und denaturierter Bakterien-DNA von Plasmid-DNA (in wässriger Lsg.) durch Zentrifugation

8. evtl. Reinigung der Plasmid-DNA durch Phenol-Extraktion

9. Aufkonzentrierung der Lsg. über z.B.: Alkoholfällung ⇒ reine Plasmid-DNA

Phagen (Definition)

Viren, die Bakterien befallen, und diese im Verlauf der Infektion lysieren

Extraktion von Phagen-DNA

1. Bakterienkultur wird mit Phagen infiziert und herangezogen ⇒ Phagen zerstören (lysieren) Bakterienzellwände und werden freigesetzt.

2. Abbau der bakteriellen DNA durch DNasen, Trennung der übrig gebliebenen Bakterienbestandteilen von den Phagenpartikel durch Zentrifugation

3. Phagen-DNA muss aus Phagenkopf (Capsid) extrahiert werden: Phenol-Extration ⇒ Denaturierung der Capsid-Proteine, Phagen-DNA wird freigesetzt

4. Fällung der Phagen-DNA aus der wässrigen Phase über z.B. Alkoholfällung