HiZy 1

•Hämatein muss oxidiert werden -> Zugabe von chemischen Oxidationsmitteln und Reifung an Luft (Hämatoxylin reift im Laufe seines Lebens)

•mit "Beizmittel" (Aluminiumionen), komplexieren --> um mit dem Gewebe verbinden

•Hämatoxylin im Komplex mit Aluminium ist positiv geladen und kann mit negativ geladenen Zellbestandteilen, wie den Nukleinsäuren im Zellkern, reagieren à diese färben sich daraufhin blau - Al Komplex mit Hämatoxylin/Hämatein heisst Hämalaun

Xylol
Xylol
Alkohol
Alkohol
Alkohol
Spühlen mit Wasser
Hämatoxylin
Spühlen mit Wasser
Differenzierung
Spühlen mit Wasser
Bläuung
Spühlen mit Wasser
Alkohol
Eosin
Alkohol
Alkohol
Xylol
Xylol

Gieson: eisen als Beizmittel
Progressive Färbung (schichten übereinander)

Zytoplasma, Muskulatur, Epithel – gelb
Schleim, Hyalin, Kolloid, Amyloid – rot,gelb

Um Farbstoff an Material zu binden
Bouinsche Lösung am besten bei Trichomfärbung

Elastica-van-Gieson Färbung
Kollagen knallrot

absence of evidence is not  evidence of absence

Detektieren eines  Antigens im Gewebe durch spez. Antikörper

sichtbarmachen durch konjugat

Zytoplasma

Zellkern

Zellmenbran

Zytoskelett

ECM

Primärantikörper  (direkte IHC)

               polyklonal (erkennen mehrere Epitope)

                monoklonal (erkennen einzelnes Epitop) 

Sekundärantikörper  (indirekte IHC)

Rekombinante Antikörper (in vitro mit Genen hergestellt)

1) Fixierung – „damit alles an seinem Platz bleibt“

2) Antigenrückgewinnung - um die Verfügbarkeit von Proteinen für den Nachweis zu erhöhen

3) Blockieren - um störende Hintergrundsignale zu minimieren

4) Antikörpermarkierung und -visualisierung

alkalische Phosphatase, HRP (Horseradish peroxidase)

DAB Diaminobenzidin, AEC Amino Ethylcarbazol

Äussere und innere Oberfläche

Grenzfläche

Schutzfunktion

Regulation Stofftransport

Passive/Aktive Aufnahme

Produktion von Sekreten

Funktioneller Bestandteil (fast) aller Drüsen
Produzieren Sekrete (Schleim, Schweiss, Tränen, Enzyme..)
Basalmembran unterhalb

Dicht nebeneinander(Tight junctions, Adhärenskontakte, Desmosomen, Gap junctions)
keine Blutgefässe

Platte Zellen: Zellen breiter als hoch –

Isoprismatische (kubische) Zellen: Zelle gleich hoch wie breit –

 Hochprismatische Zellen: Zelle höher als breit

Einschichtig: eine Zellschicht auf Basalmembran –

Mehrschichtig: mehrere Zellschichten, nur die unterste Zellschicht auf Basalmembran –

Mehrreihig: Alle Zellen auf Basalmembran, aber nicht alle erreichen apikale Seite des Epithels, Kerne verschiedener Zellen liegen in verschiedenen Höhen

Basallamina (BL)  und  Lamina fibroreticularis (Lfr)

Epithelgewebe

Bindegewebe

Muskelgewebe

Nervengewebe

•   das Stützgerüstgewebe des Körpers und seiner inneren Organe, die mehr oder weniger spezialisiert sein können
•   Weniger spezialisiert: reich an extrazellulärer Matrix, die andere höher geordnete Gewebe und Organe umgibt
•    Spezialisiert: reich an extrazellulärer Matrix, repräsentiert ein hochgeordnetes Gewebe: Knorpel, Knochen, Dermis, Submukosa
• Embryonales, Faseriges und Spezialisiertes Bindegewebe
• Extrazelluläre Matrix ECM:
  Fasern (Kollagen, retikulär,  und elastisch)
  Grundsubstanz

Probenannahme - Zuschnitt - Einbetten - Ausblocken - Schneiden - Färben/Eindecken

durch Fixierung und histologische Technik wiederholbare Abbildung der Wirklichkeit

mech. Schäden
Autolyse (Zersetzung)
Schrumpfung/Schwellung
Rindenbildung
Fixierungsniederschläge (Schmutz, Haare, Risse, Aggregate)

Probegewinnung und Transport
 

-Probenahme und Zuordnung
-Fixierung
-Einbettung und Ausblocken
-Schneiden
-Histologische Färbung

Befund, Übermittlung, Archivierung

-Biopsien (Gewebeproben)

-Kürettagematerial (Geschabsel)

-Exstirpation (Wurzel)

-Totalexstirpation

-Resektion

1. Einsenderichtlinien
2. Vorbehandlung (Aufschneiden,..)
3. Fixiermittel (Formalin), gekühlt und nativ
4. Menge Fixiermittel und Einsendegefäss
5. Etiketten auf Probegefäss, Einsendeschein
6. Probetransport (Zeit, Temp, Feuchtigkeit) - Schnellschnitt (Kurier,Rohrpost) innert 20min
 

-Schnellschnitt
-Immunhistochemie
-Zellen aus Gewebe gezüchtet werden sollen
-Enzymaktivität soll nachgeweisen werden
-RNA Nachweis
-DNA gewinnung
-spezielle Fixierung
-Präparat zugross

Informiert über Vorbehandlung (Geöffnet, Eingeschnitten, Fixiermittel, Menge und Gefäss, Etikette)

Informiert über Anmeldung und Ansprechpartner

Hämatoxylin-Eosin Färbung HE
Papanicolaou-Färbung PAP
Giemsa
Pappenheim-Färbung MGG
Elastica-van Gleson EvG
Goldner
Periodsäure-Schiff-Reaktion PAS
Berliner Blau Fe
Kongorot
Von Kossa
Ziehl-Neelsen

Zell und Gewebestruktur zu erhalten

Anforderung Fixiermittel: Autolyse, Fäulnis, Verwesung stoppen
Struktur und Zellkomponenten erhalten/nachweisen von Inhaltsstoffen
Gewebe durchdringen und härten
reproduzierbar

Phosphatgepuffertes Formalin -> routine Fixierung

Bouinsche Lösung -> Gewebe mit anschliessender Trichrom-Färbung

1.Zuschnitt
     a.Fixieren, Einbetten
     b.Freezing
2. Schneiden
3. Färbung
4. Eindeckeln
5. Beurteilung/Archivierung

Zuschnitt - Fixierung - Entkalkung

> entscheidend für die Qualität der Gewebemorphologie und Färbung

Zuschnitt: vorsichtig, nicht austrocknen!!, anpassen auf Histokasette, Behälter 20x grösser Wählen

Fixierung: bewahrt Zellen, stoppt degenerativer Prozess und bakterielle Zersetzung, Schützt;  Probe max. 4mm dick, 20:1 Fixiermittel:Gewebe,  Fixierzeit beachten, Qualität Fixiermittel

Entkalkung: weichmachen um Paraffinblock schneiden zu können, zu lange zerstört Morphologie, zu wenig erschwert das Schneiden, EDTA bei IHC und ISH Assay, 

Zweck: Wasser in Gewebe mit Medium  ersetzten

Prozess: Wasser mit Alkohol ersetzten, Xylol löst Alkohol, Paraffin ersetzt Xylol

1. Entwässerung (in Alkohol ziehen 70-100% aufsteigend)
2. Klärung (zwischenlösung da Alkohol und Paraffin nicht mischbar sind, 
3. Infiltration

Dehydrants (Ethyl, Methyl, Isopropyl, Butyl, Aceton)

Solvents (Xylen, Toluol, Benzen, Chloroform, Limonen, Aliphatic)

Infiltration Media (Gelatine, Resins, Paraffin)

Schnittdicke für Lichtmikroskopie: 1-10um (0.5-60um)

Schnittdicke für Elektronenmikroskopie: 0.5um-50-80nm 

Schlittenmikrotom

Rotationsmikrotom

Schliffart A - stark plankonkav (für weiches oder geschäumtes Material)

Schliffart B - plankonkav (für härteres Material, uneingebettet, frisch)

Schliffart C - keilförmig (härteres Material, Allgebrauchsmesser für Paraffinarbeit)

Schliffart D - hobelmesserförmig (härteres Material, sehr stabil)