Diagnostische Hämatologie

• Fibrinogen ist ein wichtiger Vorläufer des Fibrins. Erhöhte Werte weisen auf Gallenabflussstörung, Krebs, Entzündungen hin.
• Potentieller erhöhter Verbrauch

Die Probe wird mit einem Überschuss von Thrombin und Calciumchlorid inkubiert, Gerinnung hängt darum vom Fibrinogengehalt ab.

Die Resultate weisen auf Fibrinogenstörung hin

Anwendung:
D-Dimere sind ein Risikomarker bei venöser Thromboembolie. D-Dimere werden bei der Fibrinolyse durch Plasmin vom Fibrinnetz abgespalten.

Messmethode:
Immunoassay mit Antikörper gegen Quervernetzeregion der D-Dimere

Interpretation:
Erhöhungen weisen auf eine aktive Fibrinolyse bei thromboembolischen Situationen hin.
Ausschluss von thromoembolischen Erkrankungen

• Transfusionsbehanldungen
• Vermeidung und Klröung von Transfusionszwischenfällen
• Transplantationen
• Schwangerschaftsvorsorge
• Gerichtsmedizin
• Diagnostik von Neugeborenenerythoblastosen

Vier Gene auf Chromosom 9; Allele A1, A2, B, 0
H-Gene auf Chromosm 19 codieren H-Transferasen und bilden H-Antigene

Liegen Allele A1, A2, B vor werden die H-Antigene über A1, A2, B Transferasen zu Antigenen A1, A2 und B (auf den Ec)

Liegt Allel 0 homozygot vor bleiben die H-Antigene bestehen (H-Antigene) Blutgruppe 0

• Blutgruppe A: Anti-B AK
• Blutgurppe B: Anti-A AK (A1 und A2)
• Blutgruppe 0: Anti-A und Anti-B
• Blutgruppe AB: Keine AK

Isoagglutinine sind IgM-Antikörper im AB0-System, es gibt Isoagglutinin Anti-A und Anti-B. Sie kommen komplemetär zur Blutgruppe im Blut vor. IgM AK sind im Stande Quervernetzungen zu machen und so das Blut zu verklumpen. IgG AK sind Isohämolysine (da sie die Ec lysieren).

Sie sind der grund für agglutinierende Transfusionsreaktionen bei Transfusin falscher Blutgruppen.

Allel D (vorhanden positiv oder nicht negativ) auf Locus 1 Chromosom 1
bildet Rhesus-Antigen

Allele C,c,E,e auf Locus 2

Antikörper werden selten natürlich gebildet, sondern nach Immunisierung mit Antigen (meistens IgG)

IgG passieren die Plazenta und lysieren dort Ec mit Rhesus-D-Antigen

Bestimmung der Blutgruppen Antigene

• Testlösung mit Antikörper (Isoagglutinin) zum Beispiel Anti-A
• Erythrozytensuspension zugeben
• Lösung zentrifugieren
• Über Lichtquelle aufschütteln
• Agglutionation oder homogene Mischung

Gegenbestimmung der Isoagglutinine

• Testlösung mit Ec (Blutgruppen A1, A2, B, 0)
• Serum des Patienten

Autokontrollen

• Serum und Ec des Patienten dürfen nicht agglutinieren (Verwechslung!)

• In einem Röhrchen befinden sich Agarose-Kugeln mit entsprechenden AK auf der Oberfläche der Säule.
• Ungebundene Ec können während der Zentrifugation durch die Säule dringen.
• Gebundene agglutiniere Ec können nicht durch die Säule dringen und bleiben an der Oberfläche.

Blutgruppen-Antigene und Isoagglutinine werden getestet (Serum und Ec)

Der direkte Cooms-Test (Anti-human-globulin-test) weist bereits in vivo sensibilisierte Ec nach, die mit IgG Antikörpern und nicht mit IgM Antikörpern anti-human-antikörper sensibilisiert wurden.

Diese wurden gebildet bei:

• Neugeborenenhämolyse
• Transfusionszwischenfälle
• Positiven Autokontrollen
• Positiven Isoagglutininbestimmungen
• Positiven Rhesuskontrolle

Das Coomb-Serum bindet mit den sensibilisierten Ec und der Komplex agglutiniert.

Der indirekte Coomb-Test wird abgewendet wenn:

• Verträglichkeitsprobe
• Antikörper-Suchtest
• Antikörper-identifikation
• Antikörpernachweis (Schwangerschaft)

Die IgG-Antikörper werden in vitro an die Ec gebunden.

So können Antikörper oder Antigene nachgewiesen werden, die im regulären Test nicht erfasst werden können.

Mit Coomb-Substrat werden die sensibilisierten Ec agglutiniert.

Das Type and Screen ist ein Test-schema und steht für:

• Type: Typisieren der Blutgruppe und Rhesus
• Screen: Suche nach relevanten, irregulären Antikörper

Es beinhaltet die Tests:

• Antikörpersuchtests; mit typisierten Ec
  Wenn positiv; Verträglichkeitstest (indirekter Coombs-Test)
• Blutgruppenbestimmung
• Direkter Coombtest
  Hinweis auf bereits sensibilisierte Ec

• Bei der Diagnose von Leukämie; Oberflächenantigene der Leukozyten (junge haben andere als alte)
• Nachweis minimaler Resterkrankung (Restkrebszellen z.B. Leukämie)
• HIV-Therapie-Status: T-Helferzellen quantifizieren
• Quantifizieren von Stammzellen bei Transplantationen

FACS steht für Fluorescence Activated Call Sorting, ist Teil der Durchflusszytometrie

Die Zellen eines Körpers werden mittels fluoreszenzmarkierter Monoklonaler Antikörper, die nach CD Nummern differenziert werden gebunden und dann mittels mechanisierter Zelldifferenzierung durch Lichtstreuung erfasst. Sie werden hydrodynamisch fokussiert. Laserstrahl regt den Fluoreszenzfabrstoff an und man erkennt die Farbe die für das Oberflächenantigen steht.

• Kalibration:
  Justierung des Geräts und Fluoreszenzkompenation mit künstlichen fluoreszenzmarkierten Partikeln
• Inkubationsansätze:
  ca 500'000 Zellen werden zusammen mit zwei verschiedenen monoklonalen AK inkubiert. Ec werden lysiert
• Messung:
  Streulichteigenschaften dienen zur Vordifferenzierung
  Vorwärtsstreulicht: Grösse der Zelle
  Seitwärtsstreulicht: Intrezelluläre Granularität

Zellen werden einzeln durch Messkapilare gesaugt
Zwei CD-Marker (zwei Fluoreszenzfarbstoffe) werden miteinander verglichen

• Interpretation:
  Zellen können differenziert werden (Wegen FSC und SSC)
  Zellen können nach Populationen differenziert werden (monoklonale AK)
  Relative und Absolute Quantifizierung möglich

Eryhtorzyten Indices:

MCH= Mittleres corpuskuläres Hämoglobin
Mittlerer Hämoglobingehalt eines einzelnen Erythrozyten

MCV= Mittleres corpuskuläres Volumen
Durchschnittliches Volumen eines einzelnen Erythrozyten

MCHC=Mittlere corpuskuläre Hämoglobinkonzentration

EVB= Erythrozytenverteilungsbreite (Wie unterschiedlich gross die Zellen sind)

• Hämatokrit (Verhältnis Erythrozyten und Flüssigkeit)
• Hämoglobin
• Erythrozyten Indices: MCH, MCV, EVB, MCHC
• Zellzahl: Leukozyten, Erythrozyten, Thrombozyten, Leukozyten Differenzierung

Zentrifugation von antikoagulierten Blut in Kapillare, Abschätzung des Prozentanteils 

• Blutprobe wird verdünnt und die Ec werden lysiert.
• Sodium Lauryl Sulfate (SLS) bindet an Globinteil des Hb
• Hämeisen wird oxidiert 3+ und SLS bindet an Fe3+
• Photometrische Messung

Durch das Zählen der Zellen in einer Zählkammer können Zellzahlen pro Volumen ermittelt werden. Die Quadrate bilden mit einem kleinen Spalt unter der Zählkammer ein Volumen, das die Berechnun zulässt.

Impedanzmessung

• Widerstandsänderung
• Der Körper enthält eine kapillare Öffnung, durch die das Blut gesaugt wird
• Durchtritt der Zellen ändern die Leitfähigkeit
  • Grosse Zellen führen zu grossen Änderungen, kleine zu kleinen

Laserstreulichtmethode

• Hydrodynamische Zellfokusierung
• Schwächung des Laserstrahls ist ein Mass für die Zellgrösse

Laser-Doppelwinkelstreulicht

• Direkte Messung von Zellvolumen und Hb-Konzentration
• Exakte Messung von MCV und MCHC
• Thrombozyten
• Retikulozyten (Anfärbung mit Oxazin 750) Ec starke anfärbung
• Leukozytenzählung auf dem Peroxidase Kanal
  H₂O₂ + 4-chloro-1-naphtol reagiert mit Peroxidase bildet dunklen Niederschlag
• Baso-Kanal

• EDTA (für Lagerstabilität der Thrombozyten)
• Citrat (Antikoagulanz durch Calcium-Ionen entzug)
• Lithium-Heparin

Probenentnahme (Präanalytik Entnahmetechnik und Lagerung beachten)

Auftragserfassung

Automatisiertes Blutbild (vollautomatisch mit algorithmus)

Mikroskopische Differenzierung (Verteilungsmuster, rotes und weisses Blutbild)

Beurteilung (Freigabe oder nicht)

Allgemein Störungen im Knochenmark

• Störungen der Blutbildungen
• Maligne Erkrankungen des blutbildenden Systems
• Tumore
• Infekte (parasität, bakteriell)

Als Punctio sicca wird eine Knochenmarkspunktion ohne Gewinnung von Aspirat (z.B. aufgrund einer hochgradigen Fibrose) bezeichnet.

z.B. Haarzellleukämie

• Blasse Haut (v.a. Schleimhäute)
• Zunahme der Herzfrequenz
• Rasche Ermüdung
• Schwarzwerden und Schwindel nach Aufstehen

Mangel an Erythrozyten, Hömokrit oder Hämoglobin

• Eisenmangel
• Thalassämie
• chronische Krankheiten
• Bleivergiftung

• MCV < 80 fl
• MCH < 27 pg
• Ferritin (Widerspiegelt die Eisen-Reserve; Entzündung und Tumor verfälscht)
• Eisen (starke Schwankungen bei Hämolyse und Entzündung)
• Transferrin (Widerspiegelt die Eisentransport-Kapazität)

Der lösliche Transferrinrezeptor widerspiegelt die Eisenbedürfnisse der Erythroblasten

Bei einem Eisenmangel steigt sTfR bevor eus zu einem signifikanten Abfall des Hämoglobins kommt.

sTfR wird vorallem bei fester Anämie und nicht bei beginnender Anämie festgestellt

Eine Thalassmie ist auf genetische Defekte zurückzuführen, die die Hämoglobinsynthese stören.

Man unterscheidet alpha oder beta Thalassämie, je nach Kette deren Produktion betroffen ist.

Das Ungleichgewicht der Ketten führt zu einer verminderten Hämoglobinbildung

Maßgeblich ist neben der Art der Thalassämie, ob das Thalassämie-Gen homozygot oder heterozygot ausgeprägt ist. 

Wie eine Targetzelle (Target=Zielscheibe)

megaloblastisch

• Vitamin B₁₂ und Folsäuremangel

nichtmegaloblastisch

• Alkohol, Leberkrankheiten

Unter einer Linksverschiebung versteht man in der Hämatologie das vermehrte Auftreten von unreifen neutrophilen Granulozyten bzw. Granulozyten-Vorstufen im Differentialblutbild

Der Epstein-Barr-Virus nistet sich in B-Lymphozyten ein und verändert diese.

Basische Farbstoffbestandteile bilden mit sauren Zelleiweissanteilen eine Farbsalzbildung bzw. saure Farbstoffkomponenten mit basisch reagierenden Zellsubstanzen

• Die Erythrozyten sind rosa
• Kerne der Leukozyten und kernhaltige Erythrozyten rotviolett
• Eosinophile Granula ziegelrot bis rotbraun
• Basophile Granula dunkelviolett bis schwarz
• Neutrophile Granula hellviolett
• Zytoplasma der Lymphozyten hellblau
• Monozytenzytoplasma graublau

Grösse, Hb-Gehalt, Form der Ec

Basophile Granulozyten

• Blau-schwarze, grobe Granula im Zytoplasma, oft den Kern überdeckend. Kernform unregelmässig, kaum segmentiert

Eosinophile Granulozyten

• Meist sehr dicht liegende, kugelförmige, grobe rote Granula im Zytoplasma. Kern hat meist nur 2 Segmente

Neutrophile Granulozyten

• Stabkernige, segmentkernige
• Granulierung im fein, weder deutlich rot oder blau
• Kern der reifen Zelle hat 3-5 Segmente und eine grobbalkige Chromatinstruktur

Lymphozyten

• Kleine Lymphozyt: meist runden, festen Kern, schmalen blauen Zytoplasmasaum
• Grosser Lymphozyt: Kern mit lockereren Chromatinstruktur und breiteren hellblauen
• Zytoplasmasaum, häufig Azur- Granula im Zytoplasma

Monozyt

• Grösste Zelle des peripheren Blutes
• Zytoplasma grau-blau, meist mit zarter Azur- Granula, kern mit zarter Struktur, chromatinarm (rel.hell) und meist gelappt oder nierenförmig

Eine Linksverschiebung ist das Auftreten von jungen in der Entwicklungsstufe links liegende Zellen im Blut. Bei Granulozyten wird das Alter anhand der Kernform bestimmt.

• Mikroskopischer Nachweis im Blut
• MGG-Färbung oder Giemsa-Färbung
• EDTA-Blut wird verrührt und nach MGG gefärbt
• Auch immunologische Schnelltests