ZKT

Verfahren für die Analyse von Zellen und deren Sortierung in verschiedene Populationen

• Zellen in einer Suspension werden über ein Schlauchsystem durch ein Messkopf gepresst
• Zellen werden in einem laminaren Flüssigkeitsstrom so geführt, dass nur jeweils eine Zelle doe Öffnung passieren kann
• Durch die Kapillare wird ein Laser eingestrahlt
• Zellen werden dann aufgrund ihrer Eigenschaft sortiert, dadurch dass vom Laser erzeugte Streu-/ Fluoreszenzlicht detektiert wird von FSC und SSC

Zellen streuen einen Teil des Lichts welches mittels etektoren nachgewiesen wird.

Die Menge des eingestreuten Lichts korrelliert mit der Größe und Komplexität der Zelle

Beispiel: Granulozyten streuen mehr Licht da sie eine raue Oberfläche haben und in ihrem inneren viele Vesikel haben.

Vorwärtsstreulicht

Maß für die Beugung des Lichtes im flachen Winkel und hängt vom Volumen der Zelle ab.

Seitwärtsstreulicht

Maß für die Brechung des Lichtes im rechten Winkel.

Wird von der Granularität, Größe, Strucktur d. Zellkerns und Menge der Vesikel in einer Zelle beeinflusst

die zu sortierende Zellen werden umgekehrt polarisiert und im el. Feld abgelenkt.

So fallen sie ins positive Sample

Durch den DNA-Gehalt innerhalb der verschiedenen Phasen.

Kann man mit Fluoreszenzmarkierung machen z.B. mit DAPI/Propidiumiodid lagert sich zw. den Basen an

Anhand der Helligkeit wird geschaut wie viel DNA sie enthält

Mit Hilfe von AK die mit Fluoreszenzfarbstoff markiert sind um Population von Zellen zu unterscheiden

AK sind meist gegen bestimmte Oberflächenproteine der CD-Klassifizierung gerichtet

Laser mit verschiedenen Farben und verschiedene Filter werden eingesetzt

Messergebnisse mit Darstellung als Dot-Plot und Histogramm